於學(xué)良 顧瑤華 薛 璟 丁榮敏

丹參醋制工藝條件的研究

於學(xué)良 顧瑤華 薛 璟 丁榮敏

（江蘇省蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，蘇州215009）

目的 確定丹參醋制的最佳工藝條件。方法 利用正交試驗(yàn)為設(shè)計(jì)方案，考察丹參醋制的醋量、炮制時(shí)間、炮制溫度3個(gè)因素，以丹參酮ⅡA的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)對(duì)不同工藝條件醋制樣品進(jìn)行分析，優(yōu)選醋制丹參的最佳工藝條件。結(jié)果 丹參醋制的最佳工藝條件為加醋量30%，炮制時(shí)間60min，炮制溫度60℃。結(jié)論 最佳工藝不僅很好地保證了丹參酮ⅡA的含量，還節(jié)約成本和資源。

丹參；醋制；丹參酮ⅡA；正交設(shè)計(jì)

丹參為唇形科植物丹參（Salvia mihiorrhiza Bge）的干燥根和根莖。味苦，性微寒，歸心肝經(jīng)，是我國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)中的一種常用中草藥，具有活血祛瘀、止痛、清心除煩等功效，其脂溶性成分丹參酮ⅡA是治療冠心病的主要有效成分之一［1］?！吨兴幣谥平?jīng)驗(yàn)集成》中收載的地方習(xí)用品有炒丹參、丹參炭、米炒丹參、酒丹參、醋丹參等［2］。不同的炮制方法、炮制工藝條件對(duì)丹參中有效成分的含量有很大的影響［3-4］。我們課題組前期實(shí)驗(yàn)表明［5］，醋制丹參比酒制等其他炮制方法更能增加丹參中丹參酮ⅡA的含量。本實(shí)驗(yàn)依照《中國(guó)藥典》（2010年版一部）丹參項(xiàng)下的含量測(cè)定方法，以丹參醋制品中丹參酮ⅡA的含量為依據(jù)，從加醋量、炮制時(shí)間、炮制溫度三個(gè)方面對(duì)丹參醋制工藝條件進(jìn)行考察，篩選最佳方案，為保留其中醫(yī)藥特色及臨床用藥指導(dǎo)提供參考與依據(jù)。

1 材料與儀器

丹參購(gòu)于蘇州市天靈中藥飲片廠。對(duì)照品丹參酮ⅡA（批號(hào)：10081642）由上海同田生物技術(shù)有限公司提供。甲醇（色譜純），水為超純水，其余試劑為分析純，Aglient1100高效液相色譜儀（G1311A四元泵，G1315B DAD檢測(cè)器，G1322脫氣機(jī)，7725i手動(dòng)進(jìn)樣器），Aglient化學(xué)工作站，KQ-500B超聲波清洗器，Sartorius電子天平（型號(hào)：CP225D）。

2 方法

2.1 醋制丹參的制備 考察的醋制因素包括：加醋量、炮制時(shí)間、加熱溫度，每個(gè)因素各考察3個(gè)水平，按L9（34）正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案行丹參醋制，因素和水平如表1所示。醋制方法為：稱取丹參飲片10g，加入不同體積的醋，攪拌均勻，然后悶潤(rùn)直至醋被吸收完全，放在不同溫度的烘箱中烘烤，按照試驗(yàn)考察的時(shí)間炮制，結(jié)束后，取出放涼粉碎，過(guò)篩，測(cè)定丹參酮ⅡA含量。

表1 炮制工藝的因素水平表（%）

2.2 丹參酮ⅡA的含量測(cè)定方法

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Zorbax SB-C18（250μm× 4.6mm，5.0μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（75∶25）；檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm；流速：1.0 ml／min，柱溫：25℃；進(jìn)樣量：20μl，在此條件下丹參酮ⅡA與其他成分得到良好分離，圖1為丹參酮ⅡA對(duì)照品（A），醋制丹參（B）的HPLC圖譜，峰1即為丹參酮ⅡA的色譜峰，保留時(shí)間約為27min。

圖1 丹參酮ⅡA對(duì)照品（A），醋制丹參（B）的HPLC圖譜

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取丹參酮ⅡA對(duì)照品0.0108g于10mL量瓶中，加甲醇溶液定容至刻度，搖勻，配制成濃度為1.08mg／mL的丹參酮ⅡA對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 取醋制丹參2.0g（過(guò)三號(hào)篩），精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液過(guò)微孔濾膜（0.45μl）作為供試品溶液。

2.2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.8、1.2、1.6ml，置于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，得濃度為0.0216、0.0432、0.0864、0.130、0.173mg／ml的一系列溶液，分別吸取20μl進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，樣品濃度（C）為橫坐標(biāo)線性回歸，得丹參酮ⅡA的線性回歸方程為A＝-167.4＋54840C（r＝0.9999）。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 取濃度為0.0864mg／mL的對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，進(jìn)樣量為20μl，測(cè)定峰面積，丹參酮ⅡA的RSD為0.87%，精密度良好。

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取6份丹參醋制品，按2.2.3項(xiàng)下方法，制備，進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算丹參酮ⅡA的含量，RSD為1.2%，結(jié)果表明該方法的重復(fù)性比較好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取醋制丹參供試品溶液，分別于0、2、4、6、8h進(jìn)樣記錄色譜圖，丹參酮ⅡA峰面積的RSD為1.5%，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的丹參醋制品6份，精密加入一定量的對(duì)照品溶液，按1.2.4項(xiàng)下方法制備，進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，加樣回收率為98.73%，RSD為1.5%。

2.2.9 樣品測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液和各供試品溶液各20μl，進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算不同工藝條件下醋制丹參中丹參酮ⅡA的含量。

