摘 要： 通過(guò)室內(nèi)苗期枯萎病人工接種鑒定，對(duì)62份來(lái)源于籽用西瓜、黏籽西瓜及普通西瓜雜交后代自交純系進(jìn)行枯萎病抗性鑒定，顯示出不同自交系之間抗病性的差異，供試材料中鑒定出19份中抗、42份輕抗和1份感病材料，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)免疫和高抗材料。

關(guān)鍵詞： 黏籽西瓜； 籽用西瓜； 種質(zhì)資源； 枯萎??； 抗性鑒定

籽用西瓜（Citrullus lanatus sp. vulgaris var. megalaspermus Lin et Chao），俗稱(chēng)“籽瓜”、“打瓜”，是葫蘆科西瓜屬中普通西瓜亞種的一個(gè)籽用變種，分紅籽瓜和黑籽瓜兩個(gè)不同種皮顏色的品系。原產(chǎn)我國(guó)甘肅省，由于其籽大味美，是人們度假旅游中備受歡迎的休閑食品，也是西北邊遠(yuǎn)地區(qū)主要的經(jīng)濟(jì)作物之一，其中新疆、甘肅、內(nèi)蒙古、寧夏、青海五省區(qū)為主產(chǎn)區(qū)，其面積、產(chǎn)量分別占全國(guó)的80%和90%[1-2]。黏籽西瓜（Citrullus lanatus sp. mucosospermus var. mucosospermus Fursa）原產(chǎn)于非洲的尼日利亞、加納等國(guó)。屬于西瓜屬中黏籽西瓜亞種的黏籽西瓜（var. mucosospermus Fursa）變種。是當(dāng)?shù)氐囊吧桶朐耘嘀参?，種皮極薄種子較大且富含脂肪和蛋白質(zhì)，是當(dāng)?shù)氐?種食物來(lái)源[3]。果實(shí)未充分成熟時(shí)種皮上附有黏囊組織，因此得名。其植株綜合抗逆、抗病性較好，可作為改良籽用西瓜的重要種質(zhì)材料。

選育和種植抗枯萎病品種是解決籽瓜枯萎病危害的一項(xiàng)重要措施，但國(guó)內(nèi)籽瓜資源遺傳背景較狹窄，抗枯萎病資源材料缺乏已成為籽瓜抗枯萎病育種工作進(jìn)展的瓶頸。為進(jìn)一步了解這些種質(zhì)資源抗病性以及其抗病性差異，筆者對(duì)國(guó)家瓜類(lèi)工程技術(shù)研究中心近幾年培育的西瓜、籽用西瓜和黏籽西瓜雜交后代自交純系進(jìn)行了抗枯萎病鑒定，以篩選出較好的抗病種質(zhì)，為籽瓜抗病育種提供遺傳材料。

1 材料和方法

1.1 材料

62份供試材料分別為普通西瓜、籽用西瓜自交純系及國(guó)外引進(jìn)的黏籽西瓜雜交后代自交純系。供試籽瓜枯萎病菌，編號(hào)為0906。采用國(guó)際通用的枯萎病鑒別寄主Suger Baby、 PI 296341、Calhoun Gray、Charlestan Gray作對(duì)照。試驗(yàn)材料均由國(guó)家瓜類(lèi)工程技術(shù)研究中心提供（表1）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 枯萎病菌孢子懸液的制備 枯萎病菌的轉(zhuǎn)接擴(kuò)繁過(guò)程需要PDA（potato dextrose agar）培養(yǎng)基。配好后采用三角瓶分裝，封口高壓滅菌。滅菌結(jié)束后，在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行接種。將接種好的培養(yǎng)皿放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，溫度設(shè)定為28 ℃，培養(yǎng)7 d。待固體培養(yǎng)基上長(zhǎng)出枯萎病菌絲和孢子后（彩插23圖版-A），在超凈工作臺(tái)上用解剖刀將PDA培養(yǎng)基上的枯萎病菌切成小塊轉(zhuǎn)接到液體培養(yǎng)基中，放置在28 ℃ 的條件下，并保持120 r·min-1的搖床上震蕩培養(yǎng)。7 d后，用4～8層消毒紗布將培養(yǎng)菌液過(guò)濾掉菌絲，在顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)板統(tǒng)計(jì)菌液中的孢子數(shù)，加無(wú)菌水配制成1×106·mL-1的接種孢子液。

1.2.2 試驗(yàn)材料準(zhǔn)備 育苗基質(zhì)采用楊樹(shù)鋸末和蛭石5 ∶ 1的比例配制，將鋸末用100 ℃ 的開(kāi)水高溫消毒，殺死鋸末中可能存在的蟲(chóng)卵和有害生物。然后將基質(zhì)混合均勻，裝入規(guī)格為5×10個(gè)穴的育苗盤(pán)中。播種前將基質(zhì)澆透水，每個(gè)穴播2～3粒種子，每個(gè)材料播5個(gè)穴，3次重復(fù)，并設(shè)對(duì)照品種。播種后育苗盤(pán)上蓋塑料薄膜，保持充分的濕度，放在遮陰棚下。每天澆水保持基質(zhì)的適度濕度，出苗后去膜正常管理。為了保持苗正常生長(zhǎng)，配制了完全營(yíng)養(yǎng)液，進(jìn)行葉面噴施以增加苗生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)。

