摘要:為了解轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白羊奶與普通羊奶之間的差異,將兩種羊奶的主要成分及其物理性狀進(jìn)行了比較;同時(shí),參考中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品食用安全檢測(cè)——大鼠 90 天喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)》(NY/T 1102-2006)進(jìn)行轉(zhuǎn)基因羊奶食用安全評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,90天灌喂轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白羊奶的大鼠與普通羊奶灌喂組血常規(guī)值差異不顯著(P>0.05);灌喂轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白的羊奶中、高劑量組與自由采食對(duì)照組及普通羊奶中、高劑量灌喂組大鼠血清鐵含量及鐵蛋白含量差異顯著(P<0.05)。轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白羊奶與普通羊奶具有實(shí)質(zhì)等同性,轉(zhuǎn)基因成分沒(méi)有干擾機(jī)體對(duì)其它營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收,從營(yíng)養(yǎng)學(xué)角度來(lái)評(píng)價(jià),轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白羊奶是安全的。
關(guān)鍵詞:轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白羊奶;安全性評(píng)價(jià);血清鐵;鐵蛋白
中圖分類號(hào):S879.1;X954文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào):A文章編號(hào):1001-4942(2013)02-0023-05
轉(zhuǎn)基因植物以及轉(zhuǎn)基因植物為原料的提取物近年來(lái)逐漸進(jìn)入人類的食物鏈。自2010年美國(guó)生物科技公司AquaBounty研發(fā)出的生長(zhǎng)快、個(gè)頭大的轉(zhuǎn)基因“超級(jí)三文魚”,并獲得美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)安全證書[1],相信在不遠(yuǎn)的將來(lái)動(dòng)物轉(zhuǎn)基因食品也會(huì)進(jìn)入人們的餐桌,與此同時(shí),轉(zhuǎn)基因食品的安全性備受爭(zhēng)議。目前,國(guó)內(nèi)還沒(méi)有對(duì)轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行安全評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn),國(guó)際上有63個(gè)國(guó)家遵循1993年國(guó)際經(jīng)濟(jì)合作組織(OEDC)提出的實(shí)質(zhì)性等同原則對(duì)轉(zhuǎn)基因食品的安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。
乳鐵蛋白(Lactoferrin, LF)是一種相對(duì)分子量約為80ku的鐵結(jié)合性糖蛋白,主要存在于乳汁、唾液、精液、鼻腔分泌物等外分泌液或血漿中[2],乳鐵蛋白分子生物學(xué)結(jié)構(gòu)決定其具有結(jié)合鐵的能力,由此帶來(lái)了其它一些重要的生物學(xué)功能,如具有抑菌[3]、殺菌[4]、 抗病毒[5]、抗感染[6]和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能[7],直接或間接激活轉(zhuǎn)錄、誘導(dǎo)基因表達(dá)作用,對(duì)消化道腫瘤具有化學(xué)預(yù)防作用。泌乳初期人乳中的乳鐵蛋白含量明顯高于牛乳與羊乳,因此,動(dòng)物乳人源化,將提高動(dòng)物乳鐵蛋白含量,目前已經(jīng)獲得轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白的動(dòng)物種類很多,本實(shí)驗(yàn)即涉及到轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白基因羊奶。
