牛長義 劉國華 馬秀霞

（寧夏中衛(wèi)市動物疾病預防控制中心，中衛(wèi) 755000）

中衛(wèi)市沙坡頭區(qū)一養(yǎng)雞戶飼養(yǎng)的商品育雛蛋雞先后出現(xiàn)以典型的大腸桿菌病病變、球蟲病病變的疾病，以高死亡率為特征，但按大腸桿菌病和球蟲病混合感染治療，效果不明顯。經(jīng)綜合診斷為H9亞型禽流感、大腸桿菌和球蟲混合感染，采取防治措施后，有效遏止了疫病的繼續(xù)發(fā)生，防治效果良好。

1 發(fā)病情況

養(yǎng)雞戶張某2012年7月3日自陜西省某孵化場購進1日齡海蘭褐雛雞4000只，在30 m2炕面育雛，飼喂蛋雞育雛料，常規(guī)喂養(yǎng)。20日齡時將雞群轉(zhuǎn)移至2間房里搭建的1.3 m高，面積約50 m2的網(wǎng)上飼養(yǎng)。雞群隨著逐漸生長，加之平網(wǎng)周邊圍扎的立網(wǎng)過低，約有2/5的雞飛過立網(wǎng)在地面上活動（土地面）。觀察時，看到網(wǎng)上的雞群密度過大，極度擁擠，地面的雞到處亂竄，啄食地面的污物，雞舍內(nèi)粉塵飛揚，空氣污濁，通風不暢。飲水器、料桶不及時進行清洗和消毒，雞舍內(nèi)未進行過消毒，地面的糞污未進行清理。雞群于8月4日（32日齡）開始發(fā)病。表現(xiàn)為呼吸道癥狀。雞群發(fā)病后在當?shù)孬F藥店買藥進行過治療，曾選用過鎮(zhèn)咳滌毒靈、環(huán)丙沙星、呼毒殺、清熱散、黃芪多糖、三字球蟲粉等，采用過維生素制劑和電解多維飲水。雞群發(fā)病初期應用藥物治療尚有一定效果，但停藥后又繼續(xù)發(fā)病并不斷出現(xiàn)死亡，后期用藥沒有任何效果，且發(fā)病死亡數(shù)量不斷增加。雞群的防疫程序：3日齡時（5月30日）新城疫-支氣管炎二聯(lián)（Lasota-IBH120）弱毒苗，1.5頭份/只滴鼻，9日齡時肌注新城疫油苗0.3 ml/只，14日齡和21日齡時分別用法氏囊弱毒苗1頭份/只和1.5頭份/只滴口，8月6日又用新城疫-支氣管炎二聯(lián)（Lasota-IBH120）弱毒苗3頭份/只滴鼻。至8月10日，發(fā)病雞1800只，發(fā)病率45%，共死亡雞1100只，病死率61.11%。8月10日，養(yǎng)雞戶送病料進行化驗診斷，11日前往發(fā)病雞群進行了流行病學調(diào)查、現(xiàn)場診斷和病料采集，對發(fā)病雞群隨機翅靜脈采血20份分離血清進行血清學診斷。8月18日和27日分別對本雞群的治療情況進行了回訪觀察。

2 臨床癥狀

雞群采食量下降，體重輕，長勢緩慢。發(fā)病雞群最初表現(xiàn)為僅有輕微的呼吸道癥狀，隨后出現(xiàn)呼嚕、啰音、咳嗽等明顯的、輕重不一的呼吸道癥狀，有的出現(xiàn)伸頸呼吸癥狀，精神不振，食欲下降，羽毛松亂，排出灰白色、土黃色或黃綠色的稀便或水樣便，部分排出暗褐色或紅色的血樣便；有的糞便中含有未消化的飼料。隨著病情的發(fā)展，病雞群飲水量增加，食欲廢絕，嗉囊中積有液體，雞群逐漸出現(xiàn)營養(yǎng)不良，消瘦，縮頸閉眼，眼球凹陷，翅膀披散下垂，精神極度沉郁呈昏睡狀態(tài)。個別出現(xiàn)臉部腫脹，眼流淚。發(fā)病雞因衰竭而死亡，病程3～6 d。

