梁幼雅，徐雪

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院1、中藥學(xué)教研室2，廣東廣州510006）

抽吸毒液對(duì)減輕家兔五步蛇傷毒性反應(yīng)的干預(yù)作用

梁幼雅1，徐雪2

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院1、中藥學(xué)教研室2，廣東廣州510006）

目的觀察抽吸毒液對(duì)減輕家兔五步蛇傷毒性反應(yīng)的干預(yù)作用并探討其作用機(jī)理。方法雄性新西蘭兔18只隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組和治療組各6只，通過(guò)家兔大腿部皮下注射致死量的五步蛇毒建立五步蛇致傷模型。治療組在皮下注射毒素后第5分鐘用毒液抽吸器(Venom extractor kit)在注射處抽吸毒液。觀察各組實(shí)驗(yàn)家兔在注射毒素前后的呼吸頻率(RR)、心率(HR)，并測(cè)定凝血酶原時(shí)間(PT)、部分活化凝血酶時(shí)間(APTT)、纖維蛋白原(FIB)，同時(shí)觀察采血后家兔的生存概率。結(jié)果模型組的PT、APTT與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)；與模型組比較，治療組的APTT顯著延長(zhǎng)(P＜0.01)，而各組FIB比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在注射毒素后30 min，模型組的RR顯著低于正常對(duì)照組(P＜0.05)，模型組RR極顯著低于治療組(P＜0.01)。與正常對(duì)照組比較，模型組和治療組在注射后即刻HR顯著上升(P＜0.01)；注射后30 min模型組的HR比正常對(duì)照組顯著上升(P＜0.05)。結(jié)論五步蛇毒致傷現(xiàn)場(chǎng)及時(shí)抽吸毒液使家兔PT、APTT顯著延長(zhǎng)，RR及HR等生命體征得到顯著改善，并能有效提高存活的概率，其機(jī)制可能與改善凝血功能、生命體征的作用相關(guān)。

抽吸毒液；五步蛇傷；毒性反應(yīng)；家兔

在野外作業(yè)、探險(xiǎn)、旅游及毒蛇養(yǎng)殖中，毒蛇咬傷事件時(shí)有發(fā)生，蛇傷已是國(guó)內(nèi)外臨床上常見(jiàn)的急重癥。蛇毒可對(duì)機(jī)體凝血機(jī)制、心血管系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)等多個(gè)系統(tǒng)產(chǎn)生毒性作用，甚至導(dǎo)致多器官功能衰竭[1]。蛇傷在處理上極為棘手，并很可能因未能得到及時(shí)有效的救治而危及生命，其中五步蛇就是常見(jiàn)的劇毒蛇之一，其毒素尤其對(duì)機(jī)體的凝血功能作用顯著[2]。目前治療蛇傷的藥物種類(lèi)很多，但是在蛇傷早期能否做及時(shí)吸出毒液是減少損害的關(guān)鍵。因此，本文利用五步蛇毒致傷家兔模型，以觀察抽吸毒液對(duì)減輕家兔五步蛇傷毒性反應(yīng)的干預(yù)作用，并探討其作用機(jī)理。現(xiàn)將本次研究結(jié)果報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器五步蛇毒凍干粉(購(gòu)自南昌俊陽(yáng)實(shí)業(yè)有限公司，批號(hào)：20121010)；毒液抽吸器(Venom extractor kit，由廣州市富宏醫(yī)療用品有限公司提供，產(chǎn)品代碼：FS-166BX)；全自動(dòng)凝血分析儀(廣東省中醫(yī)院檢驗(yàn)科，sysmex_CA7000)；心電儀(泰盟科技，BL-420E+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng))。

1.2 動(dòng)物及分組KM小鼠15只，體重18～22 g；新西蘭兔30只，體重1.8～2.2 kg，雄性，購(gòu)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[合格證號(hào)：SCXK(粵) 2008-0020]。隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、治療組三組，每組6只。正常對(duì)照組皮下注射0.5 ml生理鹽水；模型組皮下注射致死量五步蛇毒0.5 ml；治療組皮下注射致死量五步蛇毒0.5 ml+抽吸毒液。

