[摘要]目的：研究微波療法對基底細胞癌患者的細胞免疫功能的影響。方法：用流式細胞儀檢測32例基底細胞癌患者微波治療前后外周血T細胞亞群及NK細胞。結果：基底細胞癌患者CD3、CD4細胞下降，CD8細胞增高，NK細胞降低，與對照組相比差異均有顯著性；微波治療后基底細胞癌患者CD4細胞上升，CD8細胞降低，NK細胞增多，與治療前相比差異均有顯著性。結論：基底細胞癌患者存在細胞免疫功能缺陷；微波療法能提高基底細胞癌患者的細胞免疫功能。

[關鍵詞]基底細胞癌；T淋巴細胞亞群；NK細胞；流式細胞儀；微波治療

[中圖分類號]Q813.1 [文獻標識碼]A [文章編號]1008-6455（2013）01-0075-02

Detection of the influence of T-cell subpopulation and Natural killer cells activity of microwave treatment for patients with basal cell carcinoma by flow cytometry

ZHANG Yuan，ZHONG Yi-ping，SUN Le-dong

（Department of Dermatology，Zhujiang Hospital，Southern Medical University，Guangzhou 510515，Guangdong，China）

Abstract： Objective To study the influence of the cellular immune function on The microwave therapy for patients with basal cell carcinoma（BCC）. Methods T-cell subpopulation and percentage of NK cells in peripheral blood of 32 cases with BCC were tested by flow cytometry before and after microwave therapy. Results The percentage of CD3 cells，CD4 cells and NK cells decreased and that of CD8 cells increased in BCC patients，with significant difference from those of controls. After microwave therapy，the percentage of CD4 cells and NK cells in patients with BCC were higher than that of before treatment，the percentage of CD8 cells were lower than that of before treatment. Conclusion BCC patients exist cellular immune function defect，Microwave therapy can enhance the immune function of the BCCpatients.

Key words：basal cell carcinoma；T-cell subpopulation；natural killer cells；flow cytometry；microwave therapy

基底細胞癌（basal cell carcinoma， BCC）是最常見的皮膚癌之一，以往多采用手術、放療、化療及免疫治療等傳統(tǒng)治療方法，雖然這些方法效果尚可，但在美容和副作用方面存在一定的局限性。微波治療BCC效果滿意，復發(fā)率低，副作用少[1]，但其治療機制尚未完全明了。惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉歸與機體的免疫功能密切相關，我們以前的研究證實BCC患者存在細胞免疫功能受損，并與BCC的發(fā)生、發(fā)展和轉歸有關，提示可從提高機體的免疫功能來尋找有效的治療方法[2]。為了進一步了解微波治療BCC癌的機制，我們應用流式細胞儀技術檢測了32例BCC患者微波治療前后的T細胞亞群及NK細胞，現報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料：32例患者均經組織病理學檢查證實為基底細胞癌并接受微波治療，其中男20例，女12例，平均年齡56.8歲（15～68歲），平均病程3.7年（2個月～18年），但具有下列情況之一者不列入研究范圍：①伴有自身免疫性疾病、過敏性疾病、嚴重的系統(tǒng)性疾病、病毒感染性疾病者；②1年內用過免疫增強劑或免疫抑制劑者。微波的具體治療方法為先將局部清潔、消毒，予2%利多卡因局部麻醉后，選用雙極觸頭對準癌組織進行多點熱化凝固，然后清除已凝固的壞死組織，反復多次對癌組織進行熱化凝固，直到暴露出基底正常組織。治療范圍超出癌灶邊緣5 mm。對范圍特別大的基底細胞癌，可分次治療。經過上述方法治療后，接著按下微波機的熱療檔，選用直徑為7 cm的圓形發(fā)熱器對準創(chuàng)面進行照射，輸出功率為40～50W，發(fā)熱器距創(chuàng)面10～15 cm，以患者有溫熱感為度。照射時注意充分暴露創(chuàng)面，照射完畢局部外涂復方紅汞溶液。每日1次，每次20min，1個療程為7～10天[1]。對照組32例，均為我院健康體檢者，其中男19例，女13例，平均年齡57.3歲（16～69歲）。兩組年齡和性別方面無統(tǒng)計學差異。