3 病理變化

尸體消瘦，羽毛松亂，腿爪干燥缺乏彈性。有的皮下瘀血，肌肉呈紫色；有的肌肉呈現(xiàn)蒼白色。腹膜渾濁。有的肝臟瘀血，輕度腫脹，質(zhì)脆；有的肝臟表面覆蓋有薄膜狀灰白色凝固物，易剝離，肝腫脹、質(zhì)脆。有的胸、腹氣囊渾濁、增厚，呈白色或淡黃色毛玻璃樣；有的表面被覆有黃色干酪樣物，并與有關(guān)臟器相粘連。脾臟腫脹，呈暗紫色。腎臟腫脹、瘀血，部分腎臟內(nèi)有尿酸鹽沉積，呈花斑腎。鼻腔內(nèi)有粘液，喉頭和氣管內(nèi)有灰白色粘液；有的氣管出血，內(nèi)有干酪樣物。肺臟充血或出血，肺水腫。部分心臟冠狀血管周圍有散在或密集的出血點，有的心包膜擴張，心包液渾濁，心外膜附有大量呈絨毛樣的纖維狀物。腸系膜混濁并有纖維素樣物粘連。有的腸粘膜充血、出血，呈廣泛性出血性腸炎；有的盲腸擴張、腫脹，腸壁增厚，腸粘膜出血，內(nèi)容物為紅色血凝塊；有的小腸腸管膨大，腸壁增厚，粘膜腫脹，腸內(nèi)容物濃稠呈褐色或混有小血塊；在小腸漿膜上可見有密集的出血性潰瘍灶或見到灰白色的小斑點；直腸有條紋狀出血；泄殖腔充血、出血，內(nèi)有石灰樣糞便。臉腫者見腫脹部位皮下有白色或淡黃色膠胨樣物浸潤。

4 實驗室診斷

4.1 腸粘膜刮取物檢查

刮取小腸、盲腸有病變部位的粘膜，放在載玻片上，滴加50%甘油生理鹽水1～2滴，充分調(diào)和均勻，加蓋玻片后用高倍鏡檢查，可見到大量呈球形橘子瓣狀的裂殖體和呈香蕉形或月牙形的裂殖子以及圓形的卵囊。

4.2 病料涂片鏡檢

病死雞分別取心、肝、脾觸片，革蘭氏染色鏡檢，均見到革蘭氏染色陰性、兩端稍顯濃染、單個散在的短桿菌。

4.3 細菌分離和培養(yǎng)特性觀察

分別取上述病死雞的心、肝、脾、肺接種于營養(yǎng)肉湯、普通瓊脂、麥康凱瓊脂和伊紅-美藍瓊脂培養(yǎng)基上，37℃24 h培養(yǎng)。營養(yǎng)肉湯均勻一致混濁，管底可見絮狀沉淀物，表面有一層淡薄的菌膜；普通瓊脂培養(yǎng)基上長出灰白色、表面隆起、中等大小的無色菌落；麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上長出隆起、濕潤、中等大小、粉紅色的菌落；伊紅-美藍瓊脂培養(yǎng)基上長出紫黑色帶金屬光澤的菌落。將上述培養(yǎng)物涂片、革蘭氏染色鏡檢，可見革蘭氏染色陰性、單在、兩端鈍園、中等大小的短桿菌，無芽胞和莢膜。分離菌符合大腸桿菌的培養(yǎng)特性。

4.4 生化試驗

隨機選擇分離到的3株菌進行生化鑒定。試驗方法和判定結(jié)果按文獻[1]進行。結(jié)果3株菌M.R和靛基質(zhì)均陽性；V-P、H2S、尿素酶、檸檬酸鹽分解和明膠液化均陰性；分解葡萄糖、甘露醇、麥芽糖產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣；分解乳糖、山梨醇和阿拉伯糖產(chǎn)酸；蔗糖、衛(wèi)矛醇、水楊苷、棉子糖和鼠李糖產(chǎn)酸或不分解；不分解肌醇。3株菌均符合大腸桿菌生化反應特性。

