石永平，汪 匯，王懷新，王金達(dá)，王汝歡，張雁芳，崔文玉，段 煉，汪 ?！?/p>

（1.北京賽德維康醫(yī)藥研究院，北京100039；2.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院，北京100071；3.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所，北京100850）

復(fù)方黨參片是我國(guó)最早應(yīng)用的防治急性高原反應(yīng)的中藥復(fù)方，30多年來(lái)廣泛應(yīng)用于軍隊(duì)和國(guó)家重大工程建設(shè)中，取得了顯著的軍事效益和社會(huì)效益。參歸片（新復(fù)方黨參片）是在復(fù)方黨參片的基礎(chǔ)上，根據(jù)臨床使用情況，優(yōu)化而得的具有緩解體力疲勞和提高缺氧耐受力的復(fù)方制劑，獲國(guó)家發(fā)明專(zhuān)利［1］。主要由黨參、丹參、北沙參、當(dāng)歸和西洋參等組成。前期研究發(fā)現(xiàn)［2-4］，參歸片具有緩解體力疲勞和提高機(jī)體耐缺氧能力，且有效劑量低于復(fù)方黨參片；能有效減輕高原脫習(xí)服和高原反應(yīng)的程度、減輕高原脫習(xí)服和高原反應(yīng)的癥狀、降低高原脫習(xí)服和高原反應(yīng)的發(fā)生率，并能顯著改善受試者的肺通氣功能和手指運(yùn)動(dòng)能力，具有較好的防治高原脫習(xí)服和高原反應(yīng)作用。本文旨在進(jìn)一步探討參歸片對(duì)急性腦缺血的保護(hù)作用及其可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑

參歸片（北京賽德維康醫(yī)藥研究院提供，批號(hào)：20110701）；尼莫地平（天津市中央藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：110701）；超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20111201）、丙二醛（MDA）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20111206）；其他試劑均為分析純。

1.2 主要儀器

TU-1900雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；稱(chēng)量天平（上海醫(yī)用分析儀器廠）；水浴鍋（上海愛(ài)郎儀器有限公司）；臺(tái)式高速離心機(jī)（上海醫(yī)用分析儀器廠）。250 ml磨口廣口瓶，秒表，1ml注射器、剪刀等。

1.3 動(dòng)物

SD雄性大鼠，體重180～220 g，昆明雌性小鼠，體重18～22 g，均購(gòu)于北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心（合格證號(hào)：SCXK-（軍）2007-004）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 小鼠斷頭腦缺血實(shí)驗(yàn)［5-7，9］昆明小鼠 40只，隨機(jī)分為4組（n＝10）：分別為正常組和參歸片0.16、0.33、1.00 g／kg組，正常組給與等量生理鹽水，連續(xù)灌胃30 d，末次灌胃1 h后，各組動(dòng)物自頸部逐只斷頭，立即秒表記錄小鼠斷頭后至張口喘氣停止時(shí)間。

1.4.2 大鼠結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈腦缺血實(shí)驗(yàn)［6-8］SD大鼠48只，隨機(jī)分成6組（n＝8），分別為正常組、模型組、尼莫地平（0.15 g／kg）組和參歸片低、中、高（0.072、0.149、0.45 g／kg）劑量組，各組分別連續(xù)灌胃給予各自受試物7 d（正常組和模型組給與等量生理鹽水）進(jìn)行腦缺血實(shí)驗(yàn)；各組大鼠末次給予受試物1 h后，準(zhǔn)確稱(chēng)重，用2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，仰臥固定于手術(shù)夾板上，行頸部正中切口，鈍性分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，用動(dòng)脈夾結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈造成腦缺血模型。結(jié)扎1 h后，斷頭取腦，稱(chēng)取濕重，計(jì)算腦指數(shù)（腦指數(shù)＝腦濕重×100／體重）。準(zhǔn)確稱(chēng)重置于-20℃保存的腦組織按質(zhì)量體積比1∶9的比例與 Tris-硫酸制備10%腦組織勻漿，4 000 r／min，離心10min，取上清測(cè)SOD活性和MDA含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用SAS統(tǒng)計(jì)軟件，采用單因素方差分析進(jìn)行多組間顯著性檢驗(yàn)，兩組間樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組間樣本均數(shù)比較采用Dunnett’s檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 參歸片對(duì)急性腦缺血性缺氧小鼠喘息時(shí)間的影響