1.2 方法：用流式細胞儀技術檢測32例BCC患者微波治療前、療程結束后及32例健康對照組外周血T細胞亞群及NK細胞百分率。具體方法為：2只試管中各加入100μl EDTA抗凝靜脈血，再分別加入20μl的雙標單克隆抗體CD3/CD16+56和CD4/CD8，室溫避光副孵育20min后，加500μl紅細胞溶解液溶解紅細胞15min，1 000r/min 離心5 min，棄上清，用PBS緩沖液沖洗2次，再以0.5ml PBS緩沖液懸浮細胞，流式細胞儀分析5 000個細胞（雙標記單克隆抗體CD3/CD16+56，CD4/CD8及紅細胞溶解均購自法國國際免疫公司）。

1.3 統(tǒng)計學方法：使用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學處理，采用配對t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

32例BCC患者與對照組比較，CD3、CD4細胞百分率、CD4/CD8的比值和NK細胞的百分率均明顯降低，CD8細胞百分率明顯增高，差異均有顯著性（P<0.01），見表1。微波治療后BCC患者與治療前比較，CD4細胞百分率、CD4/CD8的比值和NK細胞的百分率均明顯上升，CD8細胞百分率明顯下降，差異均有顯著性（P<0.01），而CD3細胞的百分率治療前后比較差異無顯著性（P>0.05）。

3討論

檢測外周血T淋巴細胞亞群及其比值是反映機體細胞免疫狀態(tài)的重要參數之一[3]。我們應用流式細胞儀檢測了BCC患者的外周血T淋巴細胞亞群，并與健康正常對照組比較，發(fā)現BCC患者CD3、CD4、CD4/CD8值及NK細胞百分率明顯低于對照組，而CD8卻明顯高于對照組，差異均有顯著性。BCC患者CD3、CD4細胞降低和CD8細胞的增高，再次證實BCC患者細胞免疫功能有明顯下降，且以免疫抑制現象和自身免疫監(jiān)視能力下降為突出，與我們以前的研究結果相符[2]，其與BCC的發(fā)生、發(fā)展和轉歸有關。

微波治療BCC時，在微波能量較高時，可使蛋白質變性、凝固、壞死，從而達到去除病灶的目的，且其能有效地解決創(chuàng)面出血的問題，便于在治療過程中觀察病變組織是否清除“干凈”[3]。此外，熱療能加快局部血液循環(huán)及代謝，提高局部免疫力，有利于傷口愈合。值得我們關注的是微波治療后BCC患者的CD4細胞百分率、CD4/CD8的比值和NK細胞的百分率均明顯上升，CD8細胞百分率明顯下降。提示微波治療BCC除了物理治療作用外，還有可能是通過提高機體的免疫功能途徑來實現治療效果。與以往采取的手術、放療、化療及免疫治療等傳統(tǒng)治療方法相比，微波療法具有經濟、方便、安全、可靠、美觀及促進創(chuàng)面恢復和增強患者細胞免疫功能等優(yōu)點，值得臨床推廣應用[1，3]。

[參考文獻]

[1]孫樂棟，江麗芬，刁友濤，等.微波治療基底細胞癌療效觀察[J].臨床皮膚科雜志，2004，33（7）：446.

[2]孫樂棟，曾抗，刁友濤，等.流式細胞儀檢測基底細胞癌的T細胞亞群[J] .中國美容醫(yī)學，2005，14（1）：7-8.

[3]朱慧蘭，陳榮章，武明昌，等.梅毒患者外周血T淋巴細胞亞群的檢測及臨床意義[J].中國麻風皮膚病雜志，2000，16（3）：156-158.