王瑞強，常曉強，溫占勇

（石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司歐盟技術(shù)部，石家莊 050035）

刺五加俗稱刺拐棒、刺老鴉子等，為五加科植物刺五加[Acanthopanax Senticosus（Rupr.et Maxim）Harms]的干燥根及根莖，性溫，味甘、微苦，歸脾、肺、心、腎經(jīng)，具有益氣健脾、補腎安神之功效，主要用于脾肺氣虛、體倦乏力、久咳虛喘、腎虛腰膝酸痛、心脾不足、失眠、健忘等病癥[1]。近年來，國內(nèi)外學者對其藥理作用進行了較為系統(tǒng)的研究，尤其對其增強免疫作用報道較為廣泛。但對其抗炎作用報道較少，尤其對刺五加抗炎及提高免疫的內(nèi)在劑量關系還鮮為報道。為此，筆者對其抗炎免疫作用進行了進一步研究，以期為其更好的臨床應用提供依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 動物 昆明小鼠，雌性，體質(zhì)量（20±2）g；SD大鼠，雌性，體質(zhì)量（200±20）g，均由中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所提供。

1.2 藥物 刺五加藥材采自黑龍江林區(qū)。實驗前加9倍水煎煮提取3次，每次2 h，合并提取液，濃縮至含生藥材1.0 kg/L的合劑，置冰箱冷藏室備用。

1.3 試劑 二甲苯（天津市贏達稀貴化學試劑廠，批號：1320100143），醋酸地塞米松片（天津力生制藥股份有限公司，批號：H12020122），2，4-二硝基氟苯（DNFB，天津制劑一廠，批號：060518），印度墨汁（Solarbio，批號：18060）。

1.4 CP225D型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司），754紫外—可見分光光度計（天津市普瑞斯儀器有限公司）。

1.5 統(tǒng)計分析 數(shù)據(jù)采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件處理，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，組間比較采用單因素資料方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 方法及結(jié)果

2.1 刺五加水提物（ASE）對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響[2]取健康昆明小鼠50只，雌性，采用隨機數(shù)字表法隨機分為5組，每組10只，即：生理鹽水組，ASE 低、中、高劑量組（折合生藥材 0.75、1.5、3 g/kg），及地塞米松組（0.01 g/kg）。各組均采用灌胃（ig）給藥，每日1次，連續(xù)5 d。末次給藥45 min后在乙醚麻醉下將100%二甲苯0.1 mL均勻涂在小鼠右耳前后兩面，左耳作對照。1.5 h后將小鼠脫頸處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用9 mm直徑打孔器分別在左右耳的同一部位打下圓耳片，電子天平稱重。以兩耳片的質(zhì)量之差作為腫脹度進行統(tǒng)計學檢驗，并計算腫脹抑制率，腫脹抑制率=（正常對照組－給藥組）÷正常對照組×100%。結(jié)果顯示：與生理鹽水組相比，ASE各劑量組均對二甲苯所致小鼠耳腫脹均有明顯抑制作用（P<0.01、P<0.05），且隨劑量增加抑制作用增強，地塞米松陽性對照組對小鼠耳腫脹亦有極強的抑制作用。結(jié)果見表1。

2.2 ASE對蛋清所致大鼠足趾腫脹的影響[3]取健康SD大鼠50只，雌性，隨機分為5組，每組10只，其余同“2.1”項下給藥。末次給藥1 h后，于每只大鼠左后足趾皮下注射10%雞蛋清液0.1 mL，致炎后1、3、5、7 h分別測定左后足趾厚度1次（用游標卡尺測量大鼠踝關節(jié)下0.5 cm處足趾中央厚度），計算腫脹率，腫脹率=（致炎后足趾厚度－致炎前足趾厚度）÷致炎前足趾厚度×100%。結(jié)果顯示：與生理鹽水組相比，ASE高、中劑量組和陽性對照組對雞蛋清所致大鼠足趾腫脹有明顯抑制作用，并且在3 h時作用最強（P<0.01），低劑量組亦對大鼠足趾腫脹率有降低趨勢，但在7 h的時候差異無統(tǒng)計學意義，各劑量具有良好的量效關系。結(jié)果見表2。

表1 ASE對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響（±s）Tab.1 Effects of ASE on the auricular edema induced by xylene in mice（±s）

表1 ASE對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響（±s）Tab.1 Effects of ASE on the auricular edema induced by xylene in mice（±s）

注：與生理鹽水組相比，*P<0.05，**P<0.01。

組別 n 劑量（g/kg） 腫脹度（mg） 腫脹率（%）生理鹽水組 10 - 16.01±2.44** -地塞米松組 10 0.01 7.09±2.10** 55.62**ASE 低劑量組 10 0.75 11.74±4.90** 26.51**ASE 中劑量組 10 1.50 9.90±4.90** 38.03**ASE 高劑量組 10 3.00 7.35±1.63** 53.99**

