王秋平，哈 婧，劉 碩，張佳麗，蘇 萌

（河北科技大學(xué)化學(xué)與制藥工程學(xué)院，河北石家莊 050018）

鹽酸克倫特羅俗稱瘦肉精，為白色結(jié)晶性粉末，可促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，改善動(dòng)物體內(nèi)脂肪分配，增加瘦肉率；其易被動(dòng)物吸收，在動(dòng)物體內(nèi)殘留時(shí)間長(zhǎng)，容易蓄積［1］。人類食用含有鹽酸克倫特羅的肉后會(huì)出現(xiàn)心跳過(guò)快、四肢肌肉顫動(dòng)等中毒癥狀。由于一般的烹調(diào)方法不能將豬臟器和肉中殘留的“瘦肉精”的毒性破壞或損耗，以致殘留的鹽酸克倫特羅超量而引起的食物中毒事件屢有發(fā)生［2－3］。雖然中國(guó)已禁止其作為生長(zhǎng)促進(jìn)劑使用，但有些不法分子仍在違規(guī)使用，影響了中國(guó)畜禽產(chǎn)品的質(zhì)量，對(duì)人們的食用安全造成嚴(yán)重危害。因此，研究動(dòng)物組織中鹽酸克倫特羅殘留量快速、靈敏的檢測(cè)方法對(duì)保障人們的食用安全具有重要意義。

目前已用于鹽酸克倫特羅檢測(cè)的方法主要有免疫分析法、色譜分析法及各種聯(lián)用技術(shù)分析法等。有關(guān)鹽酸克倫特羅殘留檢測(cè)的國(guó)標(biāo)方法有3種，分別為酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）、高效液相色譜法（HPLC）和氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法（GC－MS）。

1 免疫分析法

1.1 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）

ELISA 測(cè)定鹽酸克倫特羅殘留量是利用抗原抗體的特異性反應(yīng)，以酶催化底物等方法作為顯示系統(tǒng)，用微孔板等作為反應(yīng)、分離載體的一種生物學(xué)檢測(cè)方法，是快速篩選檢測(cè)動(dòng)物肌肉、尿液、肝臟等樣品中鹽酸克倫特羅殘留的方法之一。陳穗等用ELISA 對(duì)樣品檢測(cè)，定性檢出克倫特羅的質(zhì)量濃度（以下文中如無(wú)特別說(shuō)明，均用質(zhì)量濃度表示鹽酸克倫特羅或克倫特羅的實(shí)驗(yàn)結(jié)果）為0.03ng／mL，定量檢測(cè)結(jié)果為0.1ng／mL；在0.1～8.1ng／mL 范圍內(nèi)具有良好的線性相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.991 3；當(dāng)克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品添加水平分別為0.5，1.0ng／mL 時(shí)，平均回收率分別為84%，90%［4］。上述指標(biāo)均符合殘留分析質(zhì)量控制的要求。謝炯炯等測(cè)定豬肝、豬尿中違禁藥物克倫特羅殘留量影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，北京望爾生物技術(shù)有限公司與德國(guó)拜發(fā)公司生產(chǎn)的2種ELISA 試劑盒具有操作簡(jiǎn)單、敏感度高、成本低、時(shí)間短等特點(diǎn)［5］。

ELISA 是酶免疫分析法（EIA）中較高效的技術(shù)，能在短短幾小時(shí)內(nèi)檢測(cè)上百個(gè)樣品，且不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備，具有樣品前處理簡(jiǎn)單、特異性強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)；但常用的ELISA 的檢出限與鹽酸克倫特羅的允許最大殘留量均為0.1μg／kg（質(zhì)量分?jǐn)?shù)），因此ELISA 難以達(dá)到檢測(cè)要求。

