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        試論高效液相色譜分析技術的應用

        2013-07-05 05:27:52高春冬
        科技致富向導 2013年11期

        高春冬

        【摘 要】HPLC在我國食品分析領域的應用始于20世紀70年代末,90年代后期國家標準中開始將HPLC法列為檢測食品中的污染物、營養(yǎng)成分、添加劑、毒素和無機成分等的國標方法。

        【關鍵詞】HPLC;高效液相色譜分析;食品檢測

        1.HPLC在食品添加劑領域的應用

        1.1食品甜味劑的檢測

        采用液相色譜—氣相色譜聯(lián)用技術, SpherigelC18色譜柱,電噴霧負離子采集模式,甲醇-甲酸-三乙胺緩沖鹽梯度洗脫,定量測定果凍等食品中安賽蜜、糖精鈉和甜蜜素含量,結果加樣回收率為93.19%~100.90%,相關標準偏差(RSD)為1.05%~2.04%。該方法選擇性好,定性定量準確,分析時間短,同時也適用于飲料等其他食品的定性定量檢測。

        用高效液相色譜—熒光法(HPLC-FLD)測定食品中的糖精鈉,最低檢出限在0.005~0.200mg/ml,與高效液相色譜—紫外檢測法(HPLC-UV)相比較,HPLC-FLD法重現(xiàn)性好,準確度更高,由于FLD的選擇性響應,降低了對色譜柱的性能要求,更適合復雜樣品的快速分析,使其具有比UV法更高的可靠性,是一種較為理想的糖精鈉檢測方法。

        1.2食品防腐劑的檢測

        利用HPLC測定含乳飲料中苯甲酸的含量。用Zn(Ac)2和KFe(CN)3溶液作為沉淀劑進行樣品的預處理,磷酸鹽緩沖液和甲醇混合溶液為流動相,C18色譜柱,于波長225nm處紫外檢測,方法簡單快速、靈敏度高,既適用于大部分含乳飲料,也適用于純牛奶的測定。蘇愛梅采用加沉淀劑沉淀法對火腿腸樣品進行預處理,過濾后用RP-HPLC法測定火腿腸中防腐劑苯甲酸和山梨酸的含量。色譜柱為Symetry-C18,以0.02mol/L乙酸銨-甲醇(97∶3)為流動相,檢測波長為230nm。苯甲酸和山梨酸濃度在0~0.05g/L范圍內(nèi)線性很好(r=0.9996);山梨酸最低檢出限為0.024g/L,平均回收率為100.4%,RSD為0.68%。

        1.3食品色素的檢測

        采用HPLC法測定保健食品黃金搭檔包衣片中食用合成色素,樣品前處理用粉碎提取法和漂洗法,聚酰胺吸附純化LichrospherC18柱,甲醇-乙酸銨流動相梯度洗脫,單波長或多波長測定檸檬黃、靛藍和誘惑紅3種色素。其線性范圍寬(0~100g/ml),回收率高(91.3%~103.1%),重現(xiàn)性好(RSD=2.11%~5.63%),最低檢出限為2~11ng。其中,尤以粉碎提取法,梯度洗脫,多波長檢測效果更佳。

        1.4食品抗氧化劑的檢測

        采用RP-HPLC法測定油炸薯條沒食子酸內(nèi)酯(PG)、叔丁基對苯二酚(TBHQ)、羥基茴香醚(BHA)、4-已基間苯二酚(4HR)、二丁基羥基甲苯和2246含量。其中,PG、TBHQ用50%甲醇(RP-HPLC體積分數(shù)1%的冰醋酸)作流動相,BHA、4HR、BHT和2246用80%甲醇作流動相,檢測波長為280nm,相關系數(shù)在0.9983~0.9996,最低檢出限為1.0~2.0μg/g,平均回收率均在85%以上。

        采用基質固相分散萃取植物油中抗氧化劑BHA、BHT、TBHQ和PG,經(jīng)HPLC法進行分離。結果通過基質固相分散技術,可減少有機溶劑的用量,縮短分析時間,提高分析效率,回收率為85.8%~94.3%,最低檢出限為2ng。

        2.HPLC在食品營養(yǎng)成分領域的應用

        2.1碳水化合物的檢測

        對于碳水化合物的測定,HPLC法操作簡便,靈敏度高,可同時測定各種糖,國際上已將HPLC法作為酒類糖分含量測定的仲裁法。

        2.2氨基酸的檢測

        氨基酸是生物體中重要的生命物質,是組成酶和蛋白質的基本單元,準確靈敏地測定食物中氨基酸的含量具有十分重要的意義。目前,柱前衍生化高效液相色譜法以其靈活和易于推廣的特點。

