袁 莉 趙 輝 郭曉燕

(菏澤醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校藥理學(xué)教研室,山東 菏澤 274000)

目前，肺癌已經(jīng)成為公認(rèn)的發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤[1]，但治療方法依舊是傳統(tǒng)的手術(shù)、放療和化療。傳統(tǒng)的治療方法不僅療效差，并且在治療過(guò)程中會(huì)給患者帶來(lái)極大的痛苦。因此，各界學(xué)者都在尋找可以突破傳統(tǒng)方法的治療措施，分子靶向治療是目前惡性腫瘤治療的研究熱點(diǎn)。PI3K/AKT通路通過(guò)一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)被活化后可將各因子的生存信號(hào)傳遞到細(xì)胞內(nèi)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡。表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)是一種跨膜酪氨酸激酶受體，可激活下游的PI3K，活化PI3K/AKT信號(hào)通路，參與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展[2]。因此，本研究主要檢測(cè)EGFR在非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表達(dá)情況，為NSCLC的靶向治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本 標(biāo)本采自菏澤醫(yī)專附屬醫(yī)院2008年1月到2010年12月經(jīng)確診為非小細(xì)胞肺癌，并手術(shù)切除的石蠟標(biāo)本79例，其中，男性53例，女性26例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者41例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者38例；腺癌27例，鱗癌52例；高中分化47例，低分化32例。對(duì)照組為同期手術(shù)切除的正常肺組織，所有病例均有完整的臨床資料，患者均未做放化療。

1.2試劑 EGFR鼠抗人單克隆抗體(即用型)，免疫組化Maxvision試劑盒，EDTA抗原修復(fù)液，DAB顯色劑均購(gòu)自福州邁新生物科技有限公司。

1.3方法 所有標(biāo)本經(jīng)4 μm連續(xù)切片，HE染色。采用免疫組織化學(xué)Maxvision二步法操作，常規(guī)高壓修復(fù)，修復(fù)液均為EDTA(乙二胺四乙酸)，一抗為即用型，已知陽(yáng)性切片為陽(yáng)性對(duì)照，PBS替代一抗為陰性對(duì)照。

1.4結(jié)果判斷 EGFR的染色部位位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，染色部位以棕黃色顆粒為準(zhǔn)。隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野(×400)，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)癌細(xì)胞，然后觀察陽(yáng)性癌細(xì)胞的染色強(qiáng)度并算出陽(yáng)性癌細(xì)胞在總癌細(xì)胞中所占的比例，染色比較淺并且陽(yáng)性率<25%的為陰性，染色比較深并且陽(yáng)性率≥25%的為陽(yáng)性。

1.5統(tǒng)計(jì)分析 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析，癌組織與正常肺組織比較用χ2檢驗(yàn)，癌組織各臨床病理特征間的比較采用χ2檢驗(yàn)，P≤0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1EGFR在癌組織和正常肺組織中的表達(dá) EGFR在正常肺組織和NSCLC中的陽(yáng)性率分別為27.3%(3/11)和68.4%(54/79)，EGFR在正常肺組織中的陽(yáng)性表達(dá)顯著低于NSCLC組織中的陽(yáng)性表達(dá)(P﹤0.05，圖1～3)。

圖1 EGRF在高分化肺腺癌中的表達(dá)(400×)

圖2 EGRF在中分化肺鱗癌中的表達(dá)(400×)

圖3 EGRF在低分化肺腺癌中的表達(dá)(400×)

2.2EGFR與NSCLC中臨床病理特征的關(guān)系 見(jiàn)表1。EGFR在NSCLC中的陽(yáng)性率為68.4%(54/79)，與NSCLC的性別、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理類型均無(wú)關(guān)(P>0.05)，與分化程度密切相關(guān)(P﹤0.05)。在不同分化程度組中高中分化組的陽(yáng)性率為59.6%(28/47)，明顯低于低分化組的陽(yáng)性率81.3%(26/32)，兩組比較差異顯著(P﹤0.05)。

