賴小芳，項玉英，王伯誠，陳銀龍

(浙江省臺州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 臨海 317000)

近年來，隨著臺州市草莓種植面積的不斷擴(kuò)大、銷量不斷遞增，莓農(nóng)迫切希望通過對草莓品種的更新?lián)Q代來尋求該產(chǎn)業(yè)的利益最大化。紅頰草莓具有長勢旺、產(chǎn)量高、果型大、食味佳、外觀美觀、耐貯運(yùn)和商品性好等優(yōu)點，是很有發(fā)展前途的優(yōu)良新品種［1］。自引進(jìn)以來，面積逐年提升，種苗供不應(yīng)求，深受莓農(nóng)歡迎，目前已成為臺州市的當(dāng)家品種。草莓繁殖主要通過匍匐莖分株繁殖提供種苗，繁殖系數(shù)低，易感染病毒，產(chǎn)量和品質(zhì)下降，影響其經(jīng)濟(jì)價值，成為阻礙草莓生產(chǎn)的主要問題。應(yīng)用離體快繁技術(shù)不僅可以解決大量優(yōu)質(zhì)草莓種苗的供應(yīng)，有利于品種提純和更新，而且還可用于脫毒和無病毒種苗繁殖，加快新品種推廣。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗選用仙居縣田市鎮(zhèn)提供的草莓新品種紅頰，取其長勢好、無病蟲健壯母株的匍匐莖尖作為外植體。

1.2 試驗方法

草莓莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.50mg·L-1+NAA 0.01mg· L-1［2］;增殖培養(yǎng)基為MS+NAA 0.02mg· L-1+6-BA(0.05，0.10，0.20，0.50，1.00，1.50mg·L-1)，共 6個;生根培養(yǎng)基分別為1/2MS+0.1%AC，1/2MS+NAA 0.02 ～ 0.05mg·L-1+0.1%AC、1/2MS+IBA 0.02 ～ 0.05mg·L-1+0.1%AC［3］，共 5 個上述培養(yǎng)基中添加白砂糖30 g·L-1、瓊脂粉5 g·L-1，pH值5.8;培養(yǎng)室培養(yǎng)溫度為 (23±2)℃，光照強(qiáng)度為1500 lx，光照時間為10 h·d-1。然后觀察記載采用不同組培技術(shù)的培養(yǎng)效果，最后將長根苗移栽到事先準(zhǔn)備好的3種不同基質(zhì)配比的穴盤里，觀察其移栽成活率。

移栽方法采用杭州錦海農(nóng)業(yè)科技有限公司提供的金色3號育苗基質(zhì)，草莓長根苗移栽到金色3號與珍珠巖按體積不同配比的基質(zhì)中，移栽前將2種基質(zhì)澆水拌均，移栽后再用灑水壺灑水定根，適當(dāng)遮蔭，保持基質(zhì)濕潤。

2 結(jié)果與分析

2.1 無菌苗的獲得與不定芽誘導(dǎo)

將選取的材料用自來水沖洗1 h，然后置于無菌操作臺上，用75%酒精振蕩消毒20 s，再用0.1%升汞加Twin-80消毒8min，最后用無菌水沖洗5～6次，然后在無菌條件下切取0.5 cm左右長的莖尖，分別接到事先配制好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。15 d后基部即有愈傷組織形成，以后愈傷組織塊上慢慢分化出密密的綠色小芽，但這些小芽細(xì)弱且生長緩慢。

2.2 叢生芽的壯苗增殖培養(yǎng)

將叢生芽分割開來，分別接到不同的增殖培養(yǎng)基中，觀察在各培養(yǎng)基中的生長情況 (表1)。處理1與2在20 d后其基部就有多個增殖芽出現(xiàn)，生長較快、植株健壯。如將基部的幼芽切成單芽繼續(xù)繼代培養(yǎng)，以此方法反復(fù)繼代可獲取大量的增殖芽，增殖系數(shù)為4～5，且叢芽生長健壯濃綠，繼代周期適宜，一般為30～35 d;處理3與4上部零星葉片有玻璃化，生長較快;而6-BA濃度大于1.00mg·L-1的處理5與6形成的叢芽生長緩慢，莖葉變脆硬，易碎，繼代困難，盡至無法接種繼代，有效苗很少;隨著6-BA濃度的增加，玻璃化程度有加重趨勢，因此最適增殖培養(yǎng)基配方為MS+6-BA 0.10mg·L-1+NAA 0.02mg·L-1。此外，室內(nèi)光照強(qiáng)度與培養(yǎng)溫度對試管苗生長影響也較大，如溫度超過25℃，玻璃苗現(xiàn)象嚴(yán)重，試管苗最適培養(yǎng)溫度為22 ～25℃，最適光照強(qiáng)度為1500 lx。

