[摘要]目的：比較血管基質(zhì)成分（stromal vascular fraction， SVF）與體外擴(kuò)增的脂肪來(lái)源干細(xì)胞（adipose-derived stem cells， ASCs）對(duì)移植脂肪成活的促進(jìn)作用。方法：用手術(shù)方法切取家兔腹股溝脂肪，進(jìn)行ASCs體外分離培養(yǎng)；取第3代ASCs分別進(jìn)行成脂、成骨誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)，CD29和CD31流式鑒定；制備SVF，進(jìn)行CD29和CD31流式鑒定；脂肪移植裸鼠實(shí)驗(yàn)分為3組：SVF、ASCs、和空白對(duì)照組（DMEM/F12），每組4只裸鼠，沿背部脊柱兩側(cè)對(duì)稱部位4個(gè)移植位點(diǎn)，每組共16個(gè)注射移植位點(diǎn)，每點(diǎn)0.3ml 脂肪顆粒（adipose granule， AG）+ 0.2ml細(xì)胞成分；術(shù)后4m時(shí)取材稱重、固定行HE染色觀察移植脂肪組織結(jié)構(gòu)，行CD31免疫組化染色觀察新生血管及其密度。結(jié)果：家兔ASCs體外分離培養(yǎng)成功，為貼壁生長(zhǎng)，第3代細(xì)胞形態(tài)均呈長(zhǎng)梭形。成脂誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)油紅O染色顯示形成脂滴，成骨誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)茜素紅染色顯示形成鈣化結(jié)節(jié)。流式鑒定顯示SVF：CD29：17.0%，CD31：1.3%；ASCs：CD29：96.2%，CD31：3.8%。SVF、ASCs和空白對(duì)照組各組移植脂肪成活量分別為0.2096±0.0024g，0.1798±0.0033g，0.1350±0.0020g，兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。HE染色顯示SVF組移植脂肪成活較好，組織結(jié)構(gòu)完整，脂滴大小均一，可見(jiàn)脂肪組織中間有豐富的血管存在；ASCs組移植脂肪成活尚可，組織結(jié)構(gòu)尚完整，脂滴大小一般均一，可見(jiàn)脂肪組織中有結(jié)締組織纖維間隔和新生血管形成；空白對(duì)照組結(jié)締組織纖維間隔明顯增多，脂滴大小不一，有少量較大空泡形成。各組移植脂肪新生血管密度分別32.6±2.1條/mm2，29.3±1.6條/mm2，23.3±1.9條/mm2，兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。結(jié)論：新鮮的干細(xì)胞成分SVF比體外擴(kuò)增的ASCs能更好的促進(jìn)移植脂肪成活。

[關(guān)鍵詞]脂肪移植；基質(zhì)血管成分；脂肪來(lái)源干細(xì)胞；血管新生

[中圖分類號(hào)]R622 Q813.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1008-6455（2013）01-0035-05

Comparison between the effect of stromal vascular fraction and expanded adipose-derived stem cells on fat graft survival

ZHAO Jian-hui1， YI Cheng-gang1， QIU Xuan2， LI Long 3， LIANG Li-hua4， XIA Wei1， SU Ying-jun1， GUO Shu-zhong1

（1.Institute of Plastic Surgery， Xijing Hospital， Fourth Military Medical University， Xi'an 710032， Shaanxi， China；

2. Ultrasonic Diagnosis Department， Navy General Hospital， Beijing 100048， China； 3. Department of Oral and Maxillofacial Surgery， Guanghua School and Research Institute of Stomatology， Sun Yat-Sen University， Guangzhou 510055， China；4. Department of Stomatology， Affiliated Hospital of Guilin Medical University， Guilin 541001， Guangxi， China）

