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        萱草總黃酮體外抗氧化研究

        2013-01-30 00:52:26白雪松張晶瑩李善姬
        食品研究與開發(fā) 2013年21期
        關(guān)鍵詞:萱草勻漿提取液

        白雪松,張晶瑩,李善姬

        (1.吉林醫(yī)藥學(xué)院營養(yǎng)教研室,吉林吉林132013;2.吉林省衛(wèi)生檢測檢驗中心,吉林長春130062)

        萱草又名金針菜,黃花菜、忘憂草,為百合科萱草屬多年生草本植物,原產(chǎn)于中國南部及日本,其根、葉、莖、花在東亞地區(qū)作為食品和傳統(tǒng)的藥品已有幾千年的歷史[1]。萱草營養(yǎng)豐富,含有糖類、蛋白質(zhì)、維生素、無機鹽及多種人體必需的氨基酸。在現(xiàn)代生活中,萱草與香菇、木耳、冬筍一起被稱為蔬菜類中的四大珍品[2]?!侗静菥V目》記載黃花菜有利胸膈、五臟、輕身明目、治小便赤澀、解煩熱、除酒瘟、令人好歡無憂等藥效。黃酮乃植物中廣泛存在的一種有效成分,具有保肝抗炎、鎮(zhèn)定補腦、延緩衰老、抗氧化自由基活性作用,此外還有降壓、降血脂、提高機體免疫力等藥理活性[3]。因此近年來黃酮類化合物成為了新藥開發(fā)研究中的一個非常重要的資源,具有廣闊的開發(fā)應(yīng)用前景。

        目前對萱草總黃酮的研究主要集中在提取工藝的研究,關(guān)于其抗氧化活性的研究尚未見到報道。本文對萱草總黃酮體外抗氧化作用進(jìn)行了初步研究,以期為萱草資源在抗氧化功能食品、藥品及天然抗氧化劑的研究及開發(fā)領(lǐng)域服務(wù)。

        1 材料與儀器

        1.1 材料

        萱草:購自吉林市;2-D-脫氧核糖(2-Deoxy-Dribose,購自Sigma 公司,CAS:533-67-5);蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所,CAS:153-18-4);無水乙醇、乙醚、硫酸亞鐵、磷酸氫二鈉、磷酸氫二鉀、氯化鉀、三氯乙酸、2-硫代巴比妥酸蔗糖、抗壞血酸、過氧化氫等試劑均為國產(chǎn)分析純。

        1.2 儀器

        UV-1800 紫外分光光度計:日本島津;ZN-500A高速中藥粉碎機:長沙市岳麓區(qū)中南制藥機械廠;KQ-100DB 數(shù)控超聲波清洗器:昆山市超聲儀器有限公司;TD5A 臺式低速離心機:湖南省凱達(dá)實業(yè)發(fā)展有限公司;HHS 電熱恒溫水浴鍋:上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠;SHB-111A 循環(huán)水式多用真空泵:上海豫康科教儀器設(shè)備有限公司;202-1 電熱恒溫干燥箱:天津市泰斯特儀器有限公司。

        2 方法

        2.1 萱草總黃酮的提取

        稱取干燥粉碎的萱草粉100 g,用乙醚在60 ℃下脫脂脫色4 h,脫脂后的萱草粉按料液比1 ∶20 加入60 %乙醇,60 ℃超聲浸取40 min,提取液離心10 min(3 000 r/min)上清液即為黃酮提取液,將黃酮提取液置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮并用60%乙醇定容至50 mL,稀釋500 倍,取1 mL 稀釋液于360 nm 處的吸光度,按下列公式計算黃花菜總黃酮含量:總黃酮含量=[樣品中相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)蘆丁濃度(μg/mL)×稀釋倍數(shù)×100]/[萱草樣品質(zhì)量(g)×測定用樣品的體積(mL)×1 000]×100%。