1.2 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法（CLEIA）

化學(xué)發(fā)光酶免疫分析方法將高靈敏度的化學(xué)發(fā)光和高特異性的免疫分析結(jié)合起來(lái)，具有成本低、特異性強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。RODA 等采用間接競(jìng)爭(zhēng)化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法對(duì)豬尿樣中的鹽酸克倫特羅進(jìn)行了檢測(cè)，檢測(cè)靈敏度分別為0.08μg／L，但方法只限于豬尿樣中鹽酸克倫特羅的測(cè)定［6］。徐曉嬰等優(yōu)化了檢測(cè)方法的反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間、緩沖體系的pH 值、離子強(qiáng)度、Tween－20 的濃度等參數(shù)，該方法的理論檢測(cè)限為0.001 4μg／L，線性檢測(cè)范圍可達(dá)到0.04～42.5μg／L。批內(nèi)、批間變異系數(shù)均小于10%，回收率為95%～110%，同時(shí)有較高的特異性；優(yōu)化后的檢測(cè)方法可適用于大濃度范圍內(nèi)的檢測(cè)，并且此方法完全符合鹽酸克倫特羅殘留檢測(cè)的要求［7］。王碩等建立了直接競(jìng)爭(zhēng)化學(xué)發(fā)光酶免疫法檢測(cè)豬肉中鹽酸克倫特羅殘留，檢測(cè)時(shí)間較ELISA節(jié)省了近30min，靈敏度可達(dá)0.02μg／kg（質(zhì)量分?jǐn)?shù)），平均回收率為83%～98%，可用于實(shí)際豬肉樣品中鹽酸克倫特羅殘留的快速檢測(cè)，同時(shí)不受萊克多巴胺、沙丁胺醇等同屬β－興奮劑類的違禁獸藥的影響；該方法操作步驟較少、樣品前處理簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確度高、所需設(shè)備易于普及，具有一定的應(yīng)用潛力［8］。

1.3 滴金免疫技術(shù)（DIGFA）

應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析的原理，樣本中的鹽酸克倫特羅在流動(dòng)的過(guò)程中與膠體金標(biāo)記的特異性單克隆抗體結(jié)合，抑制了抗體和鹽酸克倫特羅蛋白偶聯(lián)物的結(jié)合。如果檢測(cè)樣本反應(yīng)的顏色淺于標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)線的顏色，結(jié)果為陽(yáng)性。顏色越淺表示含量越高。張慧嫦等建立的膠體金免疫層析法可用于快速檢測(cè)組織樣品中鹽酸克倫特羅殘留量，檢測(cè)豬肉等組織試樣時(shí)，結(jié)果以顏色直觀顯示，最低靈敏度值可達(dá)到0.5ng／mL，只需3～5min，與萊克多巴胺、沙丁胺醇的交叉反應(yīng)率為0.86%［9］。目前國(guó)內(nèi)已有多家公司開(kāi)發(fā)出商品化的鹽酸克倫特羅快速檢測(cè)試紙條［10］。

此法檢測(cè)鹽酸克倫特羅操作簡(jiǎn)便、觀察直觀，適用于批量篩選、宰前檢疫等現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，且操作過(guò)程儀器化低［11］，解決了過(guò)去不能現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)定性和及時(shí)進(jìn)行處理的難題，具有良好的應(yīng)用前景。

1.4 生物傳感器法（BS）

生物傳感器是將生物感應(yīng)元件的專一性、敏感性與一個(gè)能夠產(chǎn)生和待測(cè)物濃度成比例信號(hào)的傳導(dǎo)器結(jié)合，利用各種生物材料或生物代謝產(chǎn)物如酶、抗體等做成的用于檢測(cè)、識(shí)別食品與生物的化學(xué)成分的傳感器［12］。呂會(huì)田等應(yīng)用生物化學(xué)和免疫學(xué)方法，構(gòu)建了基于量子點(diǎn)標(biāo)記的ATP 合酶分子馬達(dá)免 疫 旋 轉(zhuǎn) 生 物 傳 感 器（immuno－rotary biosensor，IRB），結(jié)合熒光技術(shù)，利用中國(guó)科學(xué)院生物物理研究所張仲倫老師研發(fā)的BPCL 弱光檢測(cè)器實(shí)現(xiàn)了對(duì)鹽酸克倫特羅的檢測(cè)，該法快速、感應(yīng)靈敏度可達(dá)10－12g／L（文獻(xiàn)值一般為10－9g／L）［13］。