與正常對(duì)照組相比，參歸片低劑量組對(duì)斷頭小鼠喘氣時(shí)間無(wú)顯著性延長(zhǎng)（P＞0.05，表1），參歸片中、高劑量組能顯著延長(zhǎng)斷頭小鼠喘氣時(shí)間（P＜0.05，P＜0.01），表明參歸片能提高斷頭小鼠缺血缺氧能力，并呈現(xiàn)出劑量依賴(lài)性關(guān)系。

Tab.1 Effectof Shengui tableton breathing time in acute cerebral ischemiamice（±s，n＝10）

Tab.1 Effectof Shengui tableton breathing time in acute cerebral ischemiamice（±s，n＝10）

*P＜0.05，**P＜0.01 vs control

Group Dose（g／kg） Gasping time（s ）Control 0 18.6±2.0 Low 0.16 20.2±1.4 Middle 0.33 21.6±2.3*High 1.00 24.3±2.2**

2.2 參歸片對(duì)腦缺血大鼠腦指數(shù)的影響

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，與正常組相比，模型組大鼠腦指數(shù)顯著升高（P＜0.01，圖1），表明造模成功。與模型組相比，尼莫地平組能顯著降低大鼠腦指數(shù)的升高（P＜0.01），表明尼莫地平能減輕腦缺血引起的腦水腫；參歸片低、中、高三個(gè)劑量組能劑量依賴(lài)性的降低大鼠腦指數(shù)的升高（P＜0.05，P＜0.01），表明參歸片能減輕腦缺血引起的腦水腫。與尼莫地平組相比，參歸片中、高劑量組降低大鼠腦指數(shù)無(wú)顯著性差異，表明參歸片中、高劑量組減輕腦缺血引起的腦水腫作用與尼莫地平組相當(dāng)。

Fig.1 Effects of Shengui tablet on cerebral index in cerebral ischemia rats（±s，n＝8）

2.3 參歸片對(duì)腦缺血大鼠腦組織中SOD活性的影響

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，與正常組相比，模型組大鼠腦組織中SOD活性顯著降低（P＜0.01，圖2），表明造模成功。與模型組相比，尼莫地平組大鼠腦組織中SOD活性顯著增強(qiáng)（P＜0.01），表明尼莫地平具有提高腦缺血大鼠腦組織中SOD的作用；參歸片低、中、高三個(gè)劑量組大鼠腦組織中SOD活性顯著提高（P＜0.01），表明參歸片能提高缺血大鼠腦組織中SOD活性（P＜0.01）。參歸片低、中、高三個(gè)劑量組與尼莫地平組提高缺血大鼠腦組織中SOD活性的效果一致。

Fig.2 Effects of Shengui tablet on superoxide dismutase activityin cerebral ischemia rats（±s，n＝8）

2.4 參歸片對(duì)腦缺血大鼠腦組織中MDA含量的影響

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，與正常組相比，模型組大鼠腦組織中MDA含量顯著升高（P＜0.01，圖3），表明造模成功。與模型組相比，尼莫地平組大鼠腦組織中MDA含量顯著減低，表明尼莫地平能降低缺血大鼠腦組織中MDA含量的升高；參歸片低、中劑量組大鼠腦組織中MDA含量無(wú)顯著性變化（P＞0.05），但高劑量組大鼠腦組織中MDA含量顯著降低（P＜0.01），表明參歸片能降低腦缺血大鼠腦組織中MDA含量的升高。與尼莫地平組相比，參歸片高劑量組大鼠腦組織中MDA含量無(wú)顯著差異，表明參歸片高劑量組降低缺血大鼠腦組織中MDA的作用與尼莫地平組相當(dāng)。

Fig.3 Effects of Shengui tableton the contentofmalondialdehyde in cerebral ischemia rats（±s，n＝8）

3 討論

腦缺血、缺氧是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，具有發(fā)病率高、死亡率高、復(fù)發(fā)率高、致殘率高等特點(diǎn)，因此，預(yù)防本類(lèi)疾病的發(fā)生具有重要的意義。目前較為確定的治療腦缺血急性期的神經(jīng)保護(hù)化學(xué)藥物有NMDA受體拮抗劑、鈣拮抗劑、糖皮質(zhì)激素和其他抗感染藥物等，但存在著治療療效不佳或者伴隨著嚴(yán)重的不良反應(yīng)等缺點(diǎn)［9］。而中藥在治療急性腦缺血性中風(fēng)等疑難雜癥方面具有其獨(dú)特的治療學(xué)優(yōu)勢(shì)，受到人們的認(rèn)可。