Abstract： Objective To compare the effect of stromal vascular fraction （SVF） and adipose-derived stem cells （ASCs） on fat graft survival. Methods ASCs were derived from subcutaneous fat tissue of rabbit dorsa and isolated， cultured ex vivo. The third passage of ASCs were conducted on the induction to fat and bone， and flow cytometry of CD29 and CD31. After SVF had been prepared， it was performed flow cytometry of CD29 and CD31 too. There were 3 groups in nude mice experiment of fat transplantation： SVF， ASCs， and DMEM/F12 as a blank control. There were 16 injection points on the paravertebral dorsa of 4 nude mice in each group. The transplanted mixture consisted of 0.3ml adipose granule （AG） and 0.2ml cell components. 4 months after the transplantation， the mice were euthanized and the fat grafts were dissected out， weighed， and analyzed by HE staining and immunohistochemistry staining of CD31. Results ASCs were successfully isolated and cultured ex vivo， and the third passage of them were fibroblast-like adherent cells. ASCs can be induced to lipid droplets and mineralization nodes. Flow cytometry indicated that： SVF： CD29： 17.0%， CD31： 1.3%； ASCs： CD29： 96.2%， CD31： 3.8%. The survival of the fat grafts in each group of SVF， ASCs and blank control group were 0.2096±0.0024g， 0.1798±0.0033g， 0.1350±0.0020g， there existing statistical significance between multiple comparisons. HE staining showed that the fat graft in group of SVF exhibited good survival， integrity， uniform lipid droplet and rich blood vessels； fat graft in group of ASCs exhibited survival， less integrity， less uniform lipid droplets and connective tissue septa； the blank control group exhibited some large bubbles， all sizes lipid droplets， and significant fibrous septa. In each group the vascular density was 32.6±2.1 capillaries/mm2， 29.3±1.6 capillaries/mm2， 23.3±1.9 capillaries/mm2， there existing statistical significance between multiple comparison. Conclusions Fresh stem cell components SVF are more helpful than ASCs expanded ex vivo for fat graft survival.

Key words： fat transplantation； stromal vascular fraction； adipose-derived stem cells； neovascularization

目前，脂肪移植是整形外科最受矚目的研究領(lǐng)域之一。如何提高移植脂肪組織的成活率及成活質(zhì)量，是目前國(guó)內(nèi)外脂肪移植研究的關(guān)鍵性問(wèn)題。文獻(xiàn)中報(bào)道移植脂肪的吸收率為20%～90%[1]，目前認(rèn)為移植組織早期快速血管化能促進(jìn)移植脂肪成活，提高脂肪成活率。自從2001年ZuK等[2]研究發(fā)現(xiàn)脂肪來(lái)源干細(xì)胞（adipose-derived stem cells， ASCs）以來(lái)，ASCs 被廣泛的應(yīng)用于自體脂肪移植、創(chuàng)面愈合、血管新生、免疫調(diào)節(jié)等領(lǐng)域的研究[3]。2003年，Kotaro等[4-8]開(kāi)始采用細(xì)胞輔助脂肪移植術(shù)（cell-assisted lipotransfer， CAL），將自體脂肪中新鮮分離的基質(zhì)血管成分（stromal vascular fraction， SVF）與移植脂肪混合，提高了移植脂肪中ASCs/脂肪細(xì)胞比例，取得了不錯(cuò)的臨床效果，移植物成活率大為40%～80%。魯峰等[9-10]證實(shí)ASCs治療能都促進(jìn)了移植游離脂肪的成活。本實(shí)驗(yàn)旨在比較新鮮的干細(xì)胞成分SVF與體外擴(kuò)增的ASCs對(duì)移植脂肪成活的促進(jìn)作用有無(wú)差異。

1 材料和方法

1.1 主要試劑與儀器：DMEM/F12培養(yǎng)基（Hyclone），I型膠原酶（Sigma），胎牛血清（Gibco），二甲基亞砜（Sigma），地塞米松（Sigma），吲哚美辛（Sigma），胰島素（Sigma），異丁基甲基黃嘌呤（IBMX）（Sigma），油紅O（Sigma），β-甘油磷酸鈉（Sigma），曙紅Y（Sigma），左旋抗壞血酸（科昊生物），胰蛋白酶消化液（不含EDTA）（碧云天），青-鏈霉素（碧云天），蘇木精（上海藍(lán)季科技），茜素紅（天津科密歐），大鼠抗CD31抗體（Dako），MaxVisionTM2/HRP二抗（Dako）。細(xì)胞培養(yǎng)孵箱（Thermo），超凈工作臺(tái)（江蘇蘇凈SW-CJ-1FB），倒置顯微鏡（Nikon），酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀（TECAN），流式細(xì)胞儀（BD FACSAriaT），空氣恒溫?fù)u床（上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備KYS-100C）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組：兔脂肪和ASCs均來(lái)源于6月齡家兔，5只，雌雄不限，體重3～4kg，清潔級(jí)，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)SCXK-（軍）2007-007。裸鼠12只，雄性，6～8周，體重17～20g，SPF級(jí)，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（滬）2007-0005，飼養(yǎng)于第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，本實(shí)驗(yàn)在第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心完成。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物處置符合中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)部2006年頒布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)》標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)分組：A組：家兔脂肪（0.3ml）+ ASCs（0.2ml，約有5×106個(gè)細(xì)胞）；B組：家兔脂肪（0.3ml）+ SVF（0.2ml）；C組：家兔脂肪（0.3ml）+ DMEM/F12（0.2ml）。