國(guó)外已有生物傳感器技術(shù)檢測(cè)鹽酸克倫特羅殘留，該技術(shù)實(shí)現(xiàn)了超微量檢測(cè)的可能，大大加快了檢測(cè)速度，使得對(duì)鹽酸克倫特羅的檢測(cè)向全自動(dòng)無(wú)試劑檢測(cè)方向更近了一步。

1.5 放射免疫分析法（RIA）

RIA是一種對(duì)微生物受體進(jìn)行標(biāo)記，將RIA 和ELISA、生物發(fā)光技術(shù)、化學(xué)發(fā)光技術(shù)相結(jié)合進(jìn)行檢測(cè)的新型檢測(cè)技術(shù)［14］，檢測(cè)限可達(dá)到0.5ng／mL的水平。目前國(guó)外已有RIA測(cè)定CL的試劑盒產(chǎn)品［15］。

放射免疫分析技術(shù)雖然具有操作簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)、靈敏度高、易標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。但是由于所用儀器較昂貴，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求較苛刻，必須使用放射性同位素標(biāo)記鹽酸克倫特羅，且放射性同位素對(duì)人體有一定的傷害，從而限制了該法的廣泛應(yīng)用，不屬于目前主要的分析方法。

1.6 時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)（TRFIA）

以稀土元素為信號(hào)放大標(biāo)記物，結(jié)合抗原抗體反應(yīng)的特異性和Eu3＋標(biāo)記信號(hào)的高靈敏度，可以實(shí)現(xiàn)違禁藥物的痕量檢測(cè)。樊曉博等建立Eu3＋標(biāo)記抗原直接競(jìng)爭(zhēng)TRFIA，以自制鹽酸克倫特羅單克隆抗體包被96 孔微孔板作為固相抗體，Eu3＋標(biāo)記抗原與樣品中的CBL競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體，建立直接競(jìng)爭(zhēng)熒光免疫分析體系；組織、豬尿樣品添加回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果：樣品回收率為91%～101%；方法靈敏度為0.02 μg／L，與萊克多巴胺、沙丁胺醇、馬不特羅等結(jié)構(gòu)類似物的交叉反應(yīng)率均小于1%，說(shuō)明抗體特異性較強(qiáng)［16］。鹽酸克倫特羅Eu3＋標(biāo)抗原直接競(jìng)爭(zhēng)時(shí)間分辨免疫檢測(cè)法操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、特異性強(qiáng)，可以完全符合現(xiàn)有實(shí)際檢測(cè)需求。

與放射免疫分析法（RIA）相比，時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)具有很多優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高（10－19mol／L），穩(wěn)定性好，克服了放射性熒光物質(zhì)的不穩(wěn)定性，動(dòng)態(tài)范圍寬，無(wú)放射性危害等，時(shí)間分辨熒光分析技術(shù)目前被公認(rèn)為是靈敏度最高的分析方法之一。

2 色譜分析法

2.1 高效液相色譜法（HPLC）

HPLC法分析鹽酸克倫特羅時(shí)不需要衍生化，利用反相C8或C18色譜柱檢測(cè)β－激動(dòng)劑類物質(zhì)。張群等采用固相萃取柱過(guò)柱凈化，固定相為ODS－C18，流動(dòng)相為0.02mol／L磷酸二氫鈉緩沖液（pH 值為6.0）－甲醇（體積比為60∶40），流速為0.8mL／min，進(jìn)樣量為10μL，二極管陣列檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，利用峰面積進(jìn)行多點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)法定量。線性濃度范圍為0.01～1.0μg／mL，相關(guān)系數(shù)為0.998 9，檢測(cè)限為0.01μg／mL［17］。

