王文文，趙蜀崖

(海南省人民醫(yī)院內(nèi)鏡室，海南?？?70311)

MTHFR基因C667T多態(tài)性與胃癌化療敏感的相關(guān)性探討

王文文，趙蜀崖

(海南省人民醫(yī)院內(nèi)鏡室，海南?？?70311)

目的探討亞甲基四氫葉酸還原酶基因C667T(rs1801133)多態(tài)性與胃癌化療敏感性的相關(guān)性。方法選擇我院對(duì)5-FU敏感的胃癌患者150例作為實(shí)驗(yàn)組，不敏感胃癌患者120例作為對(duì)照組，利用PCR技術(shù)檢測(cè)所有樣本C667T位點(diǎn)多態(tài)性。利用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS13.0對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中均檢出CC、CT、TT三種基因型，三種基因型在實(shí)驗(yàn)組中的分布頻率分別為34.0%、52.0%、14.0%，在對(duì)照組中的分布頻率分別為45.0%、44.2%、10.8%。等位基因頻率C/T在實(shí)驗(yàn)組中的分布頻率為60%/40%，在對(duì)照組中的分布頻率為67%/33%。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示基因型在兩組中的分布頻率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論TT基因型有助于5-FU的化療效果，而CC基因型可能是胃癌患者對(duì)5-FU化療抵抗的重要遺傳因素。

胃癌；亞甲基四氫葉酸還原酶基因；C667T多態(tài)性；5-氟尿嘧啶

胃癌已經(jīng)成為世界性的健康難題，每年約有93萬(wàn)新增病例，而同時(shí)約有70萬(wàn)病例死亡，其中中國(guó)的病例占38%[1]。鑒于人們自我意識(shí)及診斷方面的不足，大多數(shù)胃癌患者就診時(shí)已經(jīng)處于癌癥晚期，而化療是可以延緩病程延長(zhǎng)患者生存期的重要方式[2]。5-氟尿嘧啶是重要的化療藥物之一，其作用機(jī)理是進(jìn)入體內(nèi)在亞甲基四氫葉酸的參與下與胸苷合酶形成穩(wěn)定的復(fù)合物，干擾DNA的合成和修復(fù)。作為葉酸代謝中的關(guān)鍵酶，亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)的活性與5-FU的化療效果具有相關(guān)性[3-4]。目前，影響MTHFR活性的基因多態(tài)位點(diǎn)中，C667T是最為常見(jiàn)的位點(diǎn)，該位點(diǎn)對(duì)嘧啶類(lèi)化療藥物的化療效果的研究已經(jīng)有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，但是結(jié)果存在矛盾性[3-7]。本研究收集了本院2008-2011年三年中的胃癌相關(guān)病例進(jìn)行研究，試圖揭示MTHFR C667T多態(tài)性與胃癌化療敏感的相關(guān)性，為胃癌化療藥物的個(gè)性化選擇提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取我院2008-2011年三年間對(duì)5-FU敏感的150例胃癌患者作為實(shí)驗(yàn)組，選取120例不敏感的患者作為對(duì)照組。其中實(shí)驗(yàn)組患者男性93例，女性57例，年齡42～69歲，平均59.7歲。對(duì)照組患者男性82例，女性38例，年齡43～70歲，平均58.5歲。兩組患者年齡、體重、癌癥轉(zhuǎn)移類(lèi)型及例數(shù)等方面差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

1.2 研究方法

1.2.1 血樣的采集及DNA的提取收集患者血液生化檢測(cè)剩余血樣，利用酚-氯仿的方法提取基因組DNA。檢測(cè)其質(zhì)量后置于-20℃保存。

1.2.2 基因型檢測(cè)利用PCR擴(kuò)增結(jié)合測(cè)序的方法檢測(cè)C667T多態(tài)性。50 μl PCR反應(yīng)體系中含模板DNA 0.2 μg，引物各0.2～0.5 μmol/L，4種dNTP各200 μmol/L，Taq DNA聚合酶(北京天根公司產(chǎn)品)2 U。PCR循環(huán)參數(shù)為：首先在94℃進(jìn)行2 min的熱變性，隨后進(jìn)行32個(gè)循環(huán)反應(yīng)，最后72℃延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物在1.5%的瓊脂糖凝膠中電泳檢測(cè)，送上海生工進(jìn)行序列測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法利用SPSS13.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，基因型頻率的比較采取χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