        采用鄰苯二甲醛(OPA)-9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC)進行氨基酸柱前衍生,RP-HPLC法測定氨基酸含量。3個不同濃度梯度的氨基酸標準溶液線性關系良好,樣品保留時間絕對誤差小于0.1min,重現(xiàn)性RSD值低于4%,加標回收率均在90%~110%。

        2.3脂肪酸的檢測

        脂肪酸是指一端含有一個羧基的長的脂肪族碳氫鏈,是有機物。飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸和三脂酰苷油磷脂卵磷脂等,對人體的健康起到了重要的作用。用HPLC法與基質輔助激光解吸電離飛行時間技術聯(lián)用,分析蛋黃中磷脂粗提物。將從蛋黃中提取的多種磷脂通過HPLC預先分離,收集各組分后分別進行MALDI-TOF-MS分析得到比較清晰的質譜圖。選用RP-HPLC與電容耦合非接觸電導檢測(C4D)結合的方法分離測定肉蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸與亞油酸5種未衍生化長鏈脂肪酸,采用HypersilODSC18色譜柱,以甲醇-1mmol/L醋酸鈉(78∶22,V/V)為流動相,結果表明,硬脂酸在5~200μg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好,其他4種酸線性范圍為2~200μg/ml。將此種方法用于檢測南瓜、大豆、米糠及棕櫚油中脂肪酸,與標準氣相色譜檢測方法相比,簡單、快速、靈敏度高。

        3.HPLC在食品污染物領域的應用

        3.1食品農(nóng)藥、獸藥殘留的檢測

        農(nóng)藥殘留是由于使用農(nóng)藥而導致的在食品、農(nóng)產(chǎn)品或動物飼料中殘留的一定物質,國家相關標準都有明確的藥物最大殘留量,超過其值有可能對人體造成危害。運用HPLC柱后衍生熒光檢測法,測定蘋果、梨、桃、葡萄、香蕉和芒果等水果樣品中涕滅威亞砜、涕滅威砜、滅多威、三羥基克百威、涕滅威、克百威和甲萘威7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留量,結果7種農(nóng)藥3種不同濃度平均添加回收率在72.5%~116.2%,最低檢出限為0.0037~0.0074mg/kg。

        3.2食品中其他來源化學污染物的檢測

        環(huán)境污染物以及在工業(yè)生產(chǎn)中所產(chǎn)生的有毒有害化學物,如包裝材料等均可通過植物或動物進入食物鏈,并引起人類的疾病或健康問題。

        3.3食品中霉菌毒素的檢測

        食品中存在多種霉菌毒素,主要的霉菌毒素有黃曲霉毒素、鐮刀菌毒素和玉米赤霉烯酮等。糧食及食品由于霉變不僅會造成經(jīng)濟損失,有些還會造成誤食人畜急性或慢性中毒,甚至導致癌癥。

        4.小結

        目前在食品安全檢測高標準的情況下,HPLC分析技術以其分辨率、靈敏度及定量精度高等特點,已被廣泛應用于食品檢測領域?,F(xiàn)今科學技術日益更新,高效液相色譜儀器也在不斷地更新發(fā)展,并且與各種檢測技術的聯(lián)用越來越普遍,包括液相色譜(LC)和質譜儀(MS)及核磁共振譜儀的集成(LC-MS-NMR)、氣相色譜-液相色譜聯(lián)用(GC-HPLC)、固相微萃取-液相色譜聯(lián)用(SPME-HPLC)、聚焦微波輔助萃取-液相色譜聯(lián)用(FAME-HPLC),大大拓寬了HPLC的應用范圍,提高了檢測水平,在今后HPLC也會有更廣闊的發(fā)展空間。

        【參考文獻】

        [1]賀家亮,李開雄,劉海燕.高效液相色譜法在食品分析中的應用[J].食品研究與開發(fā),2008,29(11):175-177.

        [2]趙青山,馮志彪.高效液相色譜在食品分析領域的應用[J].生命科學儀器,2005,3(6):21-24.

        [3]黃國宏.高效液相色譜技術在食品分析中的應用[J].食品工程,2006(4):47-50.

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