王勇，劉艷秋

（三明學(xué)院體育學(xué)院，福建三明365004）

補充黃柳菇總黃酮對過度訓(xùn)練大鼠血清抗氧化酶活性的影響

王勇，劉艷秋

（三明學(xué)院體育學(xué)院，福建三明365004）

通過對過度訓(xùn)練大鼠補充黃柳菇總黃酮，觀察大鼠血清中抗氧化酶活性的變化，探討過度訓(xùn)練后機體的氧化損傷狀況及黃柳菇總黃酮對氧自由基的清除效果。結(jié)果表明，過度訓(xùn)練后的大鼠血清抗氧化酶系受到嚴(yán)重破壞，而補充黃柳菇總黃酮的大鼠在不同程度上改變了血清抗氧化酶的活性,表明黃柳菇總黃酮可有效降低過度訓(xùn)練造成的機體氧化損傷。

黃柳菇;總黃酮；過度訓(xùn)練；血清抗氧化酶

黃柳菇[Pholiota adipasa(Fr)Quel]是一種食藥兼用真菌。該菌肉質(zhì)滑嫩,香味濃郁,營養(yǎng)豐富,含有豐富的多糖、粗蛋白、氨基酸、維生素、微量元素及總黃酮類化合物等營養(yǎng)物質(zhì)[1-2]。眾多研究表明,黃柳菇總黃酮能改善心肌缺血[3],降低心肌耗氧量,是一類重要的天然抗氧化劑,對氧自由基有很強的清除作用,可減少機體的氧化損傷,保護功能蛋白質(zhì)(包括酶類)的活性和維護細(xì)胞膜的完整性。本研究旨在探討過度訓(xùn)練對大鼠血清抗氧化酶的影響，并為黃柳菇總黃酮發(fā)揮其潛在的經(jīng)濟價值和功能價值提供參考依據(jù)，也對黃柳菇總黃酮在運動實踐中應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

1 實驗材料與方法

1.1 實驗對象與分組

Sprague-Dawley大鼠24只,上海斯萊克實驗動物中心提供，體重220～250 g，隨機分為3組：安靜組（A）、過度訓(xùn)練組（B）、黃柳菇總黃酮+過度訓(xùn)練組（C）,每組各8只，每組每天各自攝食飲水。實驗期間，動物自由攝食、飲水，室溫24±5℃，相對濕度50％～65％。

1.2 動物模型的建立

過度訓(xùn)練組和黃柳菇+過度訓(xùn)練組在運動跑臺上適應(yīng)訓(xùn)練5 d后，休息2 d開始為期8周的訓(xùn)練。訓(xùn)練過程分為6周基礎(chǔ)訓(xùn)練階段和2周大強度訓(xùn)練階段，每周訓(xùn)練5 d；基礎(chǔ)訓(xùn)練期間，每次20 min,跑速每周以3 m/min遞增,分別為15,18,21,24,27,30 m/min共6周；大強度訓(xùn)練期間每天訓(xùn)練30 min,速度35 m/min,共2周。

1.3 黃柳菇總黃酮的提取

黃柳菇子實體由福建省三明真菌研究所培育提供，依次用自來水、蒸餾水清洗，吸干表面水分，烘干，制成粉末樣品，通過水提工藝對黃柳菇總黃酮進(jìn)行提取。再用蒸餾水清洗濾渣數(shù)次，離心并合并上清液，測定含量。黃柳菇粗總黃酮經(jīng)純化后的沉淀物于65℃的干燥箱中烘干，得黃柳菇總黃酮。

1.4 動物用藥

黃柳菇+過度訓(xùn)練組每天在訓(xùn)練前0.5h，灌喂黃柳菇總黃酮2 mL，劑量為200 mg/kg·d，安靜組和過度訓(xùn)練組灌喂相同體積的蒸餾水，持續(xù)8周。

1.5 樣品的取材、制備及觀察方法

過度訓(xùn)練組和黃柳菇總黃酮干預(yù)組最后一次訓(xùn)練至力竭，其判定標(biāo)準(zhǔn)為大鼠跟不上跑臺的預(yù)定速度,大鼠臀部壓在籠具后壁,后肢隨轉(zhuǎn)動皮帶后拖達(dá)30 s,經(jīng)電刺激與驅(qū)趕仍無效[9]。對達(dá)到過度訓(xùn)練力竭判斷標(biāo)準(zhǔn)的大鼠，立即對大鼠進(jìn)行稱重、跑距、力竭時間的記錄，用乙醚進(jìn)行麻醉后斷頭取血。血清制備：斷頭取血置于37℃水浴60 min,以3500 r/min離心15 min，取血清在1～4℃的冰箱保存，待測。

