俞燕芳 毛平生 鄧真華 尹志亮 張春云

( 江西省蠶桑茶葉研究所 330203)

蛹蟲草，又稱北冬蟲夏草、北蟲草，是一種珍貴的中藥材。蛹蟲草子實體除了富含氨基酸、維生素及鈣、錳、鋅、硒等微量元素外，還含有蟲草素、蟲草多糖、蟲草酸、SOD 等多種生物活性物質(zhì)，具有增強免疫力、滋肺補腎、止血化痰、抑制腫瘤生長等藥用價值［1～2］。近年來，關(guān)于蛹蟲草人工栽培技術(shù)方面的報道很多，蛹蟲草人工培育成功率高，生長周期短，基本滿足大規(guī)模生產(chǎn)要求，已投入市場銷售。

目前市面上的蛹蟲草品種多樣，產(chǎn)品良莠不齊。選擇適合本地區(qū)生產(chǎn)的優(yōu)良菌株是蛹蟲草栽培實現(xiàn)高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的關(guān)鍵。由于分布地域不同，而且蛹蟲草菌株種性不穩(wěn)定，極易出現(xiàn)性狀分離，不同的蛹蟲草品種生物學特性和栽培學特性有所不同［3～5］。筆者通過對3 個蛹蟲草菌株進行菌落培養(yǎng)、液體菌種培養(yǎng)和子實體栽培，比較不同菌株菌絲生長狀況、子實體產(chǎn)量和質(zhì)量等方面的差異，篩選出1 個優(yōu)良菌株，為蛹蟲草的人工栽培提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株市售的蛹蟲草菌株B1(購自北京)、J1(購自江蘇)和H1(購自河南)。

1.1.2 培養(yǎng)基

①PDA 培養(yǎng)基:馬鈴薯20%，瓊脂粉0. 5%，KH2PO40.3%，MgSO4·7H2O 0.1%，葡萄糖2.5%，蛋白胨0.3%。

②液體培養(yǎng)基:馬鈴薯20%，KH2PO40. 3%，MgSO4·7H2O 0.1%，葡萄糖2.5%，蛋白胨0.3%。

③栽培培養(yǎng)基:大米 30g + 蠶蛹粉 5g+營養(yǎng)液4 0 mL(KH2PO40. 3% ，MgSO4·7 H2O 0.05%，葡萄糖2.5%，蛋白胨0.3%)。

1.2 方法

1.2.1 菌落培養(yǎng)

挑取直徑5mm 左右的蛹蟲草菌塊接種至9cmPDA 平板中央，置于23℃恒溫培養(yǎng)18d。調(diào)查菌絲生長速度(菌落半徑/培養(yǎng)時間)、菌絲色澤、邊緣整齊度和菌落角變率(角變面積/菌落總面積)。

1.2.2 液體菌種培養(yǎng)

挑取直徑5mm 左右的蛹蟲草菌塊接種到裝有40mL 液體培養(yǎng)基的三角瓶中，18℃遮光靜置培養(yǎng)2d，然后在搖床上23℃、120r/min 振蕩培養(yǎng)7d，比較各菌株的菌球數(shù)(個/10mL)和菌絲形態(tài);菌株成熟后過濾取菌絲，8 000r/min 離心10min，60℃烘干至恒重，稱重。

1.2.3 子實體培養(yǎng)

在無菌條件下取10mL 活化的菌株懸液，接入栽培培養(yǎng)基中培養(yǎng)。初始階段遮光培養(yǎng)，室溫控制在17 ～20℃。待表面布滿蟲草菌絲后，將溫度提高到22 ～25℃，培養(yǎng)至菌絲吃透培養(yǎng)基后，施以1 000lx、12h/d 的光照，同時進行晝夜溫差刺激，將白天溫度設為20℃，晚上設至10℃，菌絲體由白色逐漸轉(zhuǎn)為桔黃色。待培養(yǎng)基表面有突起，并形成小米粒狀原基時，適當通風，補充新鮮空氣，保持室溫在21 ～23℃，空氣相對濕度提高至80% ～90%，培養(yǎng)50d 后采收子實體，50℃烘干，稱重。比較菌絲封面時間、轉(zhuǎn)色時間、出現(xiàn)原基時間、子實體形態(tài)和每瓶干重。