1.3 造模根據(jù)皮下注射五步蛇毒小鼠致死劑量為100 mg/kg，推算家兔皮下注射五步蛇毒致死劑量約為36 mg/kg。在家兔大腿處注射0.5 ml致死劑量的五步蛇毒模擬五步蛇傷。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法耳緣靜脈注射各組新西蘭兔10%水合氯醛麻醉，脫去四肢膝蓋處、右后肢股、頸部兔毛。除治療組在注射后第5分鐘于近心端且距傷口5 cm左右處用止血帶結(jié)扎受傷肢體、每隔10 min松開(kāi)止血帶2～3 min同時(shí)用毒液抽吸器在受傷處反復(fù)抽吸10～15 min直至有鮮血吸出進(jìn)行吸毒操作外，各組都在皮下注射前后5 min內(nèi)，及皮下注射后第30分鐘記錄呼吸頻率(RR)、測(cè)心電圖并記錄心率(HR)，并在皮下注射后第30分鐘進(jìn)行頸動(dòng)脈采血置于枸椽酸鈉抗凝采血管中低溫保存并盡快送檢，測(cè)定凝血酶原時(shí)間(PT)、部分活化凝血酶時(shí)間(APTT)、纖維蛋白原(FIB)。觀察采血后家兔的生存概率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件單因素方差分析(ANOVA)法進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組PT、APTT、FIB比較模型組的PT、APTT與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)。與模型組比較，治療組的APTT顯著延長(zhǎng)(P＜0.01)。各組FIB比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表1。

表1 各組PT、APTT、FIB的比較(

表1 各組PT、APTT、FIB的比較(

注：與正常對(duì)照組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與模型組比較，cP＜0.05，dP＜0.01。

組別正常對(duì)照組模型組治療組FIB(g/L) 2.5±0.6 2.0±0.6 2.2±0.6 PT(s) 8.3±0.9 7.5±0.2a8.2±0.3cAPTT(s) 18.5±1.8 15.4±0.2b18.6±2.5d

2.2 各組呼吸頻率比較正常對(duì)照組與模型組、治療組注射后即刻RR比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；注射后30 min，模型組的RR低于正常組(P＜0.05)，模型組RR顯著低于治療組(P＜0.01)，見(jiàn)表2。

2.3 各組心率比較與正常對(duì)照組比較，模型組和實(shí)驗(yàn)組的HR顯著上升(P＜0.01)。注射后30 min模型組的HR比正常對(duì)照組顯著上升(P＜0.05)，模型組的HR與治療組HR比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表3。

表2 各組呼吸頻率(RR)的比較(=6，次/min)

表2 各組呼吸頻率(RR)的比較(=6，次/min)

注：與正常對(duì)照組比較，aP＜0.05，bP＜0.01。

正常對(duì)照組模型組治療組75.5±8.6 60.7±6a76.8±3.9b73.2±8.2 71.5±13.3 78±13.3 76.2±6.3 77.3±10.6 81.7±9.5

表3 各組心率(HR)的比較(，n=6，次/min)

表3 各組心率(HR)的比較(，n=6，次/min)

注：與正常對(duì)照組比較，aP＜0.05，bP＜0.01。

正常對(duì)照組模型組治療組283.3±16.9 325±12.5a316.7±27.2 282.8±22.4 305.2±10.4 309.5±31.2 283.7±21.7 338.5±18.4b339.3±40.7b

3 討論

五步蛇毒是毒蛇的毒腺中分泌出來(lái)的一類(lèi)含有多種酶類(lèi)的毒性蛋白質(zhì)，是毒蛇咬傷后引起中毒的毒性物質(zhì)。五步蛇毒按毒理學(xué)分類(lèi)可分為神經(jīng)毒素、血循毒素以及各種毒素、酶等[3]。本次研究所用的五步蛇毒是血循毒，主要包括出血毒素、溶血毒素、促凝血及抗凝血因子、心臟毒素和多種酶類(lèi)，能產(chǎn)生多方面的毒性作用，主要對(duì)血液凝固系統(tǒng)造成很強(qiáng)的毒性作用，其類(lèi)凝血酶(TLE)成分進(jìn)入血液后直接作用于纖維蛋白原，促使其變?yōu)槔w維蛋白而加速血液凝固，造成彌漫性血管內(nèi)凝血(DIC)，繼而發(fā)生纖維蛋白溶解，導(dǎo)致廣泛出血。同時(shí)五步蛇毒對(duì)心臟產(chǎn)生毒性，一是由于出血毒素導(dǎo)致多臟器出血，當(dāng)血容量嚴(yán)重不足時(shí)即可引起或加重休克、DIC及心肌損害，二是由于各種酶類(lèi)造成出血、水腫、凝血機(jī)制失調(diào)等直接或間接影響心血管系統(tǒng)功能，并且其心臟毒素對(duì)各型細(xì)胞的結(jié)構(gòu)及功能有一定的損傷，最后引起血液循環(huán)功能、腎功能障礙而致死[4-5]。以上在臨床上則表現(xiàn)為機(jī)體凝血機(jī)制失調(diào)，心悸、氣促、胸悶等心肌受損或心衰的表現(xiàn)；心電圖改變及心率改變等。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，五步蛇毒導(dǎo)致出現(xiàn)短暫的高凝血期，使PT顯著縮短、APTT極顯著縮短，F(xiàn)IB變化不顯著，經(jīng)過(guò)及時(shí)的吸毒操作使PT、APTT顯著延長(zhǎng)；五步蛇毒使呼吸逐漸抑制甚至停止，在注射后短時(shí)間內(nèi)呼吸變化不顯著，但是在注射后30 min模型組的RR顯著慢于正常對(duì)照組，而治療組的RR極顯著快于模型組；同時(shí)五步蛇毒可使HR加快，在注射后即刻HR加快，在注射后30 min模型組的HR顯著快于正常對(duì)照組，而治療組比模型組的HR稍慢但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束2 h內(nèi)模型組有4只兔子死亡，同時(shí)觀察到治療組動(dòng)物傷口的瘀青、紅腫等體征明顯輕于模型組。結(jié)果表明治療組家兔及時(shí)有效地吸出五步蛇毒對(duì)其凝血功能、生命體征及生存概率都有顯著的改善。