4.5 致病力試驗

選取3株菌參照文獻[1]各做活菌計數(shù)后制成菌液備用。取臨床檢查健康的15日齡肉雜雛公雞20只，分為4組，5只/組；第1～3組為試驗組，每組的每只雞分別腹腔接種第1～3株菌的菌液各0.2 ml/只（含菌1.0億）；第4組腹腔注射無菌生理鹽水0.2 ml作為對照組。接種后隔離飼養(yǎng)。結(jié)果3組試驗雞在4～7日齡內(nèi)全部死亡，并從病料中回收到接種菌。對照組存活。

4.6 藥敏試驗

采用藥敏紙片法進行藥敏試驗測定，試驗方法和判定標準按文獻[2]進行。結(jié)果對慶大霉素、甲砜霉素、丁胺卡那霉素高度敏感；對卡那霉素、氟哌酸、新霉素、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、頭孢氨芐中度敏感；對鏈霉素、土霉素、強力霉素、氨芐青霉素、紅霉素、麥迪霉素和磺胺甲基乙噁唑不敏感。

4.7 禽流感血清亞型鑒定

用禽流感病毒H9亞型（抗原批號：201201，陽性血清批號：201202）和H5亞型（H5Re-4抗原批號：201205，H5Re-5抗原批號：201202，陽性血清批號：201201；均購自哈爾濱獸醫(yī)研究所）標準抗原與20份分離血清進行血凝抑制（HI）試驗，試驗操作及判定均按文獻[3]進行。20份血清的H9和 H5HI檢測值分布結(jié)果見表。從檢測結(jié)果看，H5未檢測到抗體；H9檢測到了抗體，其中1∶16以上抗體陽性率達到80%（16/20），最高達到1∶512。

4.8 新城疫抗體檢測

20份血清進行了新城疫抗體檢測（抗原批號：20110321，陽性血清批號：20110321，均購自哈爾濱獸醫(yī)研究所），采用血凝抑制試驗（HI）法，按照文獻[4]進行操作及判定。20份血清的新城疫HI檢測值分布結(jié)果見表1。經(jīng)統(tǒng)計，雞群新城疫血清HI效價在≥6log2的血清比例80%（16/20）。

表1 禽流感和新城疫抗體效價檢測結(jié)果

根據(jù)流行病學情況調(diào)查，臨床癥狀和病理變化觀察以及實驗室診斷，雞群發(fā)病為H9亞型禽流感、大腸桿菌和球蟲混合感染所致。

5 防治情況

5.1 加強飼養(yǎng)管理

一是挑出瘦弱、精神差、無治療價值的病雞，一次性進行淘汰深埋處理。二是將地面的雞全部清理上網(wǎng)，網(wǎng)養(yǎng)的雞大幅度降低飼養(yǎng)密度。三是加強飼養(yǎng)管理，注意雞舍通風換氣，雞舍溫、濕度適宜，增強雞體抵抗力。四是強化衛(wèi)生消毒措施，及時清理雞糞，進行帶雞消毒，1次/日，連續(xù)消毒1周；對用具、食槽、水槽、污染場地嚴格消毒。五是盡可能減少各種應激因素的刺激。

5.2 疫苗接種

所有雞群于8月12日全部緊急接種H9亞型禽流感疫苗，注射劑量為0.5 ml/只。

5.3 注意事項

鑒于這些雞群前期已大量使用了抗生素和抗病毒藥物，故注射H9亞型禽流感疫苗后3 d內(nèi)停喂一切抗生素和抗病毒藥物；給予亞硒酸鈉-維生素E和拜固舒飲水，每日各2次，按說明連續(xù)應用3 d。第4 d采用甲砜霉素按使用說明飲水，連用3 d；強效氨丙啉按使用說明書拌料混飼，連用5 d。第6 d開始在飼料中加入健胃消食類中藥拌料混飼，連用5 d。

經(jīng)采取以上措施，在注苗后第7 d（8月18日齡）發(fā)病數(shù)逐漸減少，第9 d開始，發(fā)病數(shù)明顯減少，第12 d后，除個別雞死亡外，雞群病情基本穩(wěn)定，不再出現(xiàn)新的發(fā)病死亡病例。