注：與生理鹽水組相比，**P<0.01。

2.3 ASE對小鼠吞噬功能的影響[4]采用小鼠碳粒廓清實驗觀察了ASE對小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能的影響。取小鼠40只，雌性，隨機分為4組，每組10只，即：生理鹽水組，ASE低、中、高劑量組（折合生藥材2.5、5、7.5 g/kg）。各組均采用灌胃給藥，每日1次，連續(xù)15 d。末次給藥后，于小鼠尾靜脈注射稀釋5倍的印度墨汁0.1 mL/10 g，分別于注入后1 min及11 min用以肝素預先處理的微量移液器，自小鼠眼眶后靜脈從取血20 μL，立刻加入到2 mL的0.1%碳酸鈉溶液中，移液器于該液中吸入、吹出數(shù)次以充分洗出吸管壁附著之血液。取血完畢的小鼠斷頸處死，解剖取肝臟及脾臟并分別稱質(zhì)量，以0.1%碳酸鈉液校零，于分光光度計上680 nm處比色，按下式計算吞噬指數(shù)k值，并計算吞噬系數(shù)α值：

式中C為血中炭粒濃度，T為時間，W為體質(zhì)量，WLS為肝脾總質(zhì)量。

結(jié)果顯示：與生理鹽水組相比，ASE各劑量組均能增強小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能（P<0.01和P<0.05），α值差異有統(tǒng)計學意義，且呈良好的劑量依賴關系。K值亦有升高的趨勢，但無統(tǒng)計學意義。結(jié)果見表3。

表3 ASE對小鼠吞噬功能的影響（±s）Tab.3 Effect of ASE on phagocytic function of monocyte in mice（±s）

表3 ASE對小鼠吞噬功能的影響（±s）Tab.3 Effect of ASE on phagocytic function of monocyte in mice（±s）

注：與生理鹽水組相比，*P<0.05，**P<0.01。

組別 n 劑量（g/kg） 吞噬系數(shù)（α） 吞噬指數(shù)（k）生理鹽水組 10 - 5.02±0.20** 0.256±0.028 ASE 低劑量組 10 2.5 5.30±0.21** 0.257±0.033 ASE 中劑量組 10 5.0 5.82±0.37** 0.274±0.037 ASE 高劑量組 10 7.5 6.37±0.23** 0.282±0.021

2.4 ASE對DNFB誘導的小鼠遲發(fā)超敏反應的影響[5]取小鼠40只，雌性，隨機分為4組，每組10只，其余同“2.3”項下給藥。第7天給藥30 min后，于小鼠腹部去毛處涂0.5%的DNFB 30 μL致敏，末次給藥后于小鼠右耳前后兩面涂0.25%的DNFB進行攻擊，16 h后脫頸處死小鼠，沿耳廓基線剪下兩耳，用9 mm直徑打孔器分別在左右耳的同一部位打下圓耳片，電子天平稱質(zhì)量，以右耳的增加質(zhì)量表示遲發(fā)型超敏反應的程度。另取胸腺和脾臟稱質(zhì)量，計算臟器系數(shù)。結(jié)果顯示：與生理鹽水組相比，刺五加中、高劑量組能顯著增加小鼠右耳的腫脹程度，提示其超敏反應程度顯著升高。此外，刺五加高劑量組能顯著升高小鼠脾臟和胸腺的臟器系數(shù)。上述指標均呈現(xiàn)良好的劑量依賴關系。結(jié)果見表4。

表4 ASE對DNFB致小鼠遲發(fā)超敏反應的影響（±s）Tab.4 Effects of ASE on the delayed hypersensitivity induced by DNFB in mice（±s）

表4 ASE對DNFB致小鼠遲發(fā)超敏反應的影響（±s）Tab.4 Effects of ASE on the delayed hypersensitivity induced by DNFB in mice（±s）

注：與生理鹽水組相比，*P<0.05，**P<0.01。

臟器系數(shù)（mg/g） 耳質(zhì)量差值（mg）脾臟 胸腺生理鹽水組 10 - 2.98±0.50 1.88±0.41 3.38±1.06 ASE 低劑量組 10 2.5 3.25±0.37 2.16±0.23 3.75±1.33 ASE 中劑量組 10 5.0 3.66±0.29 2.22±0.46 5.50±2.51*ASE 高劑量組 10 7.5 4.66±1.13**2.34±0.37*8.75±1.75**組別 n 劑量（g/kg）

