羅先潤，苗 莉，高愛社，魏 娜，張 輝，婁云霄，劉安豐，方 鵬，孫 斌

急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome，ACS)是臨床上的危急重癥，其發(fā)病機(jī)制是冠狀動脈內(nèi)不穩(wěn)定斑塊破裂引起血栓形成而導(dǎo)致的心臟急性嚴(yán)重缺血綜合征。既往研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells，EPC)是血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，在生理和病理條件下能夠修復(fù)損傷的血管內(nèi)皮，對維持血管內(nèi)皮細(xì)胞的完整性極其重要［1］。本研究觀察2009－09 至2010－12 在本院心內(nèi)科住院確診的穩(wěn)定型心絞痛與ACS 患者循環(huán)血中EPC 的數(shù)量及功能的變化，探討EPC 與冠心病發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 對象 冠心病患者84 例中，穩(wěn)定型心絞痛46 例，ACS 38 例，ACS 中急性心肌梗死(AMI)20 例、不穩(wěn)定型心絞痛(UAP)18 例。年齡40 ～65 歲。全部患者均接受選擇性冠狀動脈造影檢查確診。排除標(biāo)準(zhǔn):冠脈造影陰性(狹窄＜50%)、急性腦血管病(1 個月內(nèi))、嚴(yán)重的肝臟疾病、腎功能不全、明確的急性炎性反應(yīng)、結(jié)核、自身免疫病、惡性腫瘤等。選擇40 例來院體檢的健康志愿者為對照組，無糖尿病、高血壓、肥胖、血脂異?；蛐难芗膊?，所有受試者簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 EPC 的分離、培養(yǎng)及鑒定 入選者均取清晨空腹靜脈血50 ml，密度梯度離心法分離出單個核細(xì)胞，在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)10 d。將長有細(xì)胞的蓋玻片在acLDL－DiI 孵育后再與FITC－UEA－I 孵育，在激光共聚焦顯微鏡下鑒定acLDL－DiI 陽性細(xì)胞(發(fā)紅色熒光)和UEA－I 陽性細(xì)胞(發(fā)綠色熒光)，雙染色陽性細(xì)胞為正在分化的EPC。記數(shù)15 個隨機(jī)選擇的200 倍視野中的EPC。流式細(xì)胞儀分析:外周血用PE標(biāo)記的CD34 抗體避光溫育15 min，同型抗體做陰性對照，分析100 000 個細(xì)胞。

1.2.2 EPC 功能檢測

1.2.2.1 黏附能力檢測 胰蛋白酶消化、收集EPC，懸浮于培養(yǎng)液中，計數(shù)。然后將同等數(shù)目的EPC 接種，在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)后計數(shù)貼壁細(xì)胞。

1.2.2.2 遷移能力檢測 同上制備成細(xì)胞懸液，計數(shù)。將培養(yǎng)液加入改良的Boyden 小室的下室，培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，隨機(jī)計數(shù)5 個顯微鏡視野，用于評價EPC 的遷移能力。

1.2.2.3 增殖能力檢測 同上制備成細(xì)胞懸液，接種于培養(yǎng)板，MTT 比色法檢測增殖能力。用全自動酶標(biāo)儀按參比波長為490 nm，測定吸收OD 值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0 軟件，計量資料采用±s表示，組間比較采用t 檢驗，計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗。以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床資料比較 與對照組比較，穩(wěn)定型心絞痛組及ACS 組的體質(zhì)量指數(shù)、收縮壓、舒張壓、空腹血糖、膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白(LDL－C)均明顯升高，高密度脂蛋白(HDL－C)降低(P ＜0.05);穩(wěn)定型心絞痛組與ACS 組之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05，表1)。

表1 穩(wěn)定型心絞痛組、ACS 組與對照組臨床基本資料比較 (±s)

表1 穩(wěn)定型心絞痛組、ACS 組與對照組臨床基本資料比較 (±s)

注:與對照組比較，①P ＜0.05

組別對照組(n=40)穩(wěn)定型心絞痛組(n=46)ACS 組(n=38)53 ±3.955 ±4.052 ±4.7性別(男/女)23/1727/1922/16 BMI(kg/m2)23.0 ±1.525.5 ±1.4① 25.7 ±1.2①收縮壓(mmol/L)114 ±8140 ±6①142 ±8①舒張壓(mmol/L) 80 ±490 ±6①88 ±6①空腹血糖(mmol/L)4.5 ±0.56.9 ±1.0①6.7 ±1.1①膽固醇(mmol/L) 3.3 ±0.45.8 ±0.8①5.7 ±0.6①甘油三酯(mmol/L)1.0 ±0.22.9 ±0.4①2.7 ±0.4①LDL－C(mmol/L) 2.4 ±0.33.9 ±0.8①4.1 ±0.7①HDL－C(mmol/L) 2.5 ±0.41.2 ±0.3①1.1 ±0.4年齡①