斷頭急性缺血性缺氧對(duì)機(jī)體是一種劣性刺激，影響機(jī)體的氧化供能，導(dǎo)致機(jī)體心、腦等重要器官能量衰竭而死亡。小鼠斷頭后，腦供血中斷，腦組織內(nèi)貯存一定能量，可使斷頭小鼠腦功能維持一段時(shí)間，表現(xiàn)為張口喘氣，隨著能量耗竭，活動(dòng)便停止。本實(shí)驗(yàn)中參歸片中、高劑量組能顯著延長(zhǎng)斷頭小鼠張口喘氣時(shí)間。表明參歸片具有提高腦組織缺血缺氧的耐受能力或提高腦組織對(duì)氧等能量的利用率，對(duì)于缺血性缺氧的腦損傷具有保護(hù)作用。

在腦缺血狀態(tài)下，腦指數(shù)的升高是由于毛細(xì)血管通透性增加，大量血漿成份外滲，尤其水分及小分子物質(zhì)，是引起腦組織明顯水腫的原因所在。在雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎腦缺血模型中，參歸片低、中、高劑量組可顯著降低大鼠腦指數(shù)的升高（P＜0.05或P＜0.01）。表明參歸片具有減輕缺血性腦血管通透性增高和腦水腫的作用，對(duì)腦缺血及腦組織缺血性損傷具有一定的保護(hù)作用。SOD是廣泛存在于需氧代謝細(xì)胞中的一種自由基清除劑，在自由基的產(chǎn)生與清除平衡中起著重要作用；MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化作用的終產(chǎn)物，其含量高低可以反映脂質(zhì)過(guò)氧化水平，在一定程度上間接反映細(xì)胞損傷的程度［10-11］。參歸片低、中、高劑量組均能顯著提高腦組織中SOD活性，高劑量組能顯著降低腦組織中MDA的含量，表明參歸片改善自由基代謝，減輕自由基對(duì)神經(jīng)元的氧化損害，有效清除腦組織中自由基堆積，抑制自由基引起的繼發(fā)性腦損傷，保護(hù)缺血神經(jīng)元。

綜上所述，參歸片對(duì)缺血性腦保護(hù)作用可能與其清除自由基、減少氧化反應(yīng)的發(fā)生、降低缺血腦損傷血管的通透性和提高腦組織對(duì)血氧的利用率、降低耗氧量等途徑有關(guān)。至于參歸片對(duì)缺血性腦損傷的保護(hù)作用及其可能的進(jìn)一步作用機(jī)制，有待通過(guò)更多的研究來(lái)揭示。

［1］ 汪 海，張東祥，張延坤，等.提高缺氧耐受力緩解體力疲勞的藥物及用途：中國(guó)，ZL200610130406.7［P］.2007-11-21.

［2］ 張東祥，張延坤，聶鴻靖，等.高原致適應(yīng)劑新復(fù)方黨參片預(yù)防急性高原反應(yīng)的效果［J］.中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志，2010，26（2）：148-152.

［3］ 張東祥，聶鴻靖，張延坤，等.新復(fù)方黨參片防治高原脫習(xí)服的臨床療效［J］.中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2009，14（6）：681-684.

［4］ 張東祥，張延坤，謝印芝，等.復(fù)方黨參膠囊防治高原病的效果觀察［J］.解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2005，23（4）：271-272.

［5］ 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.保建食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003年版）［S］，2003：94-96.

［6］ 周小梅，楊全余，陳秋紅.藏藥腦血康對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性腦缺血的保護(hù)作用［J］.中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2007，24（1）：4-6.

［7］ 豐艷梅，王美納，李興華，等.頸康寧膠囊對(duì)小鼠腦缺血的影響［J］.西北藥學(xué)雜志，2006，21（5）：211-212.

［8］ 王 黎，曲紹春，于曉風(fēng)，等.復(fù)方刺五加注射液對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性腦缺血的影響［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2007，1（27）：152-154.

［9］ 商麗宏，李 昭，陳魁敏，等.人參保心片抗應(yīng)激性及對(duì)腦缺血作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，6（17）：9-10.

［10］李 娟，常秀娟，劉 濤，等.元芪膠囊對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠的保護(hù)作用［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，19（2）：112-114.

［11］張會(huì)欣，張建新.一氧化氮與腦缺血［J］.河北醫(yī)藥，2002，24（4）：297-299.