姜 波 時(shí)冉冉 王 濤

（1.山東省濟(jì)南市畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測(cè)中心，濟(jì)南 250002；2.山東省濟(jì)南市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，濟(jì)南 250002）

畜產(chǎn)品質(zhì)量安全已成為我國(guó)乃至全世界共同關(guān)注的話題，尤其是近幾年不斷出現(xiàn)牛奶、奶粉的安全問(wèn)題，更加大了監(jiān)管部門(mén)的責(zé)任。如何控制藥物殘留，確保畜產(chǎn)品質(zhì)量安全，保證人們能喝到“放心奶”，監(jiān)督和檢測(cè)就成為了至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。畜產(chǎn)品質(zhì)量安全包括“肉、蛋、奶”等很多方面，其中牛奶中藥物殘留始終備受關(guān)注。國(guó)家對(duì)牛奶中藥物殘留的控制使用、監(jiān)督檢查和檢測(cè)方面都投入了相當(dāng)大的人力、物力。對(duì)監(jiān)督檢測(cè)部門(mén)十分重視，檢測(cè)方法也不斷的更新發(fā)展。那么，我們需要更科學(xué)、高效、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法來(lái)監(jiān)督監(jiān)測(cè)藥物殘留。下面就介紹了牛奶中四環(huán)素類的快速檢測(cè)方法。

1 常見(jiàn)的四環(huán)素類藥物

四環(huán)素類藥物為廣譜抗生素，主要包括四環(huán)素、土霉素、金霉素和強(qiáng)力霉素。其抗菌作用強(qiáng)，價(jià)格低廉，被廣泛用于臨床各種感染性疾病的治療。其在動(dòng)物性食品中的殘留可導(dǎo)致諸多不良反應(yīng)，如胃腸道反應(yīng)及二重感染等。臨床廣泛應(yīng)用也可導(dǎo)致對(duì)四環(huán)素類藥物的耐藥菌株迅速增加。因此，對(duì)動(dòng)物性食品中四環(huán)素類藥物的殘留檢測(cè)非常重要也很必要。

2 牛奶中四環(huán)素類藥物殘留快速檢測(cè)方法

試紙條是一種快速篩選檢測(cè)的方法，能快速檢測(cè)出牛奶中是否含有四環(huán)素類藥物，對(duì)監(jiān)督檢查牛奶藥物殘留工作提供了便利的條件，為保證食品安全提供了一種高效的檢測(cè)手段。

2.1 優(yōu)勢(shì)與不足

牛奶樣品不需要復(fù)雜的特殊處理，經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的水浴可以直接用于檢測(cè)，監(jiān)督檢查人員和檢測(cè)人員可進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，快速高效判斷結(jié)果，節(jié)省人力和物力，提高了工作效率。但本檢測(cè)方法的結(jié)果易受樣品、溫度、濕度等環(huán)境因素和其他條件影響，可能出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，所以需要積累經(jīng)驗(yàn)，或做進(jìn)一步的試驗(yàn)。

2.2 原理

牛奶中四環(huán)素類藥物快速檢測(cè)試紙條含有被事先固定于硝酸纖維素膜的抗原檢測(cè)線（T線）和質(zhì)控線（C線）。微孔中的金標(biāo)抗體經(jīng)牛奶樣品復(fù)溶后在50℃水浴中溫育3 min，將試紙條插入金標(biāo)微孔中反應(yīng)8～10 min，若樣品為陰性，在T區(qū)出現(xiàn)一條紫紅色條帶；若樣品為陽(yáng)性，則T區(qū)不會(huì)出現(xiàn)紫紅色條帶。無(wú)論樣品中有無(wú)四環(huán)素類藥物的存在，C區(qū)都會(huì)出現(xiàn)一條紫紅色條帶。牛奶中四環(huán)素類藥物的快速檢測(cè)方法需要用到水浴鍋或者是溫育器、微量移液器。

2.3 靈敏度

金霉素的檢測(cè)靈敏度為30 ppb；強(qiáng)力霉素的檢測(cè)靈敏度為30 ppb；四環(huán)素的檢測(cè)靈敏度為50 ppb；土霉素的檢測(cè)靈敏度為100 ppb。

2.4 檢測(cè)樣品的制備和要求

牛奶中四環(huán)素類藥物快速檢測(cè)方法適用于原奶或者是混合奶樣，檢測(cè)前需要將牛奶樣品混勻。被測(cè)牛奶樣品要避免使用結(jié)塊或者是感官性狀有問(wèn)題的液態(tài)奶，待測(cè)奶樣應(yīng)冷藏保存，保存時(shí)間不得超過(guò)4 d。