6 小結(jié)與討論

6.1 診斷過程

本病發(fā)生后，曾經(jīng)診斷為大腸桿菌病和球蟲病，給予了抗生素和抗球蟲藥物進行治療，但并沒有有效的控制疫病的進一步發(fā)生，證明診斷有誤。根據(jù)流行病學調(diào)查、臨床癥狀和病理變化觀察以及實驗室診斷，確診本次雞群發(fā)病為H9亞型禽流感、大腸桿菌病和球蟲病混合感染所致。經(jīng)分析認為，應把禽流感作為主要發(fā)生疾病來控制，采取了注射疫苗的辦法，對大腸桿菌病和球蟲病采用敏感藥物進行治療，并同時采取其他的防治措施，通過綜合性防治措施的應用，有效控制了本次疫情的進一步發(fā)生。

6.2 原發(fā)病確認

中衛(wèi)市沙坡頭區(qū)在1999～2000年即發(fā)生H9亞型禽流感，為H9亞型禽流感疫區(qū)[5]。本次發(fā)病的雞群沒有進行過H9亞型和H5亞型禽流感疫苗的免疫，雞體缺乏免疫保護力，由于疫源的長期存在，雞群發(fā)生H9亞型禽流感在所難免，分析認為H9亞型禽流感應為原發(fā)病。同時，由于受雞群飼養(yǎng)密度大、雞舍空氣污濁、雞群與地面的糞污接觸、衛(wèi)生消毒措施不力等因素的影響，雞群在極差的環(huán)境條件中飼養(yǎng)，極易感染發(fā)生大腸桿菌病和球蟲病。雞群發(fā)病后，由于沒有做出準確診斷，未對H9亞型禽流感感染情況采取措施，只是針對大腸桿菌病和球蟲病進行治療，雖然應用藥物治療后有一定的效果，但不能從根本上控制疫病的進一步發(fā)生，并延誤了病情的控制。因此，如果不考慮控制禽流感而只考慮控制大腸桿菌病和球蟲病，原發(fā)病在不能控制的前提下，既使選擇了對大腸桿菌病和球蟲病高度敏感的藥物進行治療，治療效果也不會理想，疫病會繼續(xù)發(fā)生。

6.3 H9亞型禽流感的發(fā)病特點

從H9亞型禽流感的發(fā)病特點觀察看[5]，育雛育成蛋雞（包括肉雞）感染后多表現(xiàn)為以呼吸道癥狀為主，發(fā)病率和死亡率較低，常診斷為其他病因引起的呼吸道疾病。養(yǎng)雞戶僥幸認為育雛育成雞不易發(fā)生H9亞型禽流感，加之疫苗成本和注射疫苗工作量大等因素的影響，養(yǎng)雞戶只重視高致病性H5亞型禽流感的免疫，只重視產(chǎn)蛋雞群的免疫，而對育雛育成雞H9亞型禽流感的免疫不重視，不按程序進行免疫。因此，養(yǎng)雞戶應該按照免疫程序做好免疫的同時，做好H5和H9亞型禽流感病的免疫預防。否則，育雛育成雞在發(fā)生了H9亞型禽流感后，一方面，由于臨床癥狀不典型，不易做出正確診斷；另一方面，雞體由于免疫抵抗力差，易于繼發(fā)感染大腸桿菌病或其他疾病，常造成混合感染，給診斷和防治工作帶來更大困難。

[1]房海.大腸埃希氏菌[M].河北：科學技術(shù)出版社，1997.

[2]傅先強，劉占君等編.養(yǎng)禽場禽病檢驗手冊[M].北京：中國農(nóng)業(yè)科技出版社，1997.

[3]中華人民共和國國家標準（GB/T 18936-2003）.高致病性禽流感診斷技術(shù).

[4]中華人民共和國國家標準（GB 16550-1996）.新城疫檢疫技術(shù)規(guī)范.

[5]韓梅英，劉國華，許衛(wèi)戈，等.雞H9亞型禽流感的發(fā)病特點與防治研究[A].中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學分會第13次學術(shù)研討會論文集[C].長沙：中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學分會，2006.