        標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精確稱取10 mg 已烘至恒重蘆丁標(biāo)樣,以60%乙醇溶液溶解并定容至50 mL,搖勻即得濃度為0.2 mg/mL 標(biāo)樣儲備液。取蘆丁標(biāo)樣儲備液5.00 mL 于25 mL 容量瓶中,用質(zhì)量分?jǐn)?shù)60%乙醇溶液定容,用紫外分光光度計在190 nm~400 nm 范圍內(nèi)進(jìn)行吸光度掃描,2 次掃描重復(fù)平均,最大特征吸收峰為360 nm。分別移取0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL 蘆丁標(biāo)樣儲備液于6 個10 mL 容量瓶中,加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)60%的乙醇溶液定容,在360 nm 處測定吸光度。以濃度對吸光度進(jìn)行回歸,計算回歸方程和相關(guān)系數(shù)。

        2.2 抑制DPPH·作用測定

        采用改進(jìn)的Nagai 法[4],樣品組取各濃度黃酮樣品提取液(20.0、40.0、60.0、80.0、100.0 μg/mL)2.0 mL,分別加入4.0 mL DPPH·60%乙醇溶液,混勻,放置30 min。于波長517 nm 處測定吸光度值,記為A樣品,對照組以60%乙醇代替黃酮提取液,加DPPH·60%乙醇溶液4.0 mL,混勻,測吸光度值,記為A對照,同時設(shè)立空白組,取各濃度黃酮樣品提取液2.0 mL,加入60%乙醇溶液4.0 mL,混勻,測吸光度值,記為A空白。每個試樣做3 次平行,取平均值,根據(jù)如下公式計算抑制率。

        2.3 清除·OH 作用測定

        ·OH 清除活性的測定采用2-脫氧核糖氧化法[5],每支試管分別加入5 mmol/L FeSO4,5 mmol/L EDTA,5 mmol/L 2-D-脫氧核糖各0.2 mL,與0.2 mL 不同濃度黃酮樣品混合,加入0.1 mol/L PBS 緩沖液(pH7.4)1.0 mL,0.2 mL 的5 mmol/L H2O2,37 ℃水浴4 h,加1.4%三氯乙酸、0.5%硫代巴比妥酸各1 mL。沸水浴10 min后迅速冷卻至室溫。波長532 nm 處測定各管的吸光度值A(chǔ)樣品。與樣品組對比,空白組不加2-D-脫氧核糖,對照組60%乙醇代替樣品,測得的吸光度為A對照。

        2.4 對H2O2 誘導(dǎo)肝勻漿脂質(zhì)過氧化的影響

        取小鼠肝組織,用冷生理鹽水洗凈,冰浴下勻漿,制成1%(質(zhì)量體積比)的懸浮液。取1%肝勻漿2 mL,加入樣品0.4 mL,再加入6 mmol/L FeSO40.2 mL,60 mmol/L H2O20.2 mL,對照組加0.4 mL 的60%無水乙醇,陽性對照組與以各黃酮溶度一致的VC溶液代替測得的吸光度分別是A樣品,A對照,A空白。37 ℃溫育1 h 后,加入15%三氯乙酸2.0 mL,終止反應(yīng),以3 000 r/min 離心10 min,取上清液,加0.67%硫代巴比妥酸2.0 mL,沸水浴15 min,流水冷卻,測定532 nm 處的吸光度值。

        2.5 對H2O2 所致的紅細(xì)胞氧化溶血的影響

        將小鼠斷頭取血,肝素抗凝,2 000 r/min 離心10 min得取沉淀即為紅細(xì)胞,用冷生理鹽水洗滌3 次,直至上層澄清無紅色,制成0.5%紅細(xì)胞懸液(質(zhì)量體積比)。取懸液4 mL 加入不同濃度的樣品0.2 mL,混勻后加入0.1 mL 100 mmol/LH2O2啟動反應(yīng),37 ℃溫育1 h 后,2 000 r/min 離心10 min,加入4 mL 生理鹽水稀釋后于415 nm 波長下測定吸光度值。以0.1 mL 100 mmol/L H2O2+5%紅細(xì)胞+60%乙醇溶液為對照組,以與各黃酮提取液一致的溶度的VC溶液代替黃酮提取液作為陽性對照組。

        2.6 數(shù)據(jù)處理

        所有實驗數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)處理采用Excel 數(shù)據(jù)庫錄入數(shù)據(jù)并用SPSS11.5 軟件進(jìn)行分析,不同實驗組間采用t檢驗。

