王建正，馮笑山，周福有，高社干，王新帥，楊海軍，王洽印

(河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤外科、河南科技大學(xué)腫瘤研究所，河南洛陽 471003）

食管癌組織中EGFR和PTEN蛋白的表達(dá)

王建正，馮笑山，周福有，高社干，王新帥，楊海軍，王洽印

(河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤外科、河南科技大學(xué)腫瘤研究所，河南洛陽 471003）

目的探討食管癌組織中表皮生長因子受體(EGFR）和PTEN蛋白表達(dá)及意義。方法選擇食管癌組織標(biāo)本60例和正常食管組織60例，對所有標(biāo)本采用免疫組化方法進(jìn)行EGFR和PTEN蛋白檢測。結(jié)果EGFR在食管癌組織中表達(dá)陽性率為56.67%，高于在癌旁正常食管組織中的11.37%(P＜0.05）;PTEN在食管癌組織中表達(dá)陽性率為46.67%，低于癌旁正常食管組織中的96.67%(P＜0.05）。EGFR和PTEN蛋白的表達(dá)與TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05），而與患者年齡、性別無關(guān)(P＞0.05）。食管癌組織中EGFR與PTEN的蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=－0.616，P＜0.05）。結(jié)論EGFR蛋白的高表達(dá)和PTEN蛋白的低表達(dá)可能參與了食管癌的發(fā)生、發(fā)展過程，在食管癌的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了重要作用，可作為預(yù)測食管癌預(yù)后的重要指標(biāo)。

食管癌;表皮生長因子受體;PTEN

食管癌的預(yù)后較差，總的5 a生存率只有10% ～15%［1］，順鉑聯(lián)合5-Fu是目前臨床上治療食管癌的標(biāo)準(zhǔn)化療方案，但其有效率也僅為20% ～50%［2］。表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR）在多種腫瘤組織中高表達(dá)，且其在調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長、增殖、分化、惡變、血管生長及細(xì)胞死亡中發(fā)揮著重要的作用［3］。研究［4］表明許多腫瘤組織都存在EGFR的過度表達(dá)，其中食管癌組織中EGFR的表達(dá)率70%以上。食管癌組織中EGFR高表達(dá)有利于腫瘤的侵襲性生長，同時(shí)也是腫瘤預(yù)后不良的因素之一［5］。PTEN，又稱 MMAC1 或 TEP1，是 Li等［6］從原發(fā)性乳腺癌、前列腺癌以及膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株克隆得到的定位于人染色體10q23.3的一種具有雙特異性磷酸酶活性的新型抑癌基因。作為迄今為止發(fā)現(xiàn)的第1個(gè)具有磷酸酶活性的抑癌基因，PTEN自發(fā)現(xiàn)起就受到眾多學(xué)者的關(guān)注，其結(jié)構(gòu)、功能異常廣泛存在于人類多種惡性腫瘤組織中，已成為近年腫瘤學(xué)研究的熱點(diǎn)，成為繼p53后又一具有重要意義的抑癌基因。目前已發(fā)現(xiàn)PTEN基因的缺失和突變與乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌和神經(jīng)膠質(zhì)瘤等多種腫瘤有關(guān)［7］。作者用免疫組化方法檢測食管癌和癌旁正常食管組織中EGFR和PTEN蛋白的表達(dá)，并探討其與食管癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 食管癌組織及癌旁正常食管組織均選自安陽市腫瘤醫(yī)院2005年1月至2011年12月收治的60例未經(jīng)化放療、診斷明確的食管癌手術(shù)切除標(biāo)本及60例癌旁正常食管組織，其中男30例，女30例;≥60歲37例，＜60歲23例;臨床分期采用國際抗癌聯(lián)盟1987年公布的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期7例、Ⅱ期10例，Ⅲ期43例;高分化15例，中分化26例，低分化19例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37例。