1.6 試劑盒選用

超氧化物岐化酶（SOD）、總抗氧化能力（T—AOC）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH—PX）、過氧化氫酶（CAT）、一氧化氮合成酶（NOS）、肌酸激酶（CK）及一氧化氮合酶（NOS）及丙二醛（MDA）等試劑盒，均由南京建成生物制劑公司生產(chǎn)，嚴(yán)格按照說明操作。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理

2 研究結(jié)果

2.1 黃柳菇總黃酮對過度訓(xùn)練大鼠血清SOD、MDA的影響

表1研究結(jié)果表明，B組和C組同安靜組大鼠相比，血清中的SOD活性和MDA含量都發(fā)生了顯著性變化。其中B組大鼠血清SOD同A組大鼠的血清SOD活性相比明顯較低，存在極顯著性差異（P＜0.01），而C組存在顯著性降低（P＜0.05），C組比B組存在顯著性升高（P＜0.05）升高；B組和C組大鼠血清中MDA含量與A組相比均有極顯著性升高（P＜0.01）；表明過度訓(xùn)練后由于自由基生成加劇，導(dǎo)致血清中的超氧化物岐化酶（SOD）活性顯著性降低,清除自由基的能力下降，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物（MDA）顯著性升高，黃柳菇總黃酮有利于增強血清抗氧化能力，改善機體的抗氧化防御體系。

表1 補充黃柳菇總黃酮對過度訓(xùn)練大鼠血清SOD、MDA的影響

2.2 黃柳菇總黃酮對過度訓(xùn)練大鼠血清抗氧化酶的影響

實驗數(shù)據(jù)表明（表2），血清中的CAT、GSH-PX、NOS、T—AOC等酶活性在過度訓(xùn)練后均呈現(xiàn)出顯著性變化，B組大鼠的CAT、GSH-PX、NOS活性呈現(xiàn)出顯著性降低（P＜0.05），T—AOC呈現(xiàn)極顯著性降低（P＜0.01）；C組大鼠的CAT、GSH-PX、T—AOC活性與A組相比呈現(xiàn)出顯著性降低（P＜0.05），NOS活性呈現(xiàn)極顯著性降低（P＜0.01）；C組大鼠的CAT、GSH-PX、NOS、T—AOC活性與B組相比呈現(xiàn)出顯著性降低（P＜0.05）；數(shù)據(jù)顯示B組與C組相比血清中抗氧化酶均有顯著性改善（P＜0.05），表明黃柳菇總黃酮能有效改善機體在過度訓(xùn)練后血清中抗氧化酶活性，對于改善組織抗氧化防御體系有重要意義。

表2 補充黃柳菇總黃酮對過度訓(xùn)練大鼠血清中抗氧化酶的影響

2.3 黃柳菇總黃酮對過度訓(xùn)練大鼠血清CK的影響

實驗后B組與C組大鼠血清CK均顯著高于安靜組（表3），存在顯著性差異（P＜0.05）或極顯著性降低（P＜0.01），同時B組大鼠血清中CK顯著高于C組，存在顯著性差異（P＜0.05）；實驗結(jié)果顯示，過度訓(xùn)練后血清中的CK含量顯著性升高，而黃柳菇總黃酮干預(yù)下有顯著性的改善。

