陳 偉

(上海市嘉定區(qū)中心醫(yī)院腫瘤科，上海 201800）

非小細(xì)胞肺癌患者血清胸腺嘧啶激酶定量測定的臨床價值

陳 偉

(上海市嘉定區(qū)中心醫(yī)院腫瘤科，上海 201800）

目的探討非小細(xì)胞肺癌患者血清胸腺嘧啶激酶(TK）水平變化在化療療效及預(yù)后評估中的價值。方法采用新型非放射性酶聯(lián)免疫吸附試劑盒檢測非小細(xì)胞肺癌患者血清TK水平。結(jié)果化療后非小細(xì)胞肺癌患者血清TK水平明顯低于化療前(P＜0.05）。結(jié)論非小細(xì)胞肺癌患者血清TK定量測定為非小細(xì)胞肺癌治療的療效評價和預(yù)后檢測提供一個新的方法。

非小細(xì)胞肺癌;胸腺嘧啶激酶;非放射性酶聯(lián)免疫吸附試劑盒

我國肺癌發(fā)病率占所有惡性腫瘤的首位，在過去的20 a中是增長最快的惡性腫瘤［1］，目前非小細(xì)胞肺癌發(fā)病占全部肺癌的3/4左右。臨床上采用聯(lián)合檢測血清中CYFRA21－1、CEA幫助指導(dǎo)化療，但在實(shí)踐過程中發(fā)現(xiàn)一些患者在手術(shù)前后始終沒有CYFRA21－1和CEA異常改變，甚至有部分患者已發(fā)生明顯遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移時此2項(xiàng)指標(biāo)仍提示正常。血清胸腺嘧啶激酶(thymidine kinase，TK）存在于細(xì)胞的有絲分裂周期中，TK為G1晚期和S期合成DNA復(fù)制所需要的若干酶分子之一，編碼TK的mRNA及其表達(dá)的蛋白質(zhì)也成為細(xì)胞增生的標(biāo)志物，應(yīng)用同位素標(biāo)記方法檢測結(jié)果表明血清胸腺嘧啶激酶水平與腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞分裂增殖數(shù)目正相關(guān)，血清TK已用于血液系統(tǒng)惡性腫瘤的治療檢測和愈后評估［2－5］。有臨床研究［6］針對手術(shù)前后非小細(xì)胞肺癌作為研究對象發(fā)現(xiàn):術(shù)前非小細(xì)胞肺癌患者血清TK1的水平高于健康對照，通過對比發(fā)現(xiàn)手術(shù)后1個月比手術(shù)前未發(fā)生轉(zhuǎn)移患者其血TK1水平下降45%。因此，我們設(shè)想定量檢測血清TK水平應(yīng)用于非小細(xì)胞肺癌化療的治療評價及愈后評估。

1 材料與方法

1.1 一般資料 2010年8月至2012年9月期間在我院就診患者，依據(jù)入組標(biāo)準(zhǔn)納入分組。非小細(xì)胞肺癌組:80例左右，經(jīng)病理(手術(shù)/氣管鏡/脫落細(xì)胞檢查）和PET－CT證實(shí)，男女各半。對照組1:慢性阻塞性肺炎患者，50例，男女各半。對照組2:健康體檢者，50例，男女各半。化療方案［7］(NP方案:長春瑞濱25 mg·m－2，第1、8 天;順鉑 30 mg·m－2第 1 ～3 天;TP 方案:泰素135 mg·m－2，第1 天;順鉑30 mg·m－2，第1～3天）。

1.2 主要試劑 非放射性酶聯(lián)免疫吸附試劑盒(TK Divitum）購自瑞典Biovica公司。

1.3 操作步驟概要 第1天:取出試劑，解凍;重溶試劑A和試劑B;按照assayrun的設(shè)計(jì)，將10μL患者樣品加入到樣品稀釋板的特定孔中;將500μL樣品稀釋液加入到樣品稀釋板的孔中;轉(zhuǎn)移10μL稀釋的血清樣品至SORB板的對應(yīng)孔中;將2 mL REAG B溶液加入到重溶的REAG A瓶配制反應(yīng)混合液;將100μL反應(yīng)混合液加入到SORB板的每個孔中。用膠帶密封SORB板，33℃孵育過夜。第2天:取出試劑，解凍;制備洗板緩沖液;重溶酶聯(lián)劑;洗SORB板;加酶聯(lián)溶液100μL/孔。用蓋子蓋住SORB板，33℃孵育90 min;配制酶聯(lián)底物溶液;洗板;加酶聯(lián)底物溶液120μL/孔;在以下時間測定405 nm處吸光值:30 min，3 ～4 h，20 h左右(如有必要）;用 DiviTumEval軟件評估數(shù)據(jù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 利用SPSS 10.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量數(shù)據(jù)采用±s表示，比較采取t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α =0.05。

2 結(jié)果

化療后非小細(xì)胞肺癌患者血清TK水平明顯低于化療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。見表1、2。

表1 各組化療前血清TK水平

表2 非小細(xì)胞肺癌患者化療前、后血清TK水平比較

3 討論

定量檢測血清TK水平應(yīng)用于非小細(xì)胞肺癌化療的治療評價及愈后評估，國際上已有報(bào)道［7］。目前國內(nèi)采用放射性疫法、Western blotting(抗TK多克隆抗體法）、點(diǎn)免疫印記法檢測血清TK酶活性。而Western blotting法操作煩瑣，而且我院不具備同位素標(biāo)記檢測血清TK條件，且其有放射污染性、半衰期短、操作復(fù)雜的缺點(diǎn)，我們這項(xiàng)研究已經(jīng)初步證實(shí)血清TK水平測定的臨床價值，在不同分期非小細(xì)胞肺癌中可顯示出良好的應(yīng)用前景，是一個很好的評價預(yù)后及化療療效的指標(biāo)，尤其通過隨訪血清TK水平的變化，可以指導(dǎo)腫瘤的分期，監(jiān)測腫瘤的復(fù)發(fā)，評價腫瘤綜合治療的效果及治療后生存期。

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Clinical Value of Quantitative Determ ination of Serum Thym idine K inase of Patientswith Non-small Cell Lung Cancer

Chen Wei
(Department of Oncology，Jiading District Central Hospital，Shanghai201800，China）

ObjectiveTo study the clinical value of serum thymidine kinase(TK）concentration changes of patientswith non－small cell lung cancer.MethodsThe serum TK concentration of patients with non－small cell lung cancer was detected by using non－radioactive enzyme linked immunosorbent assay kit.ResultsThe serum TK concentration before chemotherapy was higher than that after chemotherapy in the patients with non－small cell lung cancer(P ＜ 0.05）.ConclusionThe serum TK quantitative determination of patients with non－small cell lung cancer can provide a new method to detect the efficacy and prognosis.

non－small cell lung cancer;thymidine kinase;non－radioactive enzyme linked immunosorbent assay kit

10.3969/j.issn.1673－5412.2013.02.017

R734.2;R730.4

A

1673－5412(2013）02－0140－02

基金項(xiàng)目:嘉定區(qū)青年科學(xué)基金支持項(xiàng)目(編號:QNKYJJ 2008－11－01）

陳偉(1981－），碩士，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤基礎(chǔ)研究。E－mail:yisheng_17@126.com

2012－06－17）