1.2 檢測試劑 鼠抗人EGFR免疫組化單克隆抗體、鼠抗人PTEN免疫組化單克隆抗體、即用型快捷免疫組化MaxVision試劑盒和DAB顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.3 檢測方法及結(jié)果判定 檢測EGFR和PTEN蛋白在食管癌及癌旁正常食管組織中的表達(dá)采用免疫組化MaxVision法，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。每張制作完成的切片在陽性表達(dá)較高區(qū)隨機(jī)選擇10個(gè)高倍鏡視野(×400），連續(xù)計(jì)數(shù)至少1 000個(gè)腫瘤細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞的百分率:陽性細(xì)胞數(shù)＜10%或無陽性著色為陰性，陽性細(xì)胞數(shù)≥10%為陽性。其中EGFR以細(xì)胞膜及細(xì)胞漿出現(xiàn)黃褐色或淡黃色顆粒為陽性表達(dá)，PTEN以胞漿或細(xì)胞核出現(xiàn)呈棕黃色顆粒為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，不同組織中EGFR和PTEN蛋白表達(dá)及兩者與食管癌的各臨床病理參數(shù)關(guān)系的分析采用χ2檢驗(yàn)，食管癌組織中EGFR和PTEN蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析用Spearman等級相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 EGFR和PTEN在食管癌組織與癌旁正常食管組織中的表達(dá) EGFR在食管癌組織中表達(dá)陽性率為56.67%，高于在癌旁正常食管組織中的11.37%(P＜0.05）;PTEN在食管癌組織中表達(dá)陽性率為46.67%，低于癌旁正常食管組織中的96.67%(P＜0.05）。見圖1、2，表1。

2.2 EGFR和PTEN蛋白的表達(dá)與食管癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 EGFR和PTEN蛋白的表達(dá)與TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05），而與患者性別、年齡無關(guān)(P＞0.05）。見表2。

2.3 食管癌組織中EGFR與PTEN蛋白表達(dá)的相關(guān)性 食管癌組織中EGFR與PTEN的蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r= －0.616，P ＜0.05）。見表3。

表1 食管癌組織與癌旁正常食管組織中EGFR和PTEN蛋白的表達(dá)

表2 食管癌組織中EGFR、PTEN的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

表3 食管癌組織中EGFR與PTEN蛋白表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

EGFR屬于酪氨酸激酶型受體家族，其家族成員包括 EGFR(即 HER1）、HER2、HER3、HER4等4種同源受體。EGFR在表皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞、部分神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞中廣泛表達(dá)，在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和組織修復(fù)中起著十分重要的作用，其信號系統(tǒng)所引起的細(xì)胞效應(yīng)包括細(xì)胞增殖、遷移及黏附等多個(gè)環(huán)節(jié)，EGFR作為一種腫瘤標(biāo)志物具有許多優(yōu)點(diǎn)，主要表現(xiàn)為EGFR基因在許多上皮來源的腫瘤組織中呈過表達(dá)改變，EGFR的過表達(dá)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、血管生成、黏附、侵襲和轉(zhuǎn)移，抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡［8－9］，對表皮生長因子(EGF）具有高度親和性，兩者特異性結(jié)合后，激活酪氨酸激酶，促發(fā)細(xì)胞分裂信號，引起細(xì)胞增殖。EGFR表達(dá)異常，可導(dǎo)致正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化成無限生長的腫瘤細(xì)胞，并增加腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移能力［10］。本文結(jié)果顯示，食管癌組織中EGFR存在高表達(dá)，明顯高于癌旁正常食管組織(P＜0.05），表明其與食管癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān);EGFR的表達(dá)與性別、年齡無關(guān)(P＞0.05）;而與TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯關(guān)系(P＜0.05），表明其陽性表達(dá)的食管癌具有更大的侵襲性及轉(zhuǎn)移能力，容易早期發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。EGFR基因擴(kuò)增或伴隨著的基因突變都與腫瘤的惡性侵襲性行為密切相關(guān)，可作為食管癌預(yù)后的重要標(biāo)志。