        3 結(jié)果與討論

        3.1 萱草總黃酮的提取

        經(jīng)紫外分光光度計分析,蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸方程為Y=36.121 4X+0.546 6,R=0.999 9。經(jīng)計算,萱草總黃酮含量為0.536%。

        3.2 萱草總黃酮抑制DPPH·作用

        DPPH·自由基是一種穩(wěn)定的自由基,其最大的吸收波長為517 nm。DPPH·自由基遇到提供質(zhì)子的物質(zhì)如抗氧化劑時就會被清除,表現(xiàn)為吸光度的降低[6]?;谶@個原理,物質(zhì)的抗氧化活性可以用其清除DPPH·自由基的能力來表示。結(jié)果見表1。

        表1 萱草總黃酮對DPPH·抑制作用(±s,n=3)Table 1 Inhibition effect of DPPH·by total flavonoids from Hemerocallis fulva L(±s,n=3)

        表1 萱草總黃酮對DPPH·抑制作用(±s,n=3)Table 1 Inhibition effect of DPPH·by total flavonoids from Hemerocallis fulva L(±s,n=3)

        注:*萱草總黃酮組與對照組比較,P<0.05;“—”表示空白。

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        由表1 數(shù)據(jù)可知,萱草總黃酮提取液對DPPH·具有較高抑制作用,在20 μg/mL~100 μg/mL 范圍內(nèi)可見,隨濃度的增加,對DPPH·的抑制率明顯增強,且抑制率與黃酮的濃度呈一定量效關(guān)系。

        3.3 萱草總黃酮清除·OH 作用

        ·OH 是目前所知活性氧中對生物體危害最大的一種自由基,對細(xì)胞內(nèi)DNA 的破壞作用最大。活性氧所導(dǎo)致的DNA 損傷在細(xì)胞里的積累被認(rèn)為是機體老化的主要原因[7],因此研究·OH 的清除作用具有重要的應(yīng)用價值。萱草總黃酮自身可作為優(yōu)良供氫體,向活潑自由基提供氫后,通過共振雜化與其它自由基結(jié)合成穩(wěn)定二聚體,抑制率值越大表明供氫能力越強,即還原能力越強,越能發(fā)揮抗氧化作用。結(jié)果見表2。

        表2 萱草總黃酮對·OH 抑制作用(±s,n=3)Table 2 Inhibition effect of·OH by total flavonoids from Hemerocallis fulva L(±s,n=3)

        表2 萱草總黃酮對·OH 抑制作用(±s,n=3)Table 2 Inhibition effect of·OH by total flavonoids from Hemerocallis fulva L(±s,n=3)

        注:*萱草總黃酮組與對照組比較,P<0.05;“—”表示空白。

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        由表2 數(shù)據(jù)可知,萱草總黃酮在較低濃度20 μg/mL時,對·OH 有較弱清除作用,但隨著濃度的增加,清除率逐漸增加,且清除率與黃酮的濃度呈一定量效關(guān)系。

        3.4 萱草總黃酮對H2O2 誘導(dǎo)肝勻漿脂質(zhì)過氧化的影響

        硫代巴比妥酸法[8]測定脂質(zhì)過氧化物的原理是基于一分子丙二醛可與兩分子硫代巴比妥酸發(fā)生縮合反應(yīng),在酸性條件下形成在波長532 nm 處有最大吸收的紅色化合物。丙二醛(MDA)是脂質(zhì)過氧化的降解產(chǎn)物之一,其含量變化可間接反映被測體系中發(fā)生脂質(zhì)過氧化的程度。結(jié)果見表3。

        表3 萱草總黃酮對H2O2 誘導(dǎo)肝勻漿脂質(zhì)過氧化影響(±s,n=3)Table 3 Inhibition effect of H2O2 induced lipid peroxidation by total flavonoids from Hemerocallis fulva L(±s,n=3)

        表3 萱草總黃酮對H2O2 誘導(dǎo)肝勻漿脂質(zhì)過氧化影響(±s,n=3)Table 3 Inhibition effect of H2O2 induced lipid peroxidation by total flavonoids from Hemerocallis fulva L(±s,n=3)