2.5 快速檢測(cè)試紙條的存放

快速檢測(cè)試紙條的存放要求不是非常嚴(yán)格，一般控制在溫度15℃～24℃之內(nèi)，密封、陰涼干燥、避光存放，嚴(yán)防受潮。并在有效期內(nèi)使用，一般有效期為6個(gè)月。

2.6 檢測(cè)方法

2.6.1 檢測(cè)步驟

（1）將水浴鍋或者是溫育器打開(kāi)，設(shè)置溫度為50℃，待溫度穩(wěn)定后使用；（2）取待測(cè)牛奶樣品600 ul加入到樣品管中，充分混勻；（3）打開(kāi)鋁箔袋，取適量金標(biāo)微孔，置于桌面上（注意：取出微孔后，立即將鋁箔袋放入自封袋中密封，以防試紙條受潮）；（4）取150 ul處理好的奶樣于金標(biāo)微孔中，充分混勻至孔底的紫紅色顆粒完全溶解；（5）將加入樣品溶液后的金標(biāo)微孔置于50℃水浴鍋（或溫育器）中，溫育3 min；（6）從反應(yīng)的鋁箔袋中，取出適量的試紙條（注意：請(qǐng)勿用手觸碰吸水紙外的其他區(qū)域），并在吸水紙上做標(biāo)記；（7）將試紙條插入溫育后的金標(biāo)微孔中，使樣品墊充分浸入樣品溶液中，并將其置于50℃水浴鍋（或溫育器）中，反應(yīng)8～10 min后，觀察顯色區(qū)，判斷結(jié)果，其他時(shí)間判斷無(wú)效。

2.6.2 結(jié)果判定

陰性：C線顯色，T線肉眼可見(jiàn)，無(wú)論顏色深淺都判為陰性。

陽(yáng)性：C線顯色，T線不顯色，結(jié)果判為陽(yáng)性。

無(wú)效：C不顯色，無(wú)論T線是否顯色，該檢測(cè)卡均判為無(wú)效，說(shuō)明操作不當(dāng)或者是檢測(cè)試紙失效。

結(jié)果如圖所示：

2.7 影響因素和注意事項(xiàng)

2.7.1 奶牛個(gè)體差異

由于奶牛的個(gè)體差異，受年齡、品種、性別和養(yǎng)殖環(huán)境的影響，抽取牛奶樣品略有所差異，在檢測(cè)過(guò)程中，可能會(huì)影響檢測(cè)線顏色深淺，一般并不影響結(jié)果的判斷，只要檢測(cè)線出現(xiàn)條帶，不論深淺，就可以判定結(jié)果為陰性結(jié)果。

2.7.2 檢測(cè)環(huán)境及條件

檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)溫度、濕度和檢測(cè)時(shí)間都會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有所影響。試驗(yàn)過(guò)程中，環(huán)境的溫度盡量控制在20℃左右進(jìn)行；環(huán)境濕度不要太大；試紙條開(kāi)封后1 h之內(nèi)使用，觀察結(jié)果時(shí)間也盡量控制在每個(gè)樣品10 min之內(nèi)，以保證試紙條不受潮，減少對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響因素。

2.7.3 檢測(cè)樣品

牛奶樣品為冷凍狀態(tài)，應(yīng)使其化凍回溫再進(jìn)行檢測(cè)，以免影響檢測(cè)結(jié)果，必須保證樣品在正常溫度之內(nèi)；被測(cè)牛奶樣品要避免使用結(jié)塊或者是感官性狀有問(wèn)題的液態(tài)奶，待測(cè)奶樣應(yīng)冷藏保存，保存時(shí)間不得超過(guò)4 d。

2.7.4 牛奶樣品吸管不可混用，以免交叉感染

如果樣品中污染有雜物或呈渾濁狀時(shí)要經(jīng)離心或者過(guò)濾后再用于檢測(cè)，嚴(yán)重污染或渾濁者不可用于檢測(cè)。

2.7.5 假陽(yáng)性

由于各種原因，牛奶樣品檢測(cè)時(shí)有可能會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性，對(duì)可疑樣品或陽(yáng)性樣品，可重復(fù)實(shí)驗(yàn)（每支試紙只能使用1次），也可用酶聯(lián)免疫法做進(jìn)一步確定。

2.7.6 試紙條和金標(biāo)微孔

不要混用來(lái)自不同批號(hào)的試紙條和金標(biāo)微孔；應(yīng)避免延誤將試紙條插入和取出金標(biāo)微孔的操作，以保證各樣品溫育時(shí)間一致。

2.7.7 廢棄物處理

實(shí)驗(yàn)后的廢棄物要妥善處理，試紙條也要嚴(yán)格按照保存條件保存，在有效期內(nèi)使用。