PTEN是近年來發(fā)現(xiàn)的第1個(gè)具有磷酸酶活性的抑癌基因，定位于染色體10q23.3，編碼403個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，PTEN在調(diào)控細(xì)胞的生長發(fā)育和凋亡，細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及腫瘤細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移過程中起著重要的作用，參與細(xì)胞生長、運(yùn)動的調(diào)節(jié)，具有雙特異性磷酸酶活性，通過脂質(zhì)磷酸酶活性特異性的去除磷脂酰肌醇－3，4，5－三磷酸3位上的磷酸基團(tuán)，負(fù)性調(diào)控PI3K/蛋白激酶通路使細(xì)胞周期停滯在G1期，促進(jìn)細(xì)胞凋亡;通過蛋白磷酸酶活性去磷酸化灶性黏連激酶和含SH2的轉(zhuǎn)化蛋白而調(diào)節(jié)細(xì)胞的黏附和遷移。本研究結(jié)果顯示，PTEN蛋白在食管癌組織中的表達(dá)明顯低于癌旁正常食管組織(P＜0.05），提示PTEN在食管癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用，PTEN蛋白表達(dá)與性別、年齡無關(guān)(P＞0.05）;而與TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切(P＜0.05），表明其陰性表達(dá)的腫瘤更具有侵襲和轉(zhuǎn)移能力。

在惡性腫瘤發(fā)生的癌基因研究中，許多學(xué)者提出了基因協(xié)同作用假說，認(rèn)為在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的各階段，至少有2個(gè)或2個(gè)以上功能不同的異常激活的基因各自發(fā)揮不同作用，并在時(shí)間和空間上相互配合，協(xié)同促進(jìn)了細(xì)胞的癌變。有研究［11－12］發(fā)現(xiàn)在腫瘤的演進(jìn)過程中，EGFR能通過增加VEGF表達(dá)或與其協(xié)同作用促進(jìn)腫瘤內(nèi)新生血管形成，去除 EGFR的作用會阻礙血管的進(jìn)一步發(fā)生，而PTEN可通過調(diào)節(jié)VEGF來抑制腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動性和血管形成［12］。在本研究中，EGFR和PTEN蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，表明在食管癌的系列病理過程中，EGFR和PTEN具有相互協(xié)同效應(yīng)，其機(jī)制有待進(jìn)一步深入探討。

另外，EGFR在非小細(xì)胞肺癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌等實(shí)體腫瘤中高表達(dá)，其靶向治療在上述腫瘤治療中取得良好療效。食管癌組織中EGFR存在高表達(dá)，在食管癌的浸潤、促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中起著非常重要的作用，為針對EGFR的分子靶向藥物在食管癌綜合治療中的應(yīng)用提供了理論依據(jù)，可能會成為食管癌一個(gè)新的判斷細(xì)胞表型向惡性轉(zhuǎn)化的分子生物學(xué)診斷指標(biāo)?？傊?，深入研究PTEN在腫瘤發(fā)生中的作用機(jī)制，以及針對EGFR的分子靶向藥物在食管癌綜合治療中的應(yīng)用將為腫瘤的診斷，新的抗腫瘤藥物開發(fā)，指導(dǎo)臨床治療提供新的策略。

［1］ Jemal A，Murray T，Samuels A，et al.Cancer statistics，2003［J］.CA Cancer JClin，2003，53(1）:5 －26.

［2］ Anderson SE，Minsky BD，Bains M，et al.Combined modality chemoradiation in elderly oesophageal cancer patients［J］.Br JCancer，2007，96(12）:1823 －1827.

［3］ Scartozzi M，Bearzi I，Berardi R，et al.Epidermal growth factor receptor(EGFR）downstream signalling pathway in primary colorectal tumours and related metastatic sites:optimising EGFR-targeted treatment options［J］.Br JCancer，2007，97(1）:92 －97.

［4］ Hara F，Aoe M，Doihara H，et al.Antitumor effect of gefitinib(‘Iressa’）on esophageal squamous cell carcinoma cell lines in vitro and in vivo［J］.Cancer Lett，2005，226(1）:37 －47.