        注:*與VC 組比較,P<0.05;“—”表示空白。

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        從表3 中可以看出,VC溶液和萱草黃酮溶液均能較好地抑制由Fenton 反應(yīng)產(chǎn)生的·OH 誘導(dǎo)的離體肝細(xì)胞丙二醛的生成。在試驗濃度范圍內(nèi),各組的抑制作用隨濃度的增加而逐漸增大,表現(xiàn)一定的量效關(guān)系,且在同濃度下,萱草黃酮樣品的抑制率大于VC溶液,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

        3.5 萱草總黃酮對H2O2 所致的紅細(xì)胞氧化溶血的影響

        紅細(xì)胞在體外因自身氧化或者誘導(dǎo)氧化細(xì)胞膜破裂而發(fā)生溶血,當(dāng)加入抗氧化物質(zhì)時,可抑制或減緩紅細(xì)胞氧化的過程[9]。從表4 中可以看出,萱草黃酮濃度從20 mg/mL 增加到100 mg/mL 時,萱草黃酮對紅細(xì)胞的溶血有抑制作用,且隨著濃度增加,抑制率明顯提高,當(dāng)濃度為100 mg/mL 時,萱草黃酮對H2O2紅細(xì)胞氧化溶血的抑制率可達(dá)55.03%。萱草黃酮對紅細(xì)胞的溶血抑制作用低于VC溶液,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表4。

        4 結(jié)論

        本實驗結(jié)果表明,萱草總黃酮有較強的抗氧化活性,能顯著抑DPPH·、·OH 自由基,并能有效抑制紅細(xì)胞膜的氧化損傷,保護細(xì)胞膜,顯著抑制H2O2所致的紅細(xì)胞溶血,對體外溫育和H2O2誘導(dǎo)的肝勻漿丙二醛(MDA)生成具有較強抑制作用。

        表4 萱草總黃酮對H2O2 所致的紅細(xì)胞氧化溶血的影響(±s,n=3)Table 4 Inhibition effect of H2O2 induced oxidative hemolysis of red blood cells by total flavonoids from Hemerocallis fulva L(±s,n=3)

        表4 萱草總黃酮對H2O2 所致的紅細(xì)胞氧化溶血的影響(±s,n=3)Table 4 Inhibition effect of H2O2 induced oxidative hemolysis of red blood cells by total flavonoids from Hemerocallis fulva L(±s,n=3)

        注:*與VC 組比較,P<0.05;“—”表示空白。

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        [1] Tai C Y,Chen B H.Analysis and stability of carotenoids in the flowers of daylily(Hemerocallis disticha)as affected by various treatments[J].Journal Agriculture and Food Chemistry,2000,48(12):5962-5968

        [2] 鄧放明,尹華,李精華,等.黃花菜應(yīng)用研究現(xiàn)狀與產(chǎn)業(yè)化開發(fā)對策[J].湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2003,29(6):529-532

        [3] 徐任生,葉陽,趙維民.天然產(chǎn)物化學(xué)[M].北京:科學(xué)出版社,2004:562-564

        [4] Nagai T,Inoue R,Inoue H,et al. Preparation and antioxidant properties of water extract of propolis[J].Food Chemistry,2003,80:29

        [5] 金鳴,蔡亞欣,李金榮.鄰二氮菲-Fe2+氧化法檢測H2O2/Fe2+產(chǎn)生的羥自由基的新方法[J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展,1999,26(2):553-555

        [6] Amarowicz R,Pegg R B,Rahimi Moghaddam P,et al.Free- radical scavenging capacity and antioxidant activity of selected plant species from the Canadian prairies[J].Food Chemistry,2004,84(4):551-562

        [7] Bernstein C.Sex and DNA Repair[M].Newyork:Academic Press,1991:166

        [8] 婁翠,湯順清.海帶巖藻多糖的抗脂質(zhì)過氧化作用研究[J].中國釀造,2011,21(8):25-28

        [9] 黃曉蘭,閻俊,吳曉文,等.枸杞多糖對H2O2誘導(dǎo)的小鼠生殖細(xì)胞損傷的影響[J].食品科學(xué),24(12):116-118

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