CC、CT、TT三種基因型在實(shí)驗(yàn)組中的檢出例(率)分別為51例(34.0%)、78例(52.0%)、21例(14.0%)，在對(duì)照組中的檢出例(率)分別為54例(45.0%)、53例(44.2%)、13例(10.8%)，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，CC基因型不利于5-FU化療敏感性。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組等位基因C/T的分布頻率分別為60%/ 40%、67%/33%，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=25.63，P＜0.05)。

表1 兩組患者基因型檢出情況

3 討論

個(gè)體化醫(yī)療是未來(lái)醫(yī)學(xué)發(fā)展的方向，基因SNP多態(tài)性與疾病的關(guān)系可能為個(gè)體化醫(yī)療的發(fā)展提供理論參考。C667T多態(tài)位點(diǎn)是MTHFR基因的SNP位點(diǎn)之一，其CT的突變可導(dǎo)致該蛋白222位氨基酸由丙氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)槔i氨酸，而此處氨基酸的轉(zhuǎn)變將使酶的活性降低[2]。從理論上來(lái)說(shuō)，該酶活性的降低將減少亞甲基四氫葉酸的去路，增加該物質(zhì)的濃度，從而促進(jìn)胸苷酸合成酶復(fù)合物的形成，進(jìn)而減少dTTP的合成，使抑癌效果增強(qiáng)。

國(guó)內(nèi)外許多文獻(xiàn)對(duì)C667T的多態(tài)性與5-FU化療效果的相關(guān)性進(jìn)行了研究[3-7]。Shitara等[7]以日本人群作為研究對(duì)象發(fā)現(xiàn)TT基因型可以顯著提高胃癌患者的化療效果，有利于提高患者的生存期。而國(guó)內(nèi)也有類(lèi)似的研究結(jié)果，如Huang等[5]研究發(fā)現(xiàn)CC基因型患者的化療效果劣于含有T的基因型，李潔等[3]的研究結(jié)果也說(shuō)明TT基因型的化療效果優(yōu)于CT基因型及CC基因型。而在德國(guó)人群的研究中發(fā)現(xiàn)該SNP位點(diǎn)的多態(tài)性與胃癌的化療效果及預(yù)后差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，關(guān)于C667T多態(tài)位點(diǎn)與胃癌化療效果的相關(guān)性尚存在爭(zhēng)議。

我們對(duì)我院2008-2011年三年間的胃癌患者進(jìn)行分析，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CC、CT、TT三種基因型在實(shí)驗(yàn)組中的檢出例(率)分別為51例(34.0%)、78例(52.0%)、21例(14.0%)，在對(duì)照組中的檢出例(率)分別為54例(45.0%)、53例(44.2%)、13例(10.8%)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，CC基因型不利于5-FU化療敏感性。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組等位基因C/T的分布頻率分別為60%/40%、67%/33%，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，等位基因T可增強(qiáng)5-FU化療的敏感性。

綜上所述，TT基因型有助于5-FU的化療效果，而CC基因型可能是胃癌患者對(duì)5-FU化療抵抗的重要遺傳因素。

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Correlation of C667T polymorphism of MTHFR gene and chemotherapy sensitivity of gastric cancer.

WANG Wen-wen,ZHAO Shu-ya.Endoscopy Room,People's Hospital of Hainan Province,Haikou 570311,Hainan,CHINA

ObjectiveTo investigate the correlation of C667T polymorphism of MTHFR gene and chemotherapy sensitivity of gastric cancer.MethodsOne hundred and fifty patients with gastric cancer who were sensitive to 5-FU were chosen as the experiment group,and 120 patients with gastric cancer who were not sensitivity to 5-FU were chosen as the control group.The C667T polymorphism and genotype were detected by PCR and sequencing.All the data were analyzed by SPSS13.0.ResultsThree genotypes were detected,which is CC,CT and TT.The frequencies of CC,CT,TT were 34.0%,52.0%,14.0%in the experiment group and 45.0%,44.2%,10.8%in the control group,respectively.The allele frequency of C/T was 60%/40%in the experiment group and 67%/33%in the control group.The difference in the two group was statistically significant(P＜0.05).ConclusionTT genotype is sensitive to the 5-FU,and the CC may be an important factor for chemotherapy resistance.

Gastric cancer;MTHFR gene;Polymorphism of C667T;5-FU

R735.2

A

1003—6350（2013）18—2661—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.18.1108

2013-04-24)

趙蜀崖。E-mail：zsy4444@163.com