中國(guó)已將HPLC 法作為檢測(cè)鹽酸克倫特羅殘留的半確證方法。其優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)假陽(yáng)性率低、精確度高、成本低、速度快，適合大批量快速檢測(cè)。最低檢測(cè)限為1～15ng／g（質(zhì)量分?jǐn)?shù)），而且與GC－MS法相比樣品不必衍生化，是目前較常用、較成熟的檢測(cè)方法。

2.2 氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法（GC－MS）

氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法是最常用的鹽酸克倫特羅測(cè)定方法，現(xiàn)作為中國(guó)測(cè)定動(dòng)物組織中鹽酸克倫特羅的確證性方法（NY／T468－2001），具有準(zhǔn)確度高、靈敏度高、假陽(yáng)性率低等特點(diǎn)。

王培龍等利用分子印記聚合物（MIP）的分子識(shí)別能力，選擇性提取、凈化并富集豬尿液中的鹽酸克倫特羅成分，同時(shí)除去干擾物，減少基體抑制作用；用N，O－雙三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）衍生化，毛細(xì)管氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用（選擇離子模式，選擇離子為277，262，243和86）對(duì)衍生物分析；不同鹽酸克倫特羅加入量的回收率為71.0% ～89.3%；檢出限為0.51μg／L，定量限為1.00μg／L；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.2%～9.7%，重復(fù)性良好［18］。林維宣等建立了動(dòng)物組織中10 種β－興奮劑殘留量的GC－MS檢測(cè)方法；樣品經(jīng)pH 值為5.2的乙酸鈉溶液提取，提取液依次經(jīng)異丙醇－乙酸乙酯（體積比為40∶60）混合溶劑和異丙醇－叔丁基甲醚（體積比為1∶5）混合溶劑萃取凈化，再經(jīng)Strata－X－C 陽(yáng)離子交換柱（500mg，3mL）凈化后，m（TMCS）∶m（BSTFA）為1∶99 的衍生劑衍生，采用HP－5MS 色譜柱進(jìn)行GC－MS法分析，兼顧各成分靈敏度的情況下，優(yōu)化質(zhì)譜的一系列條件，建立了最佳質(zhì)譜分析條件；10種β－興奮劑類獸藥室內(nèi)平均回收率為59.1%～77.4%，變異系數(shù)為0.87%～7.04%，檢出限為1～5μg／kg（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）；方法的回收率、檢測(cè)限和精密度等技術(shù)指標(biāo)滿足國(guó)內(nèi)外對(duì)β－興奮劑殘留量檢測(cè)的有關(guān)要求［19］。

GC－MS與HPLC法相比，假陽(yáng)性率更低，可以準(zhǔn)確地在多種殘留物同時(shí)存在的情況下對(duì)某種特定的殘留物進(jìn)行定性、定量分析；但其衍生化操作繁瑣，增加了結(jié)果的不確定度，使得GC－MS的應(yīng)用受到一定限制。

2.3 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC－MS－MS）

LEHNER 等采用250 mm×2 mm 的Luna phenyl柱子，用含0.05%（體積分?jǐn)?shù)，下同）甲酸和5%（體積分?jǐn)?shù)，下同）的乙腈水及含0.05%甲酸的乙腈為流動(dòng)相，在0.45mL／min的流速下進(jìn)行梯度洗脫，使用ESI－MS／MS檢測(cè)器進(jìn)行多反應(yīng)檢測(cè)，檢測(cè)母離子質(zhì)荷比（m／z）為277，子離子m／z為277，259，204，64的產(chǎn)物離子，氘代的克倫特羅作為內(nèi)標(biāo)物，檢測(cè)限可達(dá)4pg／mL［20］。汪輝等建立了高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定加工肉制品中萊克多巴胺和克倫特羅的方法；采用陽(yáng)離子交換色譜柱（SCX）分離目標(biāo)化合物，改進(jìn)了前處理方法，采用PXC 固相萃取柱凈化，并對(duì)洗脫溶液和高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的各參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化；檢出限和定量下限分別不超過(guò)0.04μg／kg（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）和0.015μg／kg（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）。樣品平均加標(biāo)回收率為72%～98%。質(zhì)譜檢測(cè)器靈敏度高，特異性好，可應(yīng)用于加工肉制品中獸藥殘留的批量檢測(cè)［21］。