1.3 ASCs體外分離培養(yǎng) 詳見(jiàn)參考文獻(xiàn)[11]。

1.4 ASCs成脂成骨誘導(dǎo)分化 詳見(jiàn)參考文獻(xiàn)[11]。

1.5 SVF制備：待ASCs已經(jīng)大量擴(kuò)增到第3代時(shí)，即可開(kāi)始制備SVF，準(zhǔn)備行裸鼠脂肪移植手術(shù)。手術(shù)切取家兔脂肪方法同前，脂肪量如不夠可加取腹股溝脂肪。切取脂肪后快速轉(zhuǎn)移至細(xì)胞培養(yǎng)室的超凈臺(tái)中，洗滌，剔除筋膜和血管，脂肪塊被剪碎至吸管可吸取，制備成脂肪顆粒（adipose granule， AG），取適量AG進(jìn)行Ⅰ型膠原酶消化，方法同前。

1.6 SVF與ASCs流式鑒定：各取適量SVF與ASCs（常規(guī)消化離心），二者均用PBS重懸，按照每管1個(gè)抗體測(cè)試至少需要1×106/cell的要求，分裝到離心管中，送至第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫教研室，進(jìn)行CD29，CD31流式鑒定。

1.7 裸鼠脂肪移植：移植時(shí)，SVF與ASCs來(lái)源于同一只家兔。裸鼠用1%戊巴比妥鈉麻醉，按照分組要求，將0.2ml SVF或ASCs與0.3ml AG混合，空白對(duì)照組為0.2ml DMEM/F12培養(yǎng)液與0.3ml AG混合，用2ml注射器吸取，換上16號(hào)針頭，注射移植到裸鼠背部脊柱兩側(cè)對(duì)稱的四個(gè)移植位點(diǎn)，注射口用6-0尼龍線縫合1～2針，避免移植脂肪從注射口流出，放回籠中單籠飼養(yǎng)。

1.8 觀察指標(biāo)與方法

1.8.1 大體觀察：四月后處死裸鼠，移植脂肪取材，稱重。

1.8.2 HE染色：移植脂肪標(biāo)本固定，脫水，浸蠟，包埋制作成蠟塊，切片（厚度5μm），攤片，烤片，脫蠟，蘇木精染色、稀鹽酸酒精分化、伊紅染色、梯度酒精脫水透明、封片、鏡檢，進(jìn)行組織學(xué)觀察。評(píng)價(jià)方法參考Yi等報(bào)道的方法[12]：包含4個(gè)評(píng)價(jià)參數(shù)，包括脂肪組織囊性變、纖維化、有核脂肪細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性、炎癥（指淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)）；每個(gè)參數(shù)分為0-5六個(gè)等級(jí)：0=無(wú)；1=少量；2=比中量少；3=中量；4=比中量多；5=大量。所有組織學(xué)評(píng)價(jià)均由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的兩位實(shí)驗(yàn)人員完成。

