尤永燕，龔匡隆，龔向東，沙仲，張津萍，孫厚華

中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病醫(yī)院，南京 210042

沙眼衣原體是一類細(xì)胞內(nèi)寄生微生物，其生命周期分為2個(gè)階段，即原體期和始體(或網(wǎng)狀體)期[1]。衣原體吸附于敏感細(xì)胞的表面受體蛋白，可在淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞中增殖，造成泌尿生殖道感染。在男性感染中，主要表現(xiàn)為非淋病奈瑟菌性尿道炎、附睪炎、前列腺炎和無癥狀感染等。在女性感染中，主要為宮頸炎、尿道炎、盆腔炎和無癥狀感染等。衣原體在性傳播疾病中的感染作用一直備受關(guān)注。為了解沙眼衣原體感染男性和女性泌尿生殖道的臨床情況，本研究采用實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)檢測性病患者泌尿生殖道沙眼衣原體，進(jìn)行臨床和實(shí)驗(yàn)室分析。

1 材料與方法

1.1 病例

選取2011年我院性病科門診患者。入選標(biāo)準(zhǔn)：男性和女性患者，18～65歲，無精神病均可入選。共計(jì)380例，其中男性216例，最大64歲，最小18歲，平均(35.27±9.29)歲；女性164例，最大60歲，最小18歲，平均(31.95±8.65歲)。均有完整的臨床記錄。

1.2 標(biāo)本采集

1.2.1男性尿道取材男性患者尿道分泌物標(biāo)本應(yīng)在排尿后1～2 h采集，采用男性拭子插入尿道2～4 cm，轉(zhuǎn)動(dòng)并停留10 s左右，取出后置無菌管內(nèi)保存。

1.2.2女性宮頸管內(nèi)取材先用第1根棉拭子擦拭宮頸管口表面的分泌物，再用第2根拭子插入宮頸管1～2 cm，轉(zhuǎn)動(dòng)并停留30 s左右，讓拭子吸收較多量的分泌物，取出后置無菌管內(nèi)保存。

1.2.3采樣后的處理男性和女性患者拭子采樣后，立即接種于淋病奈瑟菌培養(yǎng)基上；同時(shí)細(xì)胞涂片染色檢查多形核白細(xì)胞和淋病奈瑟菌，采樣拭子置-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 方法

1.3.1分泌物涂片鏡檢取材后將拭子在玻片上稍用力滾動(dòng)1周，自然干燥后加熱固定，避免過度加熱使細(xì)胞變形。標(biāo)本行亞甲藍(lán)染色，細(xì)胞核和淋病奈瑟菌呈深藍(lán)色。在油鏡(10×100倍)下觀察每視野中的多形核白細(xì)胞數(shù)(每張玻片標(biāo)本觀察不少于10個(gè)視野)。男性患者多形核白細(xì)胞數(shù)分為≤4個(gè)、≥5個(gè)和陰性；女性患者多形核白細(xì)胞數(shù)分為≤9個(gè)、≥10個(gè)和陰性[2]。

1.3.2淋病奈瑟菌的培養(yǎng)方法淋病奈瑟菌培養(yǎng)采用T-M培養(yǎng)基，35～36 ℃燭缸培養(yǎng)48 h后讀結(jié)果。

1.3.3 PCR試劑盒PCR試劑盒為中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司產(chǎn)品(批號(hào)2011006)。

1.3.4實(shí)時(shí)熒光PCR試驗(yàn)用滅菌0.85%鹽水洗脫采樣拭子后12 000 r/min離心5 min，棄上清液；沉淀物加滅菌0.85%鹽水1 ml混勻，12 000 r/min離心5 min， 棄上清液。沉淀物加50 μ l DNA提取液，充分混勻，100 ℃恒溫處理(10±1)min，12 000 r/min離心5 min，取2 μ l上清液進(jìn)行擴(kuò)增。自動(dòng)分析采用核酸擴(kuò)增實(shí)時(shí)熒光檢測系統(tǒng)(中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司，型號(hào)DF7600)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 15軟件，用χ2及Fisher精確檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 男性檢測結(jié)果分析