2.4 高效薄層色譜法（HPTLC）

高效薄層色譜法已成功應(yīng)用于肉食品中獸藥殘留的檢測(cè)，并能進(jìn)行定性定量研究［22］。黃寶華等采用薄層掃描法測(cè)定豬肝中克倫特羅殘留量，展開(kāi)劑為m（乙酸乙酯）∶m（甲醇）∶m（醋酸）為8∶1∶0.8，GF254板為載體，克倫特羅的Rf值為0.81。線性范圍為0.004～0.050μg，回收率為86.5%～94.9%，RSD 值為5.0%～5.8%（n＝6）［23］。該法優(yōu)點(diǎn)是多樣品同時(shí)一次測(cè)定，快速且高效，分離出的樣品可進(jìn)行其他驗(yàn)證分析；缺點(diǎn)是樣品準(zhǔn)備時(shí)間長(zhǎng)，抗干擾能力弱［24］。

2.5 毛細(xì)管電泳法（CE）

有學(xué)者采用10mmol／L硼酸緩沖溶液（pH 值為10.0），溫度為32 ℃，分離電壓為19kV，檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm；同時(shí)檢測(cè)人尿液中4種被分析物，約用1min，未發(fā)現(xiàn)基質(zhì)干擾；檢測(cè)限為0.5mg／L，線性范圍2.0～30mg／L，相關(guān)系數(shù)大于0.996［25］。李春宇采用緩沖液為15 mmol／L 的磷酸鹽緩沖液（磷酸調(diào)pH 值為6.5），運(yùn)行電壓25kV，柱溫為25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為200nm；檢測(cè)結(jié)果：克倫特羅線性范圍為0.000 56～0.013 44mg／mL（r＝0.999 8），加樣回收率（n＝6）為99.83%（RSD＝1.17% ）［26］。該法可快速、簡(jiǎn)便有效地檢測(cè)豬肉中鹽酸克倫特羅的含量。

3 其他分析方法

宋詩(shī)穩(wěn)等以自制納米CeO2修飾碳糊電極建立了微分脈沖伏安法對(duì)鹽酸克倫特羅的測(cè)定；方法檢出限為2.5×10－9mol／L，線性范圍為5.0×10－9～6.0×10－6mol／L（r＝0.998 2，n＝7），加標(biāo)回收率為96%～104%［27］。高錳酸鉀在多聚磷酸條件下與甲醛產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，鹽酸克倫特羅能大大增強(qiáng)該發(fā)光強(qiáng)度，ZHOU 等基于分子印記技術(shù)在線富集克倫特羅，通過(guò)流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光檢測(cè)其含量，檢測(cè)限為3.0 × 10－10g／mL，線性范圍為1.0 × 10－9～5.0×10－8g／mL，RSD≤5%（n＝3）［28］。胡玉斐建立起一種直接測(cè)定鹽酸克倫特羅的流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析法，檢出限為1.2×10－8g／mL，但此法抗干擾能力弱，還需進(jìn)一步確證［29］。

4 結(jié) 語(yǔ)