2.2 EPC 數(shù)量比較 流式細(xì)胞儀分析結(jié)果顯示，與對照組比較(0.078 ±0.035)，穩(wěn)定型心絞痛組及ACS 組EPC 數(shù)量均顯著減少(0.031 ±0.012、0.033 ±0.018，P ＜0.05)，穩(wěn)定型心絞痛組與ACS 組兩組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05);雙染色陽性細(xì)胞計數(shù)分析顯示，與對照組比較(92.3±26.8)，穩(wěn)定型心絞痛組及ACS 組雙染色陽性細(xì)胞均顯著減少(61.1 ±12.7、65.0 ±21.3，P ＜0.05)，穩(wěn)定型心絞痛組與ACS 組兩組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05)。

2.3 EPC 功能比較 穩(wěn)定型心絞痛組、ACS 組循環(huán)血中EPC 的各項功能均顯著低于對照組(P ＜0.05);ACS 組循環(huán)血中EPC 的各項功能均亦顯著低于穩(wěn)定型心絞痛組(P ＜0.05，表2)。

表2 穩(wěn)定型心絞痛組、ACS 組與對照組EPC 功能比較 (±s)

表2 穩(wěn)定型心絞痛組、ACS 組與對照組EPC 功能比較 (±s)

注:與對照組比較，①P ＜0.05;與穩(wěn)定型心絞痛組比較，②P ＜0.05

功能對照組穩(wěn)定型心絞痛組ACS組黏附(cells×200)88.0 ±17.655.1 ±5.6①20.6 ±4.4①②遷移(cells×200)51.8 ±12.234.2 ±3.8①14.2 ±2.5①②增殖(A 490 nm)0.980 ±0.1350.625 ±0.043①0.340 ±0.041①②

3 討論

冠心病是一多危險因素性疾病，多種心血管危險因素均可引起內(nèi)皮細(xì)胞損傷和功能不全而參與冠狀動脈粥樣硬化的形成［2］。既往研究認(rèn)為，內(nèi)皮自我修復(fù)的能力取決于周圍成熟內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和對循環(huán)血中EPC 的吸引。成熟的內(nèi)皮細(xì)胞增殖潛力小，因此內(nèi)皮修復(fù)主要依賴后一種途徑。眾多研究報道，冠心病患者的EPC 數(shù)量減少，功能降低，且冠脈多支病變較單支病變和無冠心病者EPC 數(shù)量明顯減少，并且有報道認(rèn)為，循環(huán)EPC 水平可預(yù)測心血管事件預(yù)后［1，3，4］。

動脈粥樣硬化的多種危險因素，如吸煙、高血壓、高血糖、血脂異常等的相互協(xié)同，引起血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，促發(fā)動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，加重粥樣斑塊的不穩(wěn)定性，易于發(fā)生斑塊的破裂，增加冠心病患者發(fā)生ACS 的風(fēng)險。本研究發(fā)現(xiàn)，冠心病患者組的各項心血管病危險因素，包括體質(zhì)量指數(shù)、血壓、空腹血糖、血脂等均較對照組顯著增加，循環(huán)EPC數(shù)量，以及EPC 的增殖、黏附、遷移等功能均顯著低于對照組，說明EPC 數(shù)量減少、功能紊亂可能破壞內(nèi)皮損傷和修復(fù)之間的平衡，影響內(nèi)皮修復(fù)，由此引發(fā)或加劇動脈粥樣硬化的產(chǎn)生。本研究結(jié)果與既往一部分研究發(fā)現(xiàn)的關(guān)于ACS 循環(huán)EPC 數(shù)量增加的結(jié)論并不一致［5］，考慮與選取患者檢測時間有關(guān)，其具體機(jī)制需做進(jìn)一步的研究。

本研究還發(fā)現(xiàn)，在穩(wěn)定型心絞痛組與ACS 組間，循環(huán)EPC 的數(shù)量無差異，但是ACS 組EPC 的增殖、黏附、遷移等功能較穩(wěn)定型心絞痛組顯著降低，進(jìn)一步說明由于EPC 功能的降低，導(dǎo)致受損內(nèi)皮功能的修復(fù)能力進(jìn)一步下降，斑塊不穩(wěn)定性加重，是發(fā)生ACS 的重要因素。

內(nèi)皮功能是已知傳統(tǒng)危險因素對血管損傷的整體性標(biāo)志，既往研究認(rèn)為外周血EPC 數(shù)量可較好地用于評價血管內(nèi)皮損傷程度及動脈粥樣硬化疾病的發(fā)展趨勢［6，7］。本研究結(jié)果進(jìn)一步提示，循環(huán)血中EPC 水平及其功能狀態(tài)是冠心病發(fā)生、發(fā)展的重要預(yù)測因素，為早期辨別可能發(fā)生ACS 的高危人群并進(jìn)行針對性治療提供了臨床及理論依據(jù)。

［1］ 方葉青，張松榮，方紅城，等.冠心病患者內(nèi)皮祖細(xì)胞變化與冠狀動脈病變的相關(guān)性［J］. 中國動脈硬化雜志，2012，20(9):814－818.

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