喬莉萍 黃銀君 薛飛群 張強(qiáng) 周衛(wèi) 馬全鴻 牟克斌 劉學(xué)榮

摘要：以過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus， FMDV）的殺滅效果進(jìn)行了研究。將過硫酸氫鉀復(fù)合物粉以不同比例稀釋后對(duì)小白鼠、成年鼠、白兔分別進(jìn)行皮下注射、灌服、斑貼試驗(yàn)進(jìn)行消毒劑安全性試驗(yàn)，對(duì)病毒懸液進(jìn)行了消毒劑滅活病毒效果試驗(yàn)。結(jié)果表明，過硫酸氫鉀復(fù)合物粉1∶100倍及以上稀釋對(duì)小白鼠、成年鼠及白兔安全；消毒劑100%殺滅口蹄疫病毒的最高稀釋度為1∶1 200。過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)口蹄疫病毒有良好的殺滅效果。

關(guān)鍵詞：口蹄疫病毒；過硫酸氫鉀復(fù)合物粉；殺滅效果

中圖分類號(hào)：S855.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）08-1877-03

口蹄疫（Foot and mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus，F(xiàn)MDV）所引起的偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病[1]。注射疫苗是控制口蹄疫的有效手段，但對(duì)畜舍的定期消毒及口蹄疫疫情發(fā)生后的消毒仍是重要的工作。強(qiáng)堿是一種對(duì)口蹄疫病毒有良好殺滅作用的消毒劑，但這種消毒劑對(duì)人和動(dòng)物有較大的毒害作用，現(xiàn)在已經(jīng)較少使用。隨著消毒劑研制方法的改進(jìn)，過硫酸氫鉀復(fù)合物粉逐漸受到人們的關(guān)注[2]。為觀察驗(yàn)證其對(duì)口蹄疫病毒殺滅效果，本試驗(yàn)對(duì)過硫酸氫鉀復(fù)合物粉的消毒作用進(jìn)行了探討，以期為有效控制口蹄疫提供理論支撐。

1 材料與方法

1.1 材料

過硫酸氫鉀復(fù)合物粉（有效氯含量不低于10.0%，由甘肅臨洮威特藥業(yè)有限公司提供，文中簡(jiǎn)稱消毒劑）。試驗(yàn)用病毒為O型口蹄疫乳鼠組織毒（LD50=10-8.0），由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所提供。試驗(yàn)用動(dòng)物為4日齡小白鼠、成年鼠、2月齡新西蘭白兔，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物場(chǎng)提供。

1.2 口蹄疫病毒懸液的制備

口蹄疫病毒懸液的制備按照參考文獻(xiàn)[1、2]進(jìn)行。將O型口蹄疫小白鼠組織毒（LD50=10-8.0）用0.04 mol/L的磷酸鹽緩沖液（pH 7.6）稀釋成1∶10倍病毒懸液，備用。

1.3 消毒劑安全性試驗(yàn)

用滅菌水將消毒劑按質(zhì)量體積比（m∶V，g/mL）稀釋成（1∶50、1∶100、1∶200、1∶400、1∶800、1∶1 000）后分別背部皮下注射4日齡小白鼠，每個(gè)濃度試驗(yàn)組注射5只，每只注射0.2 mL；設(shè)陰性對(duì)照組，每只小白鼠注射0.2 mL滅菌水。注射后連續(xù)觀察7 d。2次重復(fù)。

用滅菌水將消毒劑按質(zhì)量體積比（m∶V，g/mL）稀釋成（1∶100、1∶200、1∶400、1∶800、1∶1 000）后分別灌服成年鼠，每個(gè)濃度試驗(yàn)組灌服5只，每只灌服0.2 mL；陰性對(duì)照組，每只成年鼠灌服0.2 mL滅菌水。灌服后觀察7 d，2次重復(fù)。

用滅菌水將消毒劑按質(zhì)量體積比（m∶V，g/mL）稀釋成（1∶100、1∶200、1∶400），將5只白兔背部毛剪去，每個(gè)濃度試驗(yàn)組的消毒劑溶液1 mL均勻滴在白兔去毛皮膚表面；設(shè)陰性對(duì)照組，對(duì)照組白兔在去毛皮膚處滴1 mL滅菌水。觀察7 d，2次重復(fù)。

1.4 消毒劑對(duì)口蹄疫病毒殺滅效果試驗(yàn)