五步蛇毒成分復(fù)雜，毒性劇烈。臨床上，毒蛇致傷不僅對(duì)機(jī)體凝血機(jī)制產(chǎn)生破壞而導(dǎo)致機(jī)體廣泛出血，而且毒液一般經(jīng)6～8 h可擴(kuò)散到頭部、頸部、四肢和腰背部，出現(xiàn)顫栗，體溫升高，心動(dòng)加快，呼吸困難，抽搐等癥狀。如果咬傷后4 h內(nèi)得不到有效治療，則最后因心力衰竭或休克死亡[1]?？梢?jiàn)五步蛇毒進(jìn)入人體后對(duì)機(jī)體產(chǎn)生嚴(yán)重?fù)p害且來(lái)勢(shì)急、發(fā)展快，因此被此類(lèi)毒蛇咬傷后，及時(shí)的救治至關(guān)重要。已有報(bào)道蛇傷后及時(shí)地拔罐抽吸毒液可有效降低毒素在體內(nèi)的濃度，貫通血管，為血液和毒素排出體外創(chuàng)造條件[6]，是一個(gè)有效的現(xiàn)場(chǎng)急救方法。本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也表明，毒蛇致傷機(jī)體后及時(shí)有效地吸出蛇毒能有效地干預(yù)蛇毒對(duì)機(jī)體凝血機(jī)制、生命體征的破壞，達(dá)到改善動(dòng)物機(jī)體凝血功能、生命體征的作用，同時(shí)提高動(dòng)物的生存概率。

[1]劉德明.五步蛇毒及其生化效應(yīng)[J].生物學(xué)教學(xué),2011,36(6):65-67.

[2]胡建國(guó).尖吻蝮五步蛇毒研究進(jìn)展[J].蛇志,2012,24(1):56-57.

[3]應(yīng)雪紅,王永安,王漢斌.毒蛇咬傷的診斷和治療進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)刊,2007,42(7):24-28.

[4]賈艷,胡延春,張乃生,等.五步蛇毒的毒性成分及其應(yīng)用研究[J].蛇志,2004,16(2):23-32.

[5]李清平,周文忠,劉治昆,等.五步蛇咬傷臨床研究進(jìn)展[J].蛇志, 2012,24(1):58-61.

[6]卜沈蓮.蝮蛇傷拔罐療法23例體會(huì)[J].中華實(shí)用醫(yī)藥雜志,2005, 8(15):23-24.

Effect of extracting venom in lightening the toxicity of Agkistrodon acutus injury in rabbits.

LIANG You-ya1,XU Xue2.School of Chinese Herbal Medicine1,Department of Chinese Herbal Medicine2,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510006,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo observe the intervention effect of extracting venom in lightening the toxicity of Agkistrodon acutus injury in rabbits,and to study the mechanism.MethodsEighteen male New Zealand rabbits were divided into three groups:normal control group,model group,treatment group.Rabbits were injected with snake venom to simulate the Agkistrodon acutus injury.Treatment group applied Venom extractor kit to aspirate repeatedly in the injection region 5 minutes after injection.And then RR,HR,PT,APTT,FIB and survival conditions were observed. ResultsThe PT,APTT of the model group were significantly different from the normal control group(P＜0.05,P＜0.01),and the APTT of the treatment group was significantly longer than that of the model group(P＜0.01).Differences in FIB between the three groups were not significant(P＞0.05).Thirty minutes after injection,the RR of the model group was significantly lower than that of normal control group(P＜0.05),and that of normal model group was significantly lower than the treatment group(P＜0.01).Compared with the normal control group,the HR increased significantly in the model group and treatment group immediately after injection(P＜0.01).HR of the model group were significantly higher than that of the normal control group 30 minutes after injection(P＜0.05).ConclusionTimely extracting venom at the scene of the injury can significantly lengthen the PT,APTT,improve RR and HR,and increase the chances of survival. The mechanism may be related to the improvements in the function of blood coagulation and the action of vital signs.

Extracting venom;Agkistrodon acutus injury;Toxicity;Rabbits

R-332

A

1003—6350(2013)19—2813—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.19.1177

2013-03-28)

梁幼雅。E-mail：grace_liang2003@yahoo.com.cn