筆者從兩個(gè)主要方面對(duì)轉(zhuǎn)基因羊奶與普通羊奶進(jìn)行分析,利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)轉(zhuǎn)基因羊奶與普通羊奶的主要生產(chǎn)性能指標(biāo)進(jìn)行比較,參考中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品食用安全檢測(cè)——大鼠 90 天喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)》(NY/T 1102 — 2006)進(jìn)行飼喂大鼠實(shí)驗(yàn)。
1材料與方法
1.1供試材料
含有轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白的鮮羊奶由上海杰隆生物制品有限公司贈(zèng)送,普通羊奶取自山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院奶羊場(chǎng),SD大鼠、基礎(chǔ)日糧購(gòu)自山東大學(xué)新藥評(píng)價(jià)中心。大鼠血清鐵試劑盒、大鼠鐵蛋白試劑盒購(gòu)自上海麥莎生物科技有限公司。
Integrated Milk Testing Fossomatic 5000全自動(dòng)體細(xì)胞測(cè)定儀,Integrated Milk Testing Milkoscan FT 6000 FOSS ELECTRIC 乳成分聯(lián)合測(cè)定儀(丹麥 FOSS公司);7020 型全自動(dòng)生化分析儀(日本日立公司);TaKaRa PCR Thermal Cycler (日本TaKaRa公司)。
1.2實(shí)驗(yàn)方法
1.2.1奶樣分析上海杰隆生物制品公司提供轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白奶山羊羊只泌乳2個(gè)月的樣品共計(jì)24份〔含量為(4.2±0.3) mg/ml〕,取普通泌乳2月的山羊羊奶,分別測(cè)定其乳脂率、乳蛋白率、乳糖、冰點(diǎn)、均質(zhì)度和總干物質(zhì),重復(fù)測(cè)定3次。
1.2.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組選取SD大鼠210只,體重約為120~160 g,將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為7組,每組30只,雌雄各半分籠飼養(yǎng)。同種性別的每籠3只,自由進(jìn)食、飲水,環(huán)境溫度21~25℃,空氣相對(duì)濕度40%~60%。
空白對(duì)照組(C組):飼喂基礎(chǔ)日糧,自由進(jìn)食、飲水。
普通羊奶灌喂組:根據(jù)灌喂的奶量分為 NL組(飼喂基礎(chǔ)日糧,自由進(jìn)食、飲水,灌喂普通羊奶0.5 ml);NM組(飼喂基礎(chǔ)日糧,自由進(jìn)食、飲水,灌喂普通羊奶1 ml);NH組(飼喂基礎(chǔ)日糧,自由進(jìn)食、飲水,灌喂普通羊奶3 ml)。
轉(zhuǎn)乳鐵蛋白羊奶灌喂組:根據(jù)灌喂的奶量分為TL組(飼喂基礎(chǔ)日糧,自由進(jìn)食、飲水,灌喂轉(zhuǎn)乳鐵蛋白羊奶0.5 ml);TM組(飼喂基礎(chǔ)日糧,自由進(jìn)食、飲水,灌喂 轉(zhuǎn)乳鐵蛋白羊奶1 ml);TH組(飼喂基礎(chǔ)日糧,自由進(jìn)食、飲水,灌喂轉(zhuǎn)乳鐵蛋白羊奶3 ml)。
1.2.3體重對(duì)各組大鼠進(jìn)行90天灌喂,分別測(cè)定各組大鼠的體重增加量,重復(fù)3次,記錄數(shù)據(jù)。
1.2.4大鼠血清鐵含量與鐵蛋白含量測(cè)定飼喂90天后,空腹禁水禁食12 h后,將大鼠固定在采血固定套中,用大鼠尾預(yù)熱器對(duì)尾部進(jìn)行預(yù)熱后進(jìn)行大鼠尾靜脈采血,然后用大鼠血清鐵試劑盒、大鼠鐵蛋白試劑盒進(jìn)行檢測(cè),方法參考試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行,重復(fù)3次。
1.2.5大鼠血常規(guī)測(cè)定飼喂90天后,空腹禁水禁食12 h后,肌肉注射復(fù)方氯胺酮(1.2 ml/kg)麻醉,采用BD一次性真空采血器(肝素),心臟采血2 ml送檢。委托濟(jì)南舜天醫(yī)院進(jìn)行血常規(guī)檢測(cè),用Coulter-JT 全自動(dòng)檢測(cè)儀(美國(guó)庫(kù)爾特儀器公司生產(chǎn)),庫(kù)爾特公司原配試劑,阻抗法檢測(cè),重復(fù)3次。
1.2.6統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)