3 討論

炎癥是一種復雜的機體自我防御反應，其包含了一系列的病理過程，可由病原體感染、抗原抗體反應、物理損傷等原因誘發(fā)。炎癥發(fā)生時，早期常伴隨毛細血管擴張及通透性增加，炎癥因子滲出及組織腫脹。小鼠耳廓腫脹模型為一種公認的急性炎癥模型，此炎癥過程有多種致炎因子參與，如組胺、5-羥色胺、緩激肽及前列腺素，這些因子可引起血管擴張并增加血管通透性，導致管內(nèi)液體成分和細胞成分滲出到組織間隙，引發(fā)耳腫脹。實驗結(jié)果顯示：刺五加0.75、1.5、3 g/kg能顯著抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹，且呈現(xiàn)良好的劑量依賴關系。推測其可能通過抑制組胺、5-羥色胺、前列腺素等炎性因子的產(chǎn)生來抑制毛細血管的擴張，降低血管通透性，從而對炎癥起到抑制作用。

大鼠足趾腫脹模型為另一種常用的急性炎性模型，以蛋清作為刺激劑可產(chǎn)生Ⅱ相反應，早期主要由組胺、白三烯、血小板活化因子及環(huán)氧化酶參與，后期主要表現(xiàn)為中性白細胞浸潤、花生四烯酸釋放、自由基產(chǎn)生、及其他嗜中性粒細胞衍生因子的釋放。上述因子均參與了炎癥的形成，引發(fā)足趾腫脹。本實驗結(jié)果顯示刺五加能顯著抑制蛋清所致的大鼠足趾腫脹，推測其抑制炎癥的作用可能與抑制組胺、白三烯、環(huán)氧化酶、花生四烯酸等致炎介質(zhì)有關。

巨噬細胞是參與免疫反應的重要細胞，主要介導機體的非特異性免疫。碳粒廓清實驗就是通過測定單核—巨噬細胞的吞噬功能來反映機體對外界物質(zhì)刺激的非特異性免疫功能的強弱。遲發(fā)超敏反應是由于抗原進入機體后，細胞在局部接受抗原信息轉(zhuǎn)化為致敏淋巴細胞。致敏淋巴細胞再次接觸相同抗原時，釋放出多種免疫因子，如白介素-2（IL-2）、巨噬細胞趨化蛋白-1（MCP-1）、干擾素-γ（IFN-γ）[6]。這些因子可加速骨髓單核—巨噬細胞的增殖和釋放，促使血流中單核細胞向局部聚集和吞噬抗原。大量吞噬細胞浸潤抗原接觸部位，可引起組織水腫和組織損傷，導致炎癥，因此可以通過測量皮膚再次受相同抗原刺激后的腫脹厚度來反映細胞免疫功能的強弱。本實驗結(jié)果顯示：刺五加2.5、5、7.5 g/kg能顯著增加小鼠單核—巨噬細胞的吞噬功能，并能顯著提高小鼠遲發(fā)超敏反應的程度，此外顯著增加了小鼠的脾臟和胸腺的臟器系數(shù)，提示刺五加能增強機體免疫防御能力，并且這種免疫增強作用與促進巨噬細胞活化有關。

炎癥和免疫是機體對異物的兩種不同反應是一個問題的兩個側(cè)面，兩者互相重疊，不可分割。對于刺五加的免疫功能，前期已有相關文獻進行了探討[7]，筆者在確認刺五加的免疫作用的基礎上，對其抗炎作用進行了研究。實驗數(shù)據(jù)顯示，刺五加在低于免疫增強作用的劑量下即能產(chǎn)生良好抗急性炎癥的作用，豐富了刺五加的藥理作用，為刺五加的進一步開發(fā)提供了依據(jù)。但是對于上述兩方面藥理活性的具體作用機制，尚需進行進一步研究。

[1] 王林麗，張家碧.刺五加藥理作用及臨床治療進展[J].中國藥業(yè)，2003，12（4）：79-80.

[2] 鄭蓓蓓，竇志英.對金鈴子散中延胡索和川楝子不同炮制品之間配伍后鎮(zhèn)痛抗炎作用研究[J].天津中醫(yī)藥大學學報，2011，30（4）：225-228.

[3] 黃麗晶，高文遠，李 霞，等.平貝母水提物抗炎作用研究[J].天津中醫(yī)藥，2009，26（6）：495-496.

[4] 楊 凌，崔曉燕，張 許.黃芩提取物的抗炎免疫作用研究[J].中國藥房，2007，18（24）：1856-1858.

[5] 韓雙紅，王玉芬，張居馨，等.連翹敗毒片的抗內(nèi)毒素及免疫調(diào)節(jié)作用研究[J].天津中醫(yī)藥，2004，21（5）：417-419.

[6] 賈英杰，李小江，楊佩穎，等.消巖湯不同時段聯(lián)合化療對Lewis肺癌小鼠免疫功能的影響[J].天津中醫(yī)藥，2010，27（4）：312-314.

[7] 黃秀蘭，朱家媛，胡 宏.刺五加增強小鼠免疫功能的作用[J].四川師范學院學報（自然科學版），1998，19（2）：201-203.