216例男性患者中，尿道多形核白細(xì)胞數(shù)≥5個(gè)者占92.59%，≤4個(gè)者占7.41%。淋病奈瑟菌培養(yǎng)陽性122例，陽性率為56.48%。實(shí)時(shí)熒光PCR檢測沙眼衣原體陽性62例，陽性率為28.70%。淋病奈瑟菌合并沙眼衣原體感染30例，合并感染率為13.89%(表1～3)。

2.2 女性檢測結(jié)果分析

164例女性患者中，87例宮頸管內(nèi)多形核白細(xì)胞數(shù)≥10個(gè)，占53.05%；77例多形核白細(xì)胞數(shù)≤9個(gè)，占46.95%。實(shí)時(shí)熒光PCR檢測沙眼衣原體陽性33例，占20.12%。滴蟲感染4例，占2.44%，其中2例沙眼衣原體陽性。真菌感染8例，占4.88%，沙眼衣原體陰性。164例患者淋病奈瑟菌培養(yǎng)均為陰性(表4)。

表1淋病奈瑟菌陽性和陰性男性患者中多形核白細(xì)胞計(jì)數(shù)

Tab.1 White cell count in male patients with positive/negativeNeisseriagonorrhoeae

≥5n%≤4n%TotalNeisseria gonorrhoeae positive122100.00 00.00 122Neisseria gonorrhoeae negative7882.98 16 17.02 94Total20092.59 16 7.41 216

χ2=22.43，P=0.000.

表2沙眼衣原體陽性和陰性男性患者中多形核白細(xì)胞計(jì)數(shù)

Tab.2 White cell count in male patients with positive/negativeChlamydiatrachomatis(includingNeisseriagonorrhoeaeinfection)

≥5n%≤4n%TotalChlamydia trachomatis positive5995.1634.84 62Chlamydia trachomatis negative14191.56 138.44 154Total20092.59167.41 216

Fisher test,P=0.566.

表3沙眼衣原體陽性和陰性男性患者中多形核白細(xì)胞計(jì)數(shù)(排除淋病奈瑟菌感染)

Tab.3 White cell count in male patients with positive/negativeChlamydiatrachomatis(excludingNeisseriagonorrhoeaeinfection)

≥5n%≤4n%TotalChlamydia trachomatis positive2990.6339.37 32Chlamydia trachomatis negative4979.03 1320.97 62Total7882.981617.02 94

χ2=2.008，P=0.156.

表4沙眼衣原體陽性和陰性女性患者中多形核白細(xì)胞計(jì)數(shù)

Tab.4 White cell count in female patients with positive/negativeChlamydiatrachomatis

≥10n%≤9n%TotalChlamydia trachomatis positive2678.79721.21 33Chlamydia trachomatis negative6146.56 7053.44 131Total8753.057746.95 164

χ2=10.99，P=0.001.