1.8.3 CD31免疫組化染色：移植脂肪標(biāo)本，行石蠟切片，脫蠟，水化，自來(lái)水沖洗；檸檬酸鈉溶液10min，高壓抗原修復(fù)；3%雙氧水室溫10min，PBS沖洗3遍各3min；除去PBS，加入1：50 PBS稀釋的大鼠抗CD31抗體室溫下孵育60min，PBS沖洗3遍各3min；除去PBS，加入1：50 MaxVisionTM2/HRP二抗，室溫下孵育15min，PBS沖洗3遍各3min；除去PBS，切片上滴加新鮮配制的加強(qiáng)型DAB顯色試劑顯色；自來(lái)水沖洗終止顯色，蘇木精復(fù)染，PBS返藍(lán)，經(jīng)梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固，鏡檢。在200倍光鏡下隨機(jī)計(jì)算每張切片20個(gè)視野中血管斷面數(shù)目，計(jì)算血管斷面密度[13]。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：計(jì)量資料結(jié)果均表示為x±s，等級(jí)資料用頻數(shù)描述，所有數(shù)據(jù)都使用PASW Statistics 18.0軟件分析。各組移植脂肪成活量之間的兩兩比較的方法為SNK-q檢驗(yàn)，各組間HE染色組織學(xué)評(píng)價(jià)用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，P<0.05為兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ASCs體外分離培養(yǎng)：ASCs原代第一次換液即可見(jiàn)部分貼壁細(xì)胞，形態(tài)呈短梭形，未貼壁細(xì)胞形態(tài)略呈不規(guī)則圓形，換液即去掉部分未貼壁細(xì)胞。第3代細(xì)胞形態(tài)比較規(guī)則，呈長(zhǎng)梭形，低倍鏡下觀察均呈旋渦狀生長(zhǎng)，見(jiàn)圖1。

2.2 成脂成骨誘導(dǎo)分化：交替使用成脂誘導(dǎo)和成脂維持培養(yǎng)液后1周左右，ASCs周圍即可出現(xiàn)散在的脂滴，逐漸增多增大，鏡下可見(jiàn)細(xì)胞核周圍出現(xiàn)透亮的圓形物質(zhì)，油紅O染色可見(jiàn)染為紅色，對(duì)照組未見(jiàn)脂滴出現(xiàn)，見(jiàn)圖2。成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)后3周左右時(shí)行茜素紅染色，ASCs可見(jiàn)大小不一的紅色鈣化結(jié)節(jié)，不同視野鈣化結(jié)節(jié)數(shù)量明顯多于rASCs，對(duì)照組未見(jiàn)細(xì)胞周圍鈣鹽沉積，見(jiàn)圖3。

2.3 SVF與ASCs流式分析：SVF與ASCs的流式分析結(jié)果見(jiàn)圖4：SVF：CD29：17.0%，CD31：1.3%；ASCs：CD29：96.2%，CD31：3.8%。

2.4 移植脂肪成活量：脂肪移植后4月時(shí)裸鼠都存活，處死取材稱重，各組移植脂肪成活量見(jiàn)圖5，SVF、ASCs和空白對(duì)照組各組移植脂肪成活量分別為0.2096±0.0024g，0.1798±0.0033g，0.1350±0.0020g，組間兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05，移植脂肪成活量SVF組>ASCs組>DMEM/F12組。

2.5 組織學(xué)觀察：4月時(shí)各組移植脂肪HE染色結(jié)果可見(jiàn)圖6：SVF組移植脂肪成活較好，組織結(jié)構(gòu)完整，脂滴大小均一，可見(jiàn)脂肪組織中間有豐富的血管存在；ASCs組移植脂肪成活尚可，組織結(jié)構(gòu)尚完整，脂滴大小一般均一，可見(jiàn)脂肪組織中有結(jié)締組織纖維間隔和新生血管形成；空白對(duì)照DMEM/F12組結(jié)締組織纖維間隔明顯增多，脂滴大小不一，有少量較大空泡形成。對(duì)4月時(shí)的移植脂肪組織HE染色結(jié)果進(jìn)行組織學(xué)評(píng)價(jià)，各組之間囊性變、纖維化、完整性、炎癥之間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。

2.6 CD31免疫組化染色：CD31免疫組化染色顯示移植脂肪中有新生血管形成，見(jiàn)圖7，SVF、ASCs和空白對(duì)照組各組移植的脂肪血管密度分別為32.6±2.1條/mm2，29.3±1.6條/mm2， 23.3±1.9條/mm2，兩兩之間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。

