王蕊蕊 燕金霞 朱太雷 葛 莉 牛宇東 馮一凡

陜西中醫(yī)學(xué)院2011級研究生（咸陽712046）

平喘膠囊為陜西省中醫(yī)醫(yī)院的院內(nèi)制劑，由丹參、莪術(shù)、麻黃、浙貝母、炙黃芪、地龍、白僵蠶等藥物組成，具有補(bǔ)益肺腎，降氣平喘之功，用于治療肺腎氣虛，痰瘀內(nèi)阻所致氣短氣喘，喉間痰鳴，痰粘難咳。其中丹參、莪術(shù)、地龍、炙黃芪等藥材以水提取入藥。為了有效地控制提取工藝，本文參考有關(guān)文獻(xiàn)［1－6］，采取正交試驗(yàn)法，以丹酚酸B和干膏量為評價(jià)指標(biāo)，確定最佳水提取工藝條件。

1 儀器與試藥 1.1 試藥 試驗(yàn)所用中藥均由本院藥劑科提供，經(jīng)檢驗(yàn)均符合《中國藥典》2010年版一部的規(guī)定；丹酚酸B（中國藥品生物制品檢定所，批號111562－200807），所用化學(xué)試劑為分析純（西安化學(xué)試劑廠）、液相用試劑為色譜純（美國TEDIA公司）、水為超純水。

1.2 儀器 高效液相色譜儀（Lab Alliance型恒流泵；Waters966二極管陣列檢測器，活德國際貿(mào)易（上海）有限公司；Millennium 32色譜工作站）；C18色譜柱（Diamosil 4.6mm×250mm，5μm）、KQ3200型超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、BP211D型電子分析天平（德國賽多利斯天平有限公司）、超純水器（Millipore）。

2 方法與結(jié)果 2.1水提工藝正交設(shè)計(jì) 為了確定最佳的提取參數(shù)，擬采用正交試驗(yàn)對水提取工藝中所涉及的條件進(jìn)行優(yōu)選，通常情況下：提取時(shí)間、加水量、提取次數(shù)對提取結(jié)果影響較大，因此，以提取時(shí)間A、加水量B、提取次數(shù)C作為影響因素，各選擇3個(gè)水平，以L9（34）表安排試驗(yàn)，篩選最佳提取工藝條件。因素水平表見表1。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

2.2 評價(jià)指標(biāo)的確定 丹參為方中主藥藥味之一，丹酚酸B為其主要有效成分之一，且其含量測定有成熟方法，可用HPLC法測定水提取物中丹酚酸B的含量，因此選擇以丹酚酸B的含量并結(jié)合出膏率作為評價(jià)指標(biāo)。

2.3 樣品溶液的制備 按處方比例量稱取水提工藝部分的藥材共64g，共9份，隨機(jī)編成①～⑨號，按L9（34）正交表下設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)條件以加熱回流方式進(jìn)行提取，合并提取液。將上述提取液濃縮，定容至一定體積，制得樣品溶液。

2.4 干膏量測定方法 精密量取上述各試驗(yàn)號提取液50mL，分別置于已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘?jiān)?05℃干燥3h，取出，置于干燥器中放置30min，稱重，計(jì)算干膏得率。

2.5 丹酚酸B的含量測定

2.5.1 色譜條件色譜柱：C18色譜柱（Diamosil 4.6mm×250mm，5μm）；流動相：乙腈－甲醇－1%甲酸（15：30：55）；流速1.0mL·min－1；檢測波長286nm；柱溫25℃；進(jìn)樣量10μL。

2.5.2 對照品溶液的制備：精密稱取丹酚酸B對照品適量，加75%甲醇制成每1mL含0.44197mg的溶液，搖勻，即得。

2.5.3 供試品溶液的制備：分別精密吸取各提取液7mL，置10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.5.4 測定法：分別吸取對照品溶液及上述供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定并計(jì)算。

2.6 結(jié)果及分析 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

表2 水提L9（34）正交試驗(yàn)表及結(jié)果

表3 方差分析表

試驗(yàn)結(jié)果表明，影響提取效果因素順序?yàn)樘崛〈螖?shù)C＞提取時(shí)間A＞加水量B；從方差分析可知，提取次數(shù)對提取效果有顯著影響，提取時(shí)間、加水量長短幾無影響，以A2B3C3為最佳提取組合，即加水提取3次，加水量依次為12、10、10倍，提取時(shí)間依次為1.5、1、1h。

2.7 驗(yàn)證試驗(yàn) 按處方量稱取各藥材共128g，共3份，按照所選提取條件試驗(yàn)，并測定丹酚酸B含量和干膏量。結(jié)果見表4。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3次驗(yàn)證試驗(yàn)表明，檢測指標(biāo)折算成處方量結(jié)果后，接近或者高于正交表中最優(yōu)值，說明優(yōu)選的提取條件基本可行。

3 討 論3.1 在對水提工藝條件進(jìn)行優(yōu)選時(shí)我們同時(shí)考察了丹酚酸B的含量和干膏得率，這比采取單一指標(biāo)對提取工藝進(jìn)行評價(jià)更加科學(xué)和合理。

3.2 根據(jù)本實(shí)驗(yàn)優(yōu)選的最佳工藝 經(jīng)3批驗(yàn)證，結(jié)果產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，可為大生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

［1］ 國家藥典委員會.中國藥典［S］.一部.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：12.

［2］ 康阿龍，湯迎爽，孫成榮，等.益腦靈膠囊中丹酚酸B的含量測定［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，29（1）：105－106.

［3］ 宋錦鋒.舒肝膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 ［J］.湖南中醫(yī)雜志，2012，28（5）：152－154.

［4］ 苑相愛.高效液相色譜法測定心肌炎顆粒中丹酚酸B含量 ［J］.中國藥業(yè)，2010，19（3）：21－22.

［5］ 張 蒙，龐來祥，郭 濤，等.正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選疏膽防石顆粒的提取工藝［J］.西北藥學(xué)雜志，2011，26（2）：96－97.

［6］ 梅全喜，曾聰彥，周小軍.正交法優(yōu)選鼻咽解毒顆粒的水提工藝［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2010，28（7）：1483－1484.