3 討論

根據(jù)生殖道沙眼衣原體感染的臨床診療與預(yù)防[3]，本病的診斷主要依據(jù)流行病史、臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢測等，而對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢查泌尿生殖道多形核白細(xì)胞數(shù)量與沙眼衣原體感染的相關(guān)性了解甚少。本研究顯示，沙眼衣原體感染與泌尿生殖道的多形核白細(xì)胞數(shù)量相關(guān)，在排除淋病奈瑟菌感染的男性患者中， PCR檢測沙眼衣原體陽性32例，其中有29例多形核白細(xì)胞數(shù)≥5個(gè)(90.63%)，與沙眼衣原體感染相關(guān)(P=0.156，χ2=2.008)；3例多形核白細(xì)胞數(shù)≤4個(gè)(9.37%)，也與沙眼衣原體感染相關(guān)。有關(guān)女性生殖道宮頸管內(nèi)多形核白細(xì)胞數(shù)量與沙眼衣原體感染的相關(guān)性目前未見報(bào)道。國外文獻(xiàn)報(bào)道[4]，在性傳播疾病中女性沙眼衣原體和淋病奈瑟菌感染的PCR檢測率分別為20.5%和30.2%。van Dommelen等[5]采用同一女性患者陰道拭子和尿液標(biāo)本進(jìn)行沙眼衣原體PCR檢測，陰道拭子陽性率為94%，尿液為90%。Gita等報(bào)道[6]，女性沙眼衣原體感染中16.74%為盆腔炎，16.03%為宮頸炎。本研究164例女性患者,沙眼衣原體陽性率為20.12%。33例女性陽性患者中，26例多形核白細(xì)胞數(shù)≥10個(gè)(78.79%)，與沙眼衣原體感染相關(guān)(P=0.001，χ2=10.99)；7例多形核白細(xì)胞數(shù)≤9個(gè)(21.21%)，也存在沙眼衣原體感染。4例滴蟲感染患者中，檢出2例沙眼衣原體陽性，說明滴蟲與沙眼衣原體合并感染存在高風(fēng)險(xiǎn)。164例女性患者未培養(yǎng)出淋病奈瑟菌。

2008年，龔匡隆[7 ]等采用沙眼衣原體抗原快速檢測試劑盒檢測3 000例男性患者，陽性率為12.90%。本研究采用實(shí)時(shí)熒光PCR檢測216例男性患者，沙眼衣原體陽性率為28.70%。比較兩種方法，實(shí)時(shí)熒光PCR檢測沙眼衣原體的陽性率提高45%。對(duì)淋病奈瑟菌合并沙眼衣原體感染的患者，抗原檢測沙眼衣原體的陽性率為21.0%，熒光PCR檢測沙眼衣原體的陽性率為24.6%，表明熒光PCR的敏感度高于抗原檢測。

引起人泌尿生殖道感染的微生物較多，其他病原體也會(huì)引起泌尿生殖道多形核白細(xì)胞增多。本研究未對(duì)其他病原體進(jìn)行探討，主要討論臨床性病發(fā)生中的生殖道沙眼衣原體感染。沙眼衣原體可引起上生殖道和下生殖道感染，引起T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞效應(yīng)[8,9]。本研究僅采用實(shí)時(shí)熒光PCR對(duì)性病患者泌尿生殖道內(nèi)多形核白細(xì)胞數(shù)量與沙眼衣原體感染和淋病奈瑟菌感染的臨床相關(guān)性進(jìn)行分析。沙眼衣原體是人泌尿生殖道常見的致病菌之一，主要是性病性淋巴肉芽腫變種(lymphogranuloma venereum，LGV；包括L1～L3，共3個(gè)血清型)和沙眼變種[10](包括A、B、Ba、C～K，共12個(gè)血清型，D～K主要引起泌尿生殖道感染，其中D、E和F最常見，潛伏期1～3周)。臨床表現(xiàn)：男性為出現(xiàn)尿道黏性或黏液膿性分泌物，并伴有尿痛、尿道不適和尿道內(nèi)瘙癢等癥狀。女性為感染可持續(xù)數(shù)月至數(shù)年，有癥狀時(shí)可出現(xiàn)宮頸管膿性分泌物和陰道分泌物異常。約50%男性和80%女性均可發(fā)生亞臨床感染[11]。本研究顯示，男性尿道多形核白細(xì)胞數(shù)≤4個(gè)和女性宮頸管內(nèi)多形核白細(xì)胞數(shù)≤9個(gè)與沙眼衣原體亞臨床感染相關(guān)，也是沙眼衣原體感染泌尿生殖道的臨床特點(diǎn)之一。因此，在性病門診開展實(shí)時(shí)熒光PCR檢測沙眼衣原體可提高臨床檢測的陽性率和控制沙眼衣原體的傳播。

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