［5］ Sunpaweravong P，Sunpaweravong S，Puttawibul P，et al.Epidermal growth factor receptor and cyclin D1 are independently amplified and overexpressed in esophageal squamous cell carcinoma［J］.J Cancer Res Clin Oncol，2005，131(2）:111 －119.

［6］ Li J，Yen C，Liaw D，et al.PTEN，a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain，breast，and prostate cancer［J］.Science，1997，275(5308）:1943 －1947.

［7］ Frisk T，F(xiàn)oukakis T，Dwight T，et al.Silencing of the PTEN tumorsuppressor gene in anaplastic thyroid cancer［J］.Genes Chromosomes Cancer，2002，35(1）:74 －80.

［8］ Tamás P，Solti Z，Bauer P，et al.Mechanism of epidermal growth factor regulation of Vav2，a guanine nucleotide exchange factor for Rac［J］.JBiol Chem，2003，278(7）:5163 －5171.

［9］ 戴春玲，符立梧.靶點(diǎn)藥物 Cetuximab(C225）研究新進(jìn)展［J］.生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，2007，34(3）:246－254.

［10］于曉棠，陸世倫，朱世能.表皮生長因子受體與腫瘤［J］.復(fù)旦學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2005，32(4）:497 －500.

［11］ Casanova ML，Larcher F，Casanova B，et al.A critical role for rasmediated，epidermal growth factor receptor-dependent angiogenesis inmouse skin carcinogenesis［J］.Cancer Res，2002，62(12）:3402－3407.

［12］Yang L，Kuang LG，Zheng HC，etal.PTEN encoding product:amarker for tumorigenesis and progression of gastric carcinoma［J］.World J Gastroenterol，2003，9(1）:35 －39.

Expressions of EGFR and PTEN in Esophageal Carcinoma Tissues

Wang Jianzheng，F(xiàn)eng Xiaoshan，Zhou Fuyou，Gao Shegan，Wang Xinshuai，Yang Haijun，Wang Qiayin
(Department of Oncology Surgery，the First Affiliated Hospital of Henan University of Science and Technology，Henan University of Science and Technology Institute of Tumor，Luoyang 471003，China）

ObjectiveTo investigate the expressions and significance of epidermal growth factor receptor(EGFR）and PTEN and their clinicopathological in esophageal carcinoma tissues.MethodsThe protein expressions of EGFR and PTEN were detected by immunohistochemical technique in 60 cases of esophageal carcinoma and 60 cases of pericancerous normal tissues.ResultsThe expression rate of EGFR in the esophageal carcinoma tissue was significantly higher than that in pericancerous normal tissue(56.67%vs11.37%，P ＜0.05）.The expression rate of PTEN in esophageal carcinoma tissuewas significantly lower than that in pericancerous normal tissues(46.67%vs96.67%，P ＜0.05）.The expressions of EGFR and PTEN were significantly correlated with TNM stages，differentiation and lymph nodemetastasis(P ＜0.05），butwere not correlated with age and gender of patients(P ＞0.05）.The expression of EGFRwere negatively related with PTEN in the esophageal carcinoma(P ＜0.05）.ConclusionEGFR and PTEN protein are involved in occurrence and development of esophageal carcinoma，they play an important role in the invasion andmetastasis ofesophageal cancer，and can be used for predicting the prognosis of esophageal carcinoma.

esophageal carcinoma;epidermal growth factor receptor;PTEN

10.3969/j.issn.1673-5412.2013.02.003

R735.1;R730.23

A

1673－5412(2013）02－0100－04

王建正(1982－），男，碩士在讀，主要從事消化道腫瘤的基礎(chǔ)與臨床研究。E-mail:jianzhengwang@sohu.com

馮笑山(1957－），男，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，主要從事消化道腫瘤的基礎(chǔ)與臨床研究。E-mail:sam.feng@hotmail.com

2012－09－11）