3 結(jié)果

3.1 計(jì)算分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果 不同工藝下醋制丹參飲片中丹參酮ⅡA含量結(jié)果見(jiàn)表2。正交實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用直觀分析和方差分析，結(jié)果表明，加醋量、炮制時(shí)間和炮制溫度對(duì)結(jié)果均無(wú)顯著性差異（P＞0.05），由級(jí)差大小可知，影響醋制丹參中丹參酮ⅡA含量的因素主次順序?yàn)锳＞B＞ C，通過(guò)比較各因素水平的丹參酮ⅡA含量得出最佳工藝條件為A2B1C1。但以成分得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，認(rèn)為丹參醋制最佳工藝為A2B2C3，因此需要通過(guò)正式實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證。

表2 不同工藝條件下丹參酮ⅡA的含量測(cè)定結(jié)果（%）

3.2 驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn) 為了與正交試驗(yàn)選出的最佳方案進(jìn)行對(duì)比，用A2B1C1方案和A2B2C3方案進(jìn)行驗(yàn)證性試驗(yàn)，結(jié)果顯示丹參酮ⅡA平均含量分別為0.650%和0.461%，RSD分別為0.93%和1.05%（n＝5），表明A2B1C1方案確實(shí)為最佳方案，即加醋量30%，炮制時(shí)間60min，炮制溫度60℃。

4 討論

由丹參的炮制歷史沿革、炮制現(xiàn)狀調(diào)研可知丹參炮制方法有酒炙、炒炭、麩炒、豬血制、醋制等，歷史上酒炙應(yīng)用更為普遍和廣泛，文獻(xiàn)也多為酒炙丹參的研究報(bào)道，鮮見(jiàn)醋制丹參的研究。我們課題組根據(jù)醋常用來(lái)炮制活血化瘀類中藥以增強(qiáng)其祛瘀功效這一傳統(tǒng)炮制理論，在前期實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)丹參醋制工藝條件進(jìn)行研究，為藥材資源的合理利用、發(fā)揮最佳臨床療效提供參考依據(jù)。

丹參酮ⅡA是丹參中脂溶性活性成分的代表物質(zhì)，是丹參抗菌消炎和活血化瘀的有效成分，多含在丹參外皮中，因此在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，藥材必須粉碎完全并充分混勻，以免導(dǎo)致取樣不均出現(xiàn)較大偏差而不能反映真實(shí)結(jié)果。從實(shí)驗(yàn)中我們可以看出炮制方案為A2B1C1時(shí)，丹參酮ⅡA的含量最高，說(shuō)明此炮制工藝能夠很好保證丹參的有效成分，提高醋制效率，節(jié)約成本和資源。

中藥炮制是以中醫(yī)理論為核心基礎(chǔ)，根據(jù)辨證論治用藥需要和藥物自身性質(zhì)差異，及調(diào)劑、制劑的不同要求，綜合多方面因素采取的一項(xiàng)制藥技術(shù)，對(duì)于提高中藥臨床應(yīng)用療效，降低或消除藥物的毒性或副作用，改變或緩和藥物的性能等具有重要作用。中藥療效的物質(zhì)基礎(chǔ)是其所含的有效成分決定的，由于成分多種多樣，

常常一藥多效，但通過(guò)合理的炮制處理，所含有效成分性質(zhì)和含量會(huì)產(chǎn)生不同程度的改變，導(dǎo)致中藥的藥理作用增強(qiáng)、減弱或發(fā)生改變，因而臨床效用也發(fā)生相應(yīng)的變化，從而更好地發(fā)揮中藥臨床療效，滿足辨證論治的需要，因此炮制應(yīng)圍繞著臨床的需要展開(kāi)，故本實(shí)驗(yàn)將繼續(xù)進(jìn)行丹參醋制后的藥效活性評(píng)價(jià)。

［1］黃喜汝，曹冬，詹文紅．高效液相色譜法測(cè)定冠心丹參滴丸中3種脂溶性成分的含量［J］．中國(guó)醫(yī)藥藥學(xué)雜志，2006，26（9）：105-1055．

［2］中醫(yī)研究院中藥研究所，北京藥品生物制品檢定所．中藥炮制經(jīng)驗(yàn)集成［M］．北京：人民衛(wèi)生出版社，1974：38．

［3］程立方，崔秀君．丹參不同炮制品中丹參酮ⅡA含量比較［J］．中國(guó)現(xiàn)代中藥，2009，11（5）：41-43．

［4］常明泉，袁勝浩，黃良永，等．不同酒制工藝對(duì)丹參中丹參酮ⅡA含量的影響［J］．中國(guó)藥師，2010，13（12）：1736-1737．

［5］顧瑤華，朱悅．丹參不同炮制品中丹參酮ⅡA的含量差異研究［J］．中成藥，2010，32（2）：252-254．

Study on Processing Conditions of Vinegar-fried Salvia Miltiorrhizae

Yu Xueliang Gu Yaohua Xue Jing Ding Rongmin
(Suzhou Health College,Suzhou,Jiangsu Province,215009,China)

Objective To study the optimal vinegar-fried method for Salvia miltiorrhizae．Methods Orthogonal design was used with three key factors：quantities of vinegar，processing time and temperature．The optimal vinegar-fried method was screened on the basis of TanshinoneⅡAcontent．Results The optimal processing conditions are as follows：the quantities of vinegar is 30%，the processing time is 60min and the processing temperature is 60℃．Conclusion For the optimized processing method，the content of TanshinoneⅡAof processed saliva miltiorrhizae is high，and the resources are saved．

Salvia Miltiorrhizae；Vinegar-fried；TanshinoneⅡA；Orthogonal design

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.21.080

1672-2779（2013）-21-0107-03

楊 杰

2013-07-21）