2.3 生根培養(yǎng)

把增殖培養(yǎng)基中的叢生植株取出，將叢芽分切成單芽轉(zhuǎn)接到各個生根培養(yǎng)基中，觀察它們的生長情況。從表2可以看出，紅頰草莓的增殖芽在添加激素IBA的處理4與處理5中生長快、長勢旺盛，25 d可長成高4～5 cm、具有5～6根左右新根的健壯植株，生根率達(dá)100%。而添加NAA則誘導(dǎo)了根部愈傷組織發(fā)生，方能生根，但根毛細(xì)弱，清洗麻煩且易傷害根系，移栽成活率較低，不適合作為生根培養(yǎng)基添加的激素。可見在1/2MS培養(yǎng)基中添加IBA可以促進(jìn)生根［4］，提高平均根數(shù)，所以最適生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.05mg·L-1+0.10%AC。

表1 不同激素濃度對試管苗增殖與株高的影響

表2 不同激素與濃度對誘導(dǎo)生根與長勢的影響

2.4 試管苗的移栽技術(shù)

將長根苗移至常溫條件下室內(nèi)煉苗，接受窗外散射光照射，經(jīng)過1周左右的鍛煉后，可見幼苗莖稈顏色變深，最好轉(zhuǎn)為紫紅色，表明幼苗已經(jīng)具備適應(yīng)外界環(huán)境的生理條件，此時即可選擇晴天進(jìn)行移栽［5］。移栽時將培養(yǎng)瓶內(nèi)的小苗輕輕取出，用清水將根部附著的瓊脂清洗干凈，盡量不傷及根系。

經(jīng)試驗，紅頰草莓長根苗適宜移栽到金色3號與珍珠巖按體積比1∶2混合基質(zhì)中，移栽前將2種基質(zhì)澆水拌均，移栽后再用灑水壺灑水定根，適當(dāng)遮蔭，保持基質(zhì)濕潤，長根苗移栽成活率達(dá)100%，無根苗成活率也比較高 (表3)。

表3 不同種類基質(zhì)配比對移栽成活率的影響

另據(jù)試驗經(jīng)驗，放置穴盤苗的環(huán)境不容忽視，若直接放置在悶熱的連棟大棚或普通的塑料大棚里，即使蓋上遮陽網(wǎng)成活率也會很低。穴盤苗宜放置在尼龍薄膜小拱棚內(nèi)，小拱棚兩頭揭開，一直保持空氣流暢，在小拱棚外面再搭置一層遮陽網(wǎng)，遮陽網(wǎng)高度適宜，以便于工作人員管理操作。放置穴盤的地面移栽的前1 d灌熱開水殺蟲消毒1次;移栽后若高溫天氣，每天揭膜噴水1次，若天氣比較陰涼，3～5 d噴1次水。

3 小結(jié)與討論

試驗結(jié)果表明，草莓紅頰莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.50mg·L-1+NAA 0.01mg·L-1，最適增殖培養(yǎng)基為 MS+6-BA 0.10mg·L-1+NAA 0.02mg·L-1，增殖系數(shù)可達(dá)4～5，生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.05mg·L-1+0.1%AC。在此過程中，要防止試管苗玻璃化現(xiàn)象，措施是降低激素6-BA濃度，同時可結(jié)合降低室內(nèi)培養(yǎng)溫度與光照強(qiáng)度;生根誘導(dǎo)階段，在1/2MS培養(yǎng)基中添加IBA可以促進(jìn)生根，提高平均根數(shù)，而添加NAA則誘導(dǎo)了根部愈傷組織發(fā)生，雖大部分能生根，但根毛細(xì)弱，清洗麻煩且易傷害根系，移栽成活率較低，不適宜作為生根培養(yǎng)基添加的激素。

試驗中長根苗適宜移栽到金色3號與珍珠巖按體積比1∶2混合基質(zhì)中，移栽成活率達(dá)到100%，甚至有些無根苗成活率也比較高。另外穴盤苗的放置環(huán)境與地面消毒也是不容忽視的一個重要環(huán)節(jié)。

［1］陳懷勐，高麗，路河，等.紅顏草莓莖尖組培脫毒苗技術(shù)研究 ［J］.生物技術(shù)，2011(1):6-8.

［2］郭月玲，解振強(qiáng)，王永平，等.我國草莓組織培養(yǎng)生產(chǎn)研究現(xiàn)狀及前景 ［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010(6):12-13.

［3］譚文澄.觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù) ［M］.北京:中國林業(yè)出版社，1997:143.

［4］孫永平，高年春，張瓊，等.紅頰草莓組培快繁技術(shù)研究［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011(5):63-64.

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