目前ELISA 是快速篩選檢測(cè)動(dòng)物肌肉、尿液、肝臟等樣品中克倫特羅殘留的方法之一，ELISA 方法操作簡(jiǎn)單、快速，通常用作大規(guī)模樣品篩選，是目前較常用的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)手段；化學(xué)發(fā)光酶免疫分析方法，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、成本低、速度快、樣品前處理簡(jiǎn)單和安全無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)，非常適合快速檢測(cè)；試紙條檢測(cè)方法簡(jiǎn)便易行，但存在人為因素影響，易造成假陽(yáng)性出現(xiàn)；GC－MS 和HPLC－MS－MS通常作為定量和確證方法，但操作復(fù)雜，且不能現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，是目前實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的檢測(cè)方法。

現(xiàn)常用的鹽酸克倫特羅的檢測(cè)方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，研究更快速、高效、檢測(cè)限更低、操作簡(jiǎn)單、費(fèi)用低廉的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)方法是今后的發(fā)展方向。

／References：

［1］ 張彩霞，董相軍.瘦肉精研究綜述［J］.養(yǎng)殖與飼料，2007（1）：57－58.ZHANG Caixia，DONG Xiangjun.Clenbuterol research summary［J］.Animals Breeding and Feed，2007（1）：57－58.

［2］ 徐國(guó)茂，胡翊煒，王 琤，等.鹽酸克倫特羅檢測(cè)中存在的問(wèn)題［J］.廣東飼料，2007，16（3）：37－38.XU Guomao，HU Yiwei，WANG Zheng，et al.Problem in detection Clenbuterol hydrochloride［J］.Guangdong Feed，2007，16（3）：37－38.

［3］ PULCE C，LAMAISON D，KECK G，et al，Collective human food poisonings by clenbuterol residues in veal liver［J］.Veterinary Human Toxicology，1991，33（5）：480－481.

［4］ 陳 穗，何 松.酶聯(lián)免疫法檢測(cè)克倫特羅殘留量的質(zhì)量控制［J］.四川食品與發(fā)酵，2008，44（1）：73－76.CHEN Sui，HE Song.Quality control for the determination of clenbuterol residues by ELISA［J］.Sichuan Food and Fermentation，2008，44（1）：73－76.

［5］ 謝炯炯，樊聰明，鐘曉燕.ELISA 測(cè)定豬尿、豬肝中克倫特羅殘留的研究［J］.畜牧獸醫(yī)雜志，2007，26（2）：22－23.XIE Jiongjiong，F(xiàn)AN Congming，ZHONG Xiaoyan.Assay determination of pig urine，liver effects of clenbuterol residues［J］.Journal of Animal Science and Veterinary Medicine，2007，26（2）：22－23.

［6］ RODA A，MANETTA A C，PIAZZA F，et al.A rapid and sensitive 384－microtiter wells format chemiluminescent enzyme immunoassay for clenbuterol［J］.Talanta，2000，52（2）：311－318.

［7］ 徐曉嬰，盧慶鋆，徐艷力，等.化學(xué)發(fā)光酶免疫法檢測(cè)鹽酸克倫特羅殘留［J］.上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)科學(xué)版），2009，27（2）：125－128.XU Xiaoying，LU Qingjun，XU Yanli，et al.Determination of clenbuterol residual by chemiluminescent enzyme immunoassay［J］.Journal of Shanghai Jiaotong University（Agricultural Science），2009，27（2）：125－128.

［8］ 王 碩，李細(xì)芬，生 威，等.增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光酶免疫法對(duì)豬肉中鹽酸克倫特羅的檢測(cè)［J］.分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2010，29（3）：215－219.WANG Shuo，LI Xifen，SHENG Wei，et al.Determination of clenbuterol residues in pork by enhanced chemiluminescent enzyme immunoassay［J］.Journal of Instrumental Analysis，2010，29（3）：215－219.

［9］ 張慧嫦，張少恩，吳忠華，等.膠體金免疫層析法快速檢測(cè)鹽酸克倫特羅殘留［J］.中國(guó)國(guó)境衛(wèi)生檢疫雜志，2008，31（1）：39－42.ZHANG Huichang，ZHANG Shaoen，WU Zhonghua，et al.Rapid detection of the clenbuterol residue through colloidal gold immuno chromatographic assay［J］.Chinese Frontier Health Quarantine，2008，31（1）：39－42.