3 討論

20世紀(jì)80年代，吸脂術(shù)的發(fā)明帶來(lái)了顆粒脂肪移植技術(shù)，使移植脂肪的成活率有一定程度上的提高。Illouz[14]認(rèn)為抽脂術(shù)后的脂肪不是一塊完整的組織，而是已經(jīng)分離的細(xì)胞，注射移植到體內(nèi)后，能夠依靠機(jī)體周圍組織的滲透和血管新生提供營(yíng)養(yǎng)而成活。自體顆粒脂肪移植在臨床有著廣泛的應(yīng)用前景，盡管有大量的基礎(chǔ)與臨床研究，但是脂肪移植后吸收率依舊很高，報(bào)道效果不一，而且并發(fā)癥較多[15]。促進(jìn)移植脂肪成活的關(guān)鍵是移植后盡快建立血運(yùn)[9，12，16，17]，近些年的研究熱點(diǎn)，主要集中在利用干細(xì)胞治療促進(jìn)移植脂肪成活上[4-8]，利用吸脂的脂肪經(jīng)I型膠原酶消化后獲取的ASCs來(lái)促進(jìn)移植脂肪的成活，Kotaro等[7]認(rèn)為ASCs不僅能分化為脂肪細(xì)胞，血管內(nèi)皮細(xì)胞，也可能分化為血管平滑肌細(xì)胞和周細(xì)胞等，而且能分泌促血管新生的生長(zhǎng)因子，故有助于移植脂肪早期血管新生，促進(jìn)移植脂肪成活、再生和更新。

本實(shí)驗(yàn)擬比較SVF與ASCs對(duì)移植脂肪成活的促進(jìn)作用，尋找更有效的促進(jìn)脂肪成活的方法。ASCs為體外擴(kuò)增至第3代的間充質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)過(guò)貼壁篩選純化和流式鑒定；SVF為脂肪經(jīng)Ⅰ型膠原酶消化后的富含新鮮ASCs的混合成分。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：體外分離培養(yǎng)的ASCs為貼壁生長(zhǎng)，呈梭形，旋渦狀生長(zhǎng)；具有成脂、成骨誘導(dǎo)能力；流式鑒定證實(shí)其CD29+，CD31-，以上結(jié)果證實(shí)其干細(xì)胞特性。SVF為混合細(xì)胞成分，CD29陽(yáng)性率都有所下降，CD31表達(dá)則均較少。體外脂肪移植實(shí)驗(yàn)顯示：移植脂肪成活量SVF組>ASCs組>DMEM/F12組；HE染色顯示SVF組移植脂肪成活較好，ASCs組移植脂肪成活尚可，空白對(duì)照DMEM/F12組成活較差；各組新生血管密度為SVF組>ASCs組>DMEM/F12組。

SVF是指脂肪組織消化離心去掉上層組織和油后，沉淀在底層的細(xì)胞成分，包括ASCs、血管內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、周細(xì)胞以及大量血液循環(huán)來(lái)源的細(xì)胞，比如白細(xì)胞、紅細(xì)胞等。Suga[18]等發(fā)現(xiàn)從抽脂術(shù)后獲得的SVF中ASCs（CD31﹣CD34﹢CD45﹣）占到35%，其他有核細(xì)胞包括白細(xì)胞（CD45﹢）占37%，內(nèi)皮細(xì)胞（CD31﹢CD34﹢CD45﹣）占15%，還有其他細(xì)胞（CD31﹣CD34﹣CD45﹣）。SVF 是CAL中最重要的成分，Kotaro等[4-8]證實(shí)SVF對(duì)移植脂肪成活的促進(jìn)作用，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)新鮮的干細(xì)胞成分SVF比體外擴(kuò)增的ASCs能更好的促進(jìn)移植脂肪成活，SVF安全、簡(jiǎn)便且可操作性強(qiáng)。體外擴(kuò)增的ASCs增殖和分化能力不一致，同時(shí)其具有免疫抑制效果，以及潛在的促進(jìn)腫瘤形成作用等等，都可能影響其臨床應(yīng)用[19]。關(guān)于干細(xì)胞治療在自體脂肪移植中應(yīng)用，Eaves等[20]持謹(jǐn)慎態(tài)度，認(rèn)為盡管干細(xì)胞在自體脂肪移植中有潛在益處，但是必須經(jīng)過(guò)大量進(jìn)一步的研究和臨床試驗(yàn)證實(shí)才能下結(jié)論，并鼓勵(lì)開(kāi)展進(jìn)一步的機(jī)制研究。自體脂肪移植的前景是光明的，相信不久的將來(lái)，將會(huì)解決移植脂肪成活率低的問(wèn)題，使其更廣泛的應(yīng)用于臨床。

（致謝：本課題要衷心感謝第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心全體工作人員、第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院整形外科劉蓓、余州、宋雅娟技師以及西京醫(yī)院病理科王映梅老師的大力支持和幫助。）

[參考文獻(xiàn)]

[1]Cherubino M， Marra KG. Adipose-derived stem cells for soft tissue reconstruction [J]. Regen Med， 2009， 4（1）： 109-117.