2 結(jié)果和分析

2.1 不同菌株菌落培養(yǎng)試驗結(jié)果

總體來看，3 個菌株的菌絲生長都呈現(xiàn)慢－快－慢的趨勢。由表1 可以看出，H1 菌株長勢最差，平均日均生長只有1.86mm。B1 菌絲生長最快，而且菌落整齊，菌絲致密潔白，匍匐狀緊貼培養(yǎng)基生長，邊緣整齊，氣生性中等，角變率較小，具有優(yōu)良菌株的性狀。

表1 不同菌株菌落培養(yǎng)試驗結(jié)果

2.2 不同菌株液體培養(yǎng)試驗結(jié)果

接入液體培養(yǎng)基后，3 個菌株菌絲生長表現(xiàn)差異顯著，具體見表2。菌株B1 菌絲濃密，菌球數(shù)較多，菌絲產(chǎn)量較高。H1 菌球數(shù)和菌絲干重均最低。

2.3 不同菌株子實體栽培試驗結(jié)果

在遮光培養(yǎng)過程中，B1 菌株的菌絲生長速度高于J1 和H1，由表3 可以看出，培養(yǎng)7d 部分瓶中的菌絲已布滿培養(yǎng)基表面，而H1 菌株需要8 ～10 天。施以光照后，三個菌株的轉(zhuǎn)色時間大致相同，均為2d，B1 菌株出現(xiàn)原基時間早于J1 和H1。3 個菌株的商品性也有不同，H1 的子實體產(chǎn)量最低，且子實體多頭狀、帶狀、片狀等不規(guī)則形，表面H1 菌株已出現(xiàn)退化。B1 和J1 的子實體產(chǎn)量大致相同，但B1子實體較粗，商品性狀優(yōu)于H1。

表2 不同菌株液體菌株培養(yǎng)試驗結(jié)果

表3 不同菌株子實體培養(yǎng)試驗結(jié)果

3 結(jié)論與討論

研究結(jié)果表明，3 個菌株的生物學和栽培學特性均有明顯不同，菌株B1 菌絲生長速度最快，菌絲產(chǎn)量高，子實體產(chǎn)量高，且粗長均勻，顏色桔黃，具有較高的經(jīng)濟價值，可作為生產(chǎn)用菌株。J1 次之，H1已明顯出現(xiàn)退化癥狀，應棄之不用。

蛹蟲草不同菌株表現(xiàn)差異較大，而且種性容易出現(xiàn)變異和退化，所以在大規(guī)模栽培前進行菌株子實體栽培、生長條件和育種試驗是十分必要的。目前蛹蟲草人工栽培需要人工控溫控濕，耗能較大，為延長蛹蟲草生產(chǎn)季節(jié)和減少人工控溫的能耗，如果能在現(xiàn)有優(yōu)良菌株的基礎上選育出適合在本地自然氣溫條件下生長的菌株，對蛹蟲草大規(guī)模生產(chǎn)將具有重要意義。

［1］代君君，范濤，吳傳華，等. 人工栽培蛹蟲草研究的概述［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學，2007，35(18):5469 ～5471.

［2］桂仲爭，朱雅紅.蛹蟲草的人工培育、有效成分及藥理作用研究進展［J］.蠶業(yè)科學，2008，34(1):178 ～1841

［3］李森柱，夏鳳娜，楊小兵.蛹蟲草5 個選育菌株的品比試驗［J］.中國食用菌，2006，25(6):15 ～19.

［4］孫軍德，房琳琳，王穎，等. 蛹蟲草不同菌株的生物學特性及系統(tǒng)發(fā)育研究［J］.沈陽農(nóng)業(yè)大學學報，2011，42(3):306～310.

［5］田雪梅.兩個蛹蟲草菌株的人工栽培試驗比較［J］.食藥用菌，2012，20(4):229 ～230.