郭 婕，胡春紅，趙錦慧

（周口師范學院 生命科學系，河南 周口466001）

中草藥以天然植物作為原料而被廣泛認為比西藥安全，因此，中草藥的開發(fā)利用成為一些學者關注的焦點.有關中草藥抑菌方面的研究已見大量報道［1-3］，對具抑菌作用的藥理活性物質(zhì)的成分分析、分離純化及含量與抑菌效果的相關性研究，將有助于人們更好研究植物性殺菌劑及開發(fā)利用寶貴的中草藥資源.筆者以常引起各種炎癥發(fā)生的罪魁禍首——大腸桿菌為供試菌種，通過試管稀釋法，研究4種中草藥（野黃菊花、懷牛膝、金銀花、苦地?。┑囊志Ч⒊醪教接懥艘志幚砘钚晕镔|(zhì)含量與其抑菌效果的相關性.

1 材料與方法

1.1 實驗材料

4種中草藥：野黃菊花、懷牛膝、金銀花、苦地丁.供試菌種：大腸桿菌

1.2 實驗方法

1.2.1 藥液的制備

準確稱取干燥后的野黃菊花168g，置砂鍋中，加蒸餾水1000mL，浸泡30min后，先用大火煮沸，改用中小火繼續(xù)加熱40min，用紗布過濾得濾液，在濾渣中加入等量蒸餾水煮1h，過濾得濾液.收集兩次濾液，離心、濃縮為含生藥藥量4g／mL，滅菌后作為母液，4℃保存?zhèn)溆?其他3種中藥液制備方法同上.

1.2.2 培養(yǎng)基制備及滅菌

參照相關資料［4］制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，滅菌后，分別用于菌種活化和抑菌實驗.

1.2.3 菌種活化與大腸桿菌懸浮液的制備

無菌操作，將冷藏的菌種用接種環(huán)接種于上述固體培養(yǎng)基上，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h.如此培養(yǎng)活化菌種3代后，用10mL無菌水進行洗脫，將洗脫液接種于100mL上述液體培養(yǎng)基，恒溫震蕩2h，即得大腸桿菌菌懸液，備用.

1.2.4 接種與實驗結(jié)果測定方法

4種中草藥培養(yǎng)液分別按照表1進行分組加樣，每組做3個平行.加樣后，37℃下?lián)u床培養(yǎng)18 h.以“對照＊”進行調(diào)零，在560nm波長處測定其余8組光密度OD值.

參照相關資料［5］，分別采用分光光度法、三氯化鋁比色法、酒石酸鐵比色法測定4種中草藥母液中多糖類、黃酮類、多酚類含量.

2 結(jié)果與分析

2.1 4種中草藥母液中3種主要成分的含量

4種中草藥母液中3種主要成分含量見表2.

表1 不同實驗組加樣情況

表2 4種中草藥3種主要成分含量

由表2可知：4種中草藥均以黃酮類含量最多，而多糖類、黃酮類、多酚類3種成分均以野黃菊花含量最多，其次為苦地丁、金銀花，懷牛膝含量最少.

2.2 4種中草藥對大腸桿菌的抑菌效果

運用SPSS16.0統(tǒng)計軟件，采用one-way ANOVA方法對所測抑菌實驗結(jié)果的OD值進行統(tǒng)計分析，結(jié)果見表3.為了降低實驗誤差，取各中草藥對照組的平均OD值與各濃度下平均OD值之差為縱坐標（差值越大，說明抑菌效果越好），中草藥濃度為橫坐標作圖，見圖1.

圖1 4種中草藥不同濃度下的抑菌效果

由圖1和表3可知，4種中草藥對大腸桿菌的抑菌效果，基本上呈現(xiàn)出隨濃度增加而增強的趨勢.與對照組相比，野黃菊花、懷牛膝、苦地丁和金銀花的抑菌效果分別在濃度≥0.4g／mL、0.6g／mL、1.0g／mL、0.2g／mL時，達差異顯著水平.但由圖1知，在相同濃度下，抑菌效果強弱依次為野黃菊花＞懷牛膝＞苦地?。窘疸y花.

表3 4種中草藥抑菌情況分析表

2.3 抑菌活性與有效成分含量相關性

運用SPSS16.0統(tǒng)計軟件，對4種中草藥抑菌效果和3種有效成分含量進行相關分析，結(jié)果見表4.

表4 4種中草藥抑菌效果和3種有效成分含量的相關性

由表4知，4種中草藥的抑菌效果與其多糖類、黃酮類、多酚類含量的相關性以野黃菊花的最強，其次是苦地丁、金銀花，懷牛膝最弱.

3 討論與結(jié)論

實驗結(jié)果表明，4種中草藥均具有明顯的抑菌效果，且抑菌效果隨濃度增加而增強.相同濃度下，抑菌效果強弱依次為野黃菊花＞懷牛膝＞苦地?。窘疸y花，而抑菌效果與多糖類、黃酮類、多酚類含量的相關性從大到小依次為野黃菊花＞苦地?。窘疸y花＞懷牛膝.野菊花的化學成分主要有黃酮類、萜類、綠原酸類、多糖類，具有廣譜的殺菌效果，特別是對大腸桿菌具較強的抑菌效果［6，7］；苦地丁主要含生物堿、黃酮類、多糖類、酚類等物質(zhì)，具有廣譜的抑菌效果［8］；金銀花的化學成分主要有黃酮類化合物、綠原酸類、多糖類，具有一定的抑菌效果［9，10］；懷牛膝的主要化學成分為萜類、生物堿（小檗堿），具有抗生育、鎮(zhèn)痛、抗炎、增強免疫功能、抗衰老等作用［11，12］.黃酮類化合物，在抗菌、防病等方面起著重要的作用；多糖在抗腫瘤、抗炎、抗病毒等方面發(fā)揮著生物活性作用；多酚類物質(zhì)具有很強的抗氧化作用.因此，野黃菊花、苦地丁、金銀花可能均因含有黃酮類、多糖類、酚類或酚類衍生物而具抑菌效果，且抑菌效果與其有效成分含量具有較大的相關性.懷牛膝雖然具有較強的抑菌效果，但與其有效成分含量相關性卻最小，說明懷牛膝的抑菌效果可能與其含有的主要成分萜類和生物堿有關.

4種中草藥對大腸桿菌的抑制作用的時效性如何，抑菌效果與生物堿類、萜類的相關性怎樣，還有待進一步研究.

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