根據(jù)安全性試驗(yàn)的結(jié)果，在安全濃度范圍內(nèi)將消毒劑做濃度梯度稀釋（1∶800、1∶1 000、1∶1 200、1∶1 400、1∶1 600）后，與口蹄疫病毒懸液混勻，使病毒的終濃度達(dá)到1∶1 000，室溫作用30 min后，皮下注射3日齡小白鼠。試驗(yàn)組每只小白鼠背部皮下注射0.2 mL；陽性對(duì)照組，每組注射0.2 mL的1∶1 000的病毒懸液；陰性對(duì)照組，每組注射0.2 mL的滅菌水。每組5只小白鼠，注射后觀察7 d，重復(fù)2次。

1.5 結(jié)果判斷

1.5.1 消毒劑的安全性判定 試驗(yàn)組小白鼠全部健活或無不良反應(yīng)，判為安全，反之為不安全。

1.5.2 消毒劑對(duì)口蹄疫病毒殺滅效果的評(píng)價(jià) 陰性對(duì)照組小白鼠在觀察期間無異常表現(xiàn)，全部健活，同時(shí)陽性對(duì)照組小白鼠在接種病毒后全部發(fā)病死亡，并從小白鼠體內(nèi)檢測(cè)到口蹄疫病毒，試驗(yàn)成立。在試驗(yàn)成立的情況下，試驗(yàn)組小白鼠在觀察期間無異常表現(xiàn)，全部健活，判定該濃度下消毒劑有效；若試驗(yàn)組有小白鼠死亡，并從小白鼠體內(nèi)檢測(cè)到口蹄疫病毒，判定該濃度下消毒劑無效。

2 結(jié)果與分析

2.1 消毒劑的安全性試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)表明（表1、表2、表3），過硫酸氫鉀復(fù)合物粉1∶100倍及以上稀釋對(duì)小白鼠、成年鼠及白兔安全，并且注射部位的皮膚無炎癥。

2.2 對(duì)口蹄疫病毒殺滅效果

由表4可知，消毒劑100%殺滅口蹄疫病毒的最高稀釋度為1∶1 200。

3 討論

口蹄疫病毒屬于小RNA病毒科口蹄疫病毒屬，其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，由單股的核糖核酸和蛋白質(zhì)組成[3]。口蹄疫具有高度接觸性和快速遠(yuǎn)距離傳播的特點(diǎn)，因此加強(qiáng)環(huán)境消毒是防治口蹄疫的重要工作。

在傳統(tǒng)的口蹄疫病毒消毒過程中使用強(qiáng)堿類消毒產(chǎn)品，這類消毒劑能快速殺滅口蹄疫病毒，但對(duì)人和動(dòng)物的毒害作用較大。目前的口蹄疫防控多用新型、復(fù)合型消毒劑。過硫酸氫鉀復(fù)合物粉是一種基于酸性氧化體系的新型過氧化物消毒劑，以過硫酸氫鉀復(fù)合鹽為主要成分，輔以氯化鈉、表面活性劑等[4]。近年來，過硫酸氫鉀復(fù)合物粉作為一種廣譜、高效、低毒的獸用復(fù)方消毒劑被廣泛關(guān)注。過硫酸氫鉀復(fù)合物粉是美國環(huán)保局（EPA）批準(zhǔn)注冊(cè)的第一個(gè)惟一用于預(yù)防口蹄疫的獸用消毒劑。美國農(nóng)業(yè)部（USDA）已將其作為機(jī)場(chǎng)出入境消毒的常用消毒劑之一，來控制外來病原的入侵[5-7]。該消毒劑具有很強(qiáng)的氧化系統(tǒng)，溶解后產(chǎn)生各種高能量、高活性的小分子自由基、活性氧等衍生物，通過鏈?zhǔn)椒磻?yīng)系統(tǒng)破壞微生物細(xì)胞膜的通透性，干擾病原體的DNA和RNA合成，從而殺滅病原微生物[8]。過硫酸氫鉀復(fù)合物粉還具有強(qiáng)酸性（pH 2.2～2.6），可以殺滅各種病原微生物，并不受有機(jī)物影響，其代謝產(chǎn)物不會(huì)對(duì)人、動(dòng)物和環(huán)境帶來影響。過硫酸氫鉀復(fù)合物粉用于水體消毒時(shí)幾乎不產(chǎn)生三氯甲烷等有毒產(chǎn)物；與含氯消毒劑相比，當(dāng)pH≥6.5時(shí)殺菌效率高于氯系列消毒劑；與過氧化氫、過氧乙酸等消毒劑相比，性狀穩(wěn)定，易于保管儲(chǔ)藏而且運(yùn)輸方便；可現(xiàn)場(chǎng)配制，溶解迅速，其對(duì)水質(zhì)無嚴(yán)格要求。

試驗(yàn)研究表明，過硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)口蹄疫病毒具有明顯的殺滅作用，是一種安全、有效的非氯氧化型消毒劑，值得在口蹄疫防治中應(yīng)用推廣。

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