表3 黃柳菇總黃酮對過度訓(xùn)練大鼠血清CK的影響

3 結(jié)果分析與討論

過度訓(xùn)練[4-6]是指由于運動負(fù)荷與機體機能不相適應(yīng)，是訓(xùn)練與恢復(fù)、運動與運動能力、應(yīng)激與應(yīng)激耐受性之間的一種失衡狀態(tài)，將引發(fā)一系列功能紊亂或病理狀態(tài)，對運動能力與健康有重要危害。大量研究表明[7-9]，運動時機體產(chǎn)生自由基的量及組織中抗氧化酶的活性與運動強度和時間有密切關(guān)系，而過度訓(xùn)練后由于運動量超過機體的耐受范圍，引發(fā)機體出現(xiàn)病理性損傷，其中一個重要的方面是過度運動后自由基大量產(chǎn)生對機體內(nèi)部的抗氧化系統(tǒng)的嚴(yán)重破壞。實驗結(jié)果表明，過度訓(xùn)練組大鼠的血清SOD活性極顯著性下降，表明SOD表現(xiàn)出較強的清除自由基功能，但MDA的大量生成說明過度運動后機體氧自由基大量生成，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出機體的清除能力，致使自由基代謝失衡,各組織器官內(nèi)的氧化損傷加劇。但黃柳菇總黃酮干預(yù)下的運動大鼠血清中SOD/MDA表現(xiàn)出良好的變化，表明黃柳菇總黃酮具有增進(jìn)SOD活性，降低過度運動后的機體脂質(zhì)過氧化反應(yīng)并保護機體。過度訓(xùn)練后機體血清中抗氧化酶系統(tǒng)中T—AOC、GSH—PX、CAT等酶活性發(fā)生顯著性變化，其中TAOC是機體防御體系的抗氧化能力的整體表現(xiàn)，GSH-Px、CAT是機體內(nèi)廣泛存在的重要的催化過氧化氫分解的酶，可以起到保護細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用。NOS是NO合成的限速酶，對改善血管血流有重要作用。許多研究證明[10-12]，運動訓(xùn)練對機體NO和NOS有一定的影響。從研究結(jié)果觀察到，過度訓(xùn)練后抗氧化酶活性有顯著性降低，而補充黃柳菇總黃酮，可以使過度訓(xùn)練組的血清抗氧化酶活性有良好改善；NOS在黃柳菇總黃酮干預(yù)下得到顯著性升高，其可能通過增加NO的合成，促進(jìn)血流加速、改善血液循環(huán)，進(jìn)一步加強自由基清除能力，有利于提高過度運動后對于機體組織的保護功能。過度訓(xùn)練后血清CK活性顯著性增加，表明骨骼肌細(xì)胞膜損傷嚴(yán)重，但在過度訓(xùn)練前補充黃柳菇總黃酮，可以使C組的血清CK的活性低于過度訓(xùn)練組，證明過度訓(xùn)練時,外源性補充黃柳菇總黃酮可減少機體的氧化損傷。

4 結(jié)論

研究結(jié)果表明，過度訓(xùn)練后大鼠血清中主要的抗氧化指標(biāo)SOD、T—AOC、GSH—PX、CAT等抗氧化酶均有顯著性或極顯著性下降，表明機體的防御體系受到嚴(yán)重破壞，過氧化損傷導(dǎo)致MDA、CK顯著性增加。補充黃柳菇總黃酮后大鼠血清抗氧化體系中的主要指標(biāo)均有良好變化，表明補充黃柳菇總黃酮可以降低機體的氧化性損傷,提高血清抗氧化酶的活性,對改善機體的氧化損傷有良好作用，為黃柳菇總黃酮其潛在的經(jīng)濟價值和功能價值提供了深入研究的理論依據(jù)。

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Supplementary pholiota adiposa Total Flavonoids on Serum Antioxidant Enzyme Activity in Rats Overtraining

WANG Yong,LIU Yan-qiu
(College of Physical Education,Sanming University,Sanming 365004,China)

Changes in antioxidant enzyme activities in the serum are observed through overtraining rats supplemented pholiota adiposa total flavonoid and overtraining oxidative damage of the body's condition and pholiota adiposa total flavonoids Ioxygen radical scavenging effect are explored in this paper.The results show that overtraining serum antioxidant enzyme system has been severely damaged，supplemental pholiota adiposa total flavonoids rat change serum antioxidant enzyme activity in varying degree,which show pholiota adiposa totalflavonoidscan effectivelyreduce the oxidative damage caused byovertraining.

Pholiota adiposa;total flavonoids;over-training;serum antioxidase

G804.7

A

1673-4343（2013）02-0017-04

2013-01-05

三明學(xué)院科學(xué)研究發(fā)展基金項目（B201014/Q）；福建省教育廳自然科學(xué)研究項目(JA10265)

王勇,男,安徽淮北人，講師。研究方向：運動生理、生化與營養(yǎng)。