表1 EGFR與臨床病理特征的關(guān)系

3 討 論

EGFR是一種位于細(xì)胞膜表面的糖蛋白受體，基因位于第7號(hào)染色體的短臂，分子量為170×106，是原癌基因C-er-1(HER-1)的表達(dá)產(chǎn)物。EGFR有四部分組成，包括胞外區(qū)、跨膜區(qū)、胞內(nèi)區(qū)和羧基末端，其中胞外區(qū)主要發(fā)揮與配體結(jié)合的作用，而胞內(nèi)區(qū)含有保守的酪氨酸激酶區(qū)和典型的ATP結(jié)合區(qū)，配體通過(guò)EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來(lái)控制腫瘤生長(zhǎng)，并與新生血管生成、腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移等有密切關(guān)系。可與之結(jié)合的配體有EGF、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factor,TGF)2α和雙調(diào)蛋白(amp hiregulin,AR)等。當(dāng)與配體結(jié)合后，可形成同源或異源二聚體，激活胞內(nèi)區(qū)的酪氨酸激酶活性，磷酸化自身酪氨酸殘基，與下游含SH2和PTB區(qū)域的蛋白結(jié)合，激發(fā)信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂期。EGFR參與惡性腫瘤細(xì)胞的增殖，因此被認(rèn)為在癌的生長(zhǎng)和發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[3-5]。

經(jīng)研究表明，EGFR在NSCLC以及其他多種惡性腫瘤中均有高表達(dá)，比如乳腺癌、結(jié)腸癌等，表明EGFR的高表達(dá)與多種惡性腫瘤的形成有關(guān)聯(lián)。在本研究中，EGFR在正常肺組織和NSCLC中的陽(yáng)性表達(dá)分別為27.3%(3/11)、68.4%(54/79)，與NSCLC的分化程度有關(guān)。焦昕等[6]采用組織微陣聯(lián)合免疫組化染色技術(shù)檢測(cè)94例NSCLC組織中EGFR的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，EGFR在NSCLC中的陽(yáng)性率為60.6%，其中女性患者陽(yáng)性率為81.0%，男性患者陽(yáng)性率為54.8%，女性患者的陽(yáng)性率明顯高于男性患者。這與本研究結(jié)果不一致。朱有才等[7]采用免疫組化S-P法檢測(cè)EGFR在82例NSCLC中的表達(dá)，結(jié)果EGFR在癌組織中的陽(yáng)性率為64.6%，明顯高于正常肺組織的6.7%，并與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。Zhang Z等[8]采用免疫組化染色法檢測(cè)NOK、EGFR在155例NSCLC中的蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示兩因子在癌組織中均為高表達(dá)，同時(shí)與組織學(xué)分級(jí)和TNM分期有關(guān)。

EGFR屬于Ⅰ型酪氨酸激酶受體家族，其自身磷酸化是激活下游一系列信號(hào)傳遞的關(guān)鍵，也是腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵，因此，若可抑制EGFR的功能，則可切斷下游的信號(hào)傳遞，從而達(dá)到遏制腫瘤繼續(xù)發(fā)展的目的。Wu SG等[9]通過(guò)檢測(cè)EGFR基因在NSCLC中的突變率，得出結(jié)論EGFR是治療NSCLC的主要靶點(diǎn)，EGFR酪氨酸激酶抑制劑可以作為亞洲人治療NSCLC的首選。目前，EGFR酪氨酸激酶抑制劑已有應(yīng)用于臨床的實(shí)例。李儉杰等[10]對(duì)54例晚期NSCLC患者一線給予口服EGFR-TKI治療，完全緩解的為0%，其中，部分緩解占90%，癥狀穩(wěn)定患者占6%，癥狀加重占4%，總體癥狀緩解率為90%，疾病控制率為96%。以上提示，以EGFR為治療靶點(diǎn)對(duì)非小細(xì)胞肺癌是可行的，并且，EGFR還可以作為一個(gè)可參考的肺癌預(yù)后檢測(cè)指標(biāo)。

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[10] 李儉杰，曲莉莉，衛(wèi)星，等.EGFR-TKI一線治療EGFR基因突變的晚期非小細(xì)胞肺癌臨床觀察[J].中國(guó)肺癌雜志，2012,15(5)：299-304.