［10］ 黃小燕，梁珠嫻，李 繁，等.鹽酸克倫特羅快速檢測(cè)試紙條的應(yīng)用探討［J］.云南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2008，30（sup）：446－449.HUANG Xiaoyan，LIANG Zhuxian，LI Fan，et al.Evaluation of one－step test strip for detection of clenbuterol residue in swine urine［J］.Journal of Yunnan University（Natural Sciences Edition），2008，30（sup）：446－449.

［11］ 曹向英，沈林輝，孫文梅，等.淺談鹽酸克倫特羅檢測(cè)技術(shù)［J］.畜牧獸醫(yī)科技信息，2009（10）：19－20.CAO Xiangying，SHEN Linhui，SUN Wenmei，et al.Detection technique of clenbuterol hydrochloride［J］.Animal Husbandry and Veterinary Science and Technology Information，2009（10）：19－20.

［12］ WYNNE P M，BATTY D C，VINE J H，et al.Approaches to the solid－phase extraction of equine urine［J］.Chromatographia，2004，59（sup）：51－60.

［13］ 呂會(huì)田，張 云，樂(lè)加昌，等.旋轉(zhuǎn)生物傳感器高靈敏檢測(cè)鹽酸克倫特羅方法研究［J］.食品科學(xué)，2007，28（8）：446－449.LYU Huitian，ZHANG Yun，YUE Jiachang，et al.Applica－tion of immuno－rotary biosensor based on FoF1－ATPase in chromatophores for detecting clenbuterol［J］.Food Science，2007，28（8）：446－449.

［14］ 張 佳.放射性受體分析法快速篩檢動(dòng)物組織中β－內(nèi)酰胺類獸藥殘留［D］.福州：福建農(nóng)林大學(xué)，2007.ZHANG Jia.Rapid Determination ofβ－lactams Veterinary Drug Residues in Animal Tissue Using Radio－Receptor Assay Method ［D］.Fuzhou：Fujian Agriculture and Forestry University，2007.

［15］ 米建萍.鹽酸克倫特羅檢測(cè)方法的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2008，18（8）：1 687－1 689.MI Jianping.Progress on detection methods of clenbuterol hydrochloride［J］.Chinese Journal of Health Laboratory Technology，2008，18（8）：1 687－1 689.

［16］ 樊曉博，楊金易，高秀杰，等.Eu3＋標(biāo)抗原鹽酸克倫特羅的時(shí)間分辨熒光免疫檢測(cè)［J］.食品科學(xué)，2010，31（20）：307－340.FAN Xiaobo，YANG Jinyi，GAO Xiujie，et al.Time－resolved fluoroimmunoassay of clenbuterol hydrochloride using europium labeled antigen［J］.Food Science，2010，31（20）：307－340.

［17］ 張 群，劉 燁.固相萃?。聪喔咝б合嗌V法測(cè)定鮮肉中鹽酸克倫特羅殘留量的條件優(yōu)化［J］.現(xiàn)代食品科技，2009，25（3）：337－340.ZHANG Qun， LIU Ye. Optimization of detection of clenbuterol residue in fresh meat by solid phase extraction－HPLC method［J］.Modern Food Science and Technology，2009，25（3）：337－340.

［18］ 王培龍，范 理，宋 榮，等.動(dòng)物尿液中鹽酸克倫特羅的分子印跡固相萃取－氣相色譜－質(zhì)譜法研究［J］.分析化學(xué)，2007，35（9）：1 319－1 322.WANG Peilong，F(xiàn)AN Li，SONG Rong，et al.Molecularly imprinted polymer solid phase extraction coupled with gas chromatography－mass spectrometry for the determination of trace clenbuterol hydrochloric in animal urine［J］.Chinese Journal of Analytical Chemistry，2007，35（9）：1 319－1 322.