[2]Zuk PA， Zhu M， Mizuno H， et al. Multilineage cells from human adipose tissue： implications for cell-based therapies[J]. Tissue Eng， 2001， 7（2）： 211-228.

[3]趙建輝， 易成剛， 郭樹(shù)忠. 脂肪來(lái)源干細(xì)胞的基礎(chǔ)研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)美容醫(yī)學(xué)， 2011， 20（3）： 512-515.

[4]Yoshimura K， Shigeura T， Matsumoto D， et al. Characterization of freshly isolated and cultured cells derived from the fatty and fluid portions of liposuction aspirates[J]. J Cell Physiol， 2006， 208（1）： 64-76.

[5]Yoshimura K， Sato K， Aoi N， et al. Cell-assisted lipotransfer for cosmetic breast augmentation： supportive use of adipose-derived stem/stromal cells[J]. Aesthetic Plast Surg， 2008， 32（1）： 48-55.

[6]Yoshimura K， Sato K， Aoi N， et al. Cell-assisted lipotransfer for facial lipoatrophy： efficacy of clinical use of adipose-derived stem cells[J]. Dermatol Surg， 2008， 34（9）： 1178-1185.

[7]Yoshimura K， Suga H， Eto H. Adipose-derived stem/progenitor cells： roles in adipose tissue remodeling and potential use for soft tissue augmentation [J]. Regen Med， 2009， 4（2）： 265-273.

[8]Yoshimura K， Asano Y， Aoi N， et al. Progenitor-enriched adipose tissue transplantation as rescue for breast implant complications [J]. Breast J， 2010， 16（2）： 169-175.

[9]Lu F， Li J， Gao J， et al. Improvement of the survival of human autologous fat transplantation by using VEGF-transfected adipose-derived stem cells[J]. Plast Reconstr Surg， 2009， 124（5）： 1437-1446.

[10]李劼， 高建華， 魯峰， 等. 脂肪組織來(lái)源干細(xì)胞提高游離脂肪移植存活率的研究[J]. 中華整形外科雜志， 2009， 25（2）： 129-133.

[11]趙建輝， 李龍， 楊陽(yáng)， 等. 人脂肪干細(xì)胞的體外培養(yǎng)鑒定及分化特性[J]. 中國(guó)美容醫(yī)學(xué)， 2011， 20（8）： 1232-1237.

[12]Yi CG， Xia W， Zhang LX， et al. VEGF gene therapy for the survival of transplanted fat tissue in nude mice[J]. J Plast Reconstr Aesthet Surg， 2007， 60（3）： 272-278.

[13]Kubota Y， Kishi K， Satoh H， et al. Transplanted endothelial progenitor cells augment the survival areas of rat dorsal flaps[J]. Cell Transplant， 2003， 12（6）： 647-657.

[14]Illouz YG. Body contouring by lipolysis： a 5-year experience with over 3000 cases[J]. Plast Reconstr Surg， 1983， 72（5）： 591-597.

[15]Brayfield C， Marra K， Rubin JP. Adipose stem cells for soft tissue regeneration[J]. Handchir Mikrochir Plast Chir， 2010， 42（2）： 124-128.

[16]Pu LL. Discussion： Improvement of the survival of human autologous fat transplantation by using VEGF-transfected adipose-derived stem cells[J]. Plast Reconstr Surg， 2009， 124（5）： 1447-1449.

[17]Yi C， Pan Y， Zhen Y， et al. Enhancement of viability of fat grafts in nude mice by endothelial progenitor cells[J]. Dermatol Surg， 2006， 32（12）： 1437-1443.

[18]Suga H， Matsumoto D， Inoue K，et al. Numerical measurement of viable and nonviable adipocytes and other cellular components in aspirated fat tissue[J]. Plast Reconstr Surg， 2008， 122（1）： 103-114.

[19]Tholpady SS， Ogle RC， Katz AJ. Adipose stem cells and solid organ transplantation[J]. Curr Opin Organ Transplant， 2009， 14（1）： 51-55.

[20]Eaves FF 3rd， Haeck PC， Rohrich RJ. ASAPS/ASPS Position statement on stem cells and fat grafting[J]. Plast Reconstr Surg， 2012， 129（1）： 285-287.