［19］ 林維宣，田 苗，董偉峰.固相萃?。瓪庀嗌V／質(zhì)譜法同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物組織中多種β－興奮劑殘留量的研究［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2010，31（sup）：1－4.LIN Weixuan，TIAN Miao，DONG Weifeng.The analysis ofβ－agonists residue in animal tissues by gas chromatography／mass spectrometry［J］.Progress in Veterinary Medicine，2010，31（sup）：1－4.

［20］ LEHNER A F，HARKINS J D，KARPIESIUK W，et al.Clenbuterol in the horse confirmation and quantitation of serum clenbuterol by LC－MS－MS after oral and intratracheal administration［J］.J Anal Toxicol，2001，25（4）：280－287.

［21］ 汪 輝，彭新凱，王玉枝，等.高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定加工肉制品中菜克多巴胺及克倫特羅的含量［J］.分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2012，31（5）：509－516.WANG Hui，PENG Xinkai，WANG Yuzhi，et al.Determination of ractopamine and clenbuterol in processed meats by high performance liquid chromatography－tandem mass spectrometry［J］.Journal of Instrumental Analysis，2012，31（5）：509－516.

［22］ 竇 紅，張曉鑫，高春平.薄層色譜法檢測(cè)蘇丹紅［J］.河北工業(yè)科技，2009，26（2）：24－28.DOU Hong，ZHANG Xiaoxin，GAO Chunping.Fast detection of Sudam Red by thin layer chrometography［J］.Hebei Journal of Industrial Science and Technology，2009，26（2）：24－28.

［23］ 黃寶華，尚紅霞，張?zhí)m英.薄層掃描法測(cè)定豬肝中克倫特羅殘留量［J］.食品科學(xué)，2004，25（1）：121－123.HUANG Baohua，SHANG Hongxia，ZHANG Lanying.TLC scanning determination of clenbuterol residue in swine liver［J］.Food Science，2004，25（1）：121－123.

［24］ TOLDRáF，REIG M.Methods for rapid detection of chemical and veterinary drug residues in animal foods［J］.Trends in Food Science ＆Technology，2006，17（9）：482－489.

［25］ SIRICHAI S，KHANATHARANA P.Rapid analysis of clenbuterol，salbutamol，procaterol，and fenoterol in pharmaceuticals and human urine by capillary electrophoresis［J］.Talanta，2008，76（5）：1 194－1 198.

［26］ 李春宇.毛細(xì)管電泳測(cè)定豬肉中克倫特羅的含量［J］.肉類工業(yè)，2011（7）：28－29.LI Chunyu.Determination of clenbuterol in pork by capillary electrophoresis［J］.Meat Industry，2011（7）：28－29.

［27］ 宋詩(shī)穩(wěn)，于 浩，劉珍葉，等.納米CeO2修飾碳糊電極微分脈沖伏安法對(duì)鹽酸克倫特羅的測(cè)定［J］.分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2009，28（4）：454－457.SONG Shiwen，YU Hao，LIU Zhenye，et al.Differential pulse voltammetric determination of clenbuterol with carbon paste electrode modified by nano－CeO2［J］.Journal of Instrumental Analysis，2009，28（4）：454－457.

［28］ ZHOU Houjiang，ZHANG Zhujun，HE Deyong，et al.Flow chemiluminescence sensor for determination of clenbuterol based on molecularly imprinted polymer［J］.Analytica Chimica Acta，2004，523（2）：237－242.

［29］ 胡玉斐.化學(xué)發(fā)光分析法在興奮劑及降血壓類藥物分析中的的應(yīng)用［D］.重慶：西南師范大學(xué)，2004.HU Yufei.The Application of Chemiluminescence System in Cordial and Antihypertensive Drug Analysis［D］.Chongqing：Southwest Normal University，2004.