1.2.3 接種方法 采用浸根接種法接種枯萎菌，在子葉平展、第1片真葉長(zhǎng)出時(shí)，將籽瓜幼苗從育苗盤(pán)中拔出用清水清洗根部，然后用剪刀傷根，并將其放入孢子懸液中浸泡10 min后移栽到育苗盤(pán)中。每個(gè)穴2株，每個(gè)材料30株。隔1 d澆1次營(yíng)養(yǎng)液，保持基質(zhì)適度的濕度和營(yíng)養(yǎng)，供幼苗生長(zhǎng)所需。

1.2.4 抗病性調(diào)查級(jí)別劃分和統(tǒng)計(jì) 待苗子發(fā)病后進(jìn)行病情調(diào)查統(tǒng)計(jì)，每隔5 d調(diào)查1次，共調(diào)查3次。調(diào)查時(shí)將每個(gè)材料10株為1次重復(fù)統(tǒng)計(jì)的對(duì)象。病情級(jí)別劃分參照Elmstron和Hopkins[4]的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)（表2），枯萎病抗感分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表3。

根據(jù)調(diào)查結(jié)果按公式計(jì)算出病情指數(shù)，

DI=■×100。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同籽瓜自交系苗期枯萎病抗性比較

室內(nèi)苗期人工接種枯萎病級(jí)別劃分見(jiàn)彩插23圖版-B，抗病性鑒定結(jié)果見(jiàn)表4。本試驗(yàn)篩選出了抗病和感病材料對(duì)照（彩插23圖版-C）。從統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果看，供試的62份籽用西瓜種質(zhì)資源中沒(méi)有對(duì)枯萎病表現(xiàn)免疫和高抗的材料。統(tǒng)計(jì)分析的結(jié)果為：表現(xiàn)中抗（病情指數(shù)在20.1～50.0）的有ES68、ES29（黏籽）、ES58、ES5、ES64、ES94等19份，占總數(shù)的31%；表現(xiàn)為輕抗（病情指數(shù)在50.1～80.0）的有ES1、ES59、ES54、 ES73、ES23、ES84、ES69、ES30、ES63（黏籽）等42份，占總數(shù)的67.7%；表現(xiàn)為感?。ú∏橹笖?shù)在80.1～100.0）的只有1份材料ES50，病情指數(shù)為84.38。

2.2 籽瓜枯萎病生理小種鑒定

對(duì)國(guó)際上公認(rèn)的鑒別寄主發(fā)病統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，PI 296341和 Calhoun Grany表現(xiàn)抗病，Charlestan Gray和Sugar Bbaby表現(xiàn)感病，綜合4個(gè)鑒別寄主的發(fā)病情況分析可得新疆昌吉地區(qū)的枯萎病生理小種為1號(hào)小種。

3 討 論

籽瓜枯萎病是由真菌半知菌亞門(mén)鐮孢霉屬尖鐮孢菌西瓜專(zhuān)化型[Fusarium oxysporum f. niveum（E.F.Smith）Snyder et Hansen]（FON）侵染所致， 是籽瓜的主要病害之一[5]。目前國(guó)際上公認(rèn)的西瓜枯萎病病菌專(zhuān)化型有4個(gè)，即生理小種0、1、2、3，0號(hào)小種不引起抗病品種萎蔫，1號(hào)小種引起大部分抗病品種輕度和中度萎蔫，2號(hào)小種能引起所有已知抗病品種嚴(yán)重萎蔫，它們的致病力逐次增強(qiáng)[6]。鑒別寄主中Suger Baby為感病鑒別寄主，PI 296341是唯一對(duì)3個(gè)生理小種都表現(xiàn)抗性的野生鑒別寄主，Calhoun Gray是針對(duì)生理小種0、1的抗病寄主，此外，Charlestan Gray是感病品種。本實(shí)驗(yàn)參照Elmstron和Hopkins[4]的標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合試驗(yàn)實(shí)際情況對(duì)籽瓜種質(zhì)資源進(jìn)行枯萎病分級(jí)，分為5級(jí)，適用于本試驗(yàn)材料的抗性調(diào)查分級(jí)。

通過(guò)對(duì)這62份種質(zhì)進(jìn)行苗期人工接種鑒定，反映出的枯萎病抗性差異，一般可以說(shuō)明成株期抗性情況。同1份材料的不同生長(zhǎng)階段和不同部分也可能存在差異，因?yàn)椴煌牧蠈?duì)溫度、濕度、水分、光照、土壤等其他條件的適應(yīng)性也可能影響材料之間抗病性的差異。3種抗病類(lèi)型中大部分都存在抗病單株，ES68平均病情指數(shù)最低為25.00，屬于中抗類(lèi)型，并且在后期的病情調(diào)查中仍存在抗病單株；ES29屬于中抗類(lèi)型，最高病級(jí)為3，后期調(diào)查中也發(fā)現(xiàn)了抗病單株；62份種質(zhì)資源中篩選出1份感病材料ES50，病情指數(shù)為84.38。

4 結(jié) 論

通過(guò)對(duì)62份供試材料枯萎病的抗性鑒定，可知新疆昌吉地區(qū)的枯萎病生理小種為1號(hào)小種。明確了抗病和感病材料，篩選出了抗病材料ES68、ES29、ES58、ES5、ES64、ES94、ES1、ES59、ES54、ES30、ES63等。人工接種鑒定表明，目前主栽品種民籽1號(hào)、民勤大片、內(nèi)蒙黑中片、黑小片A、黑豐的病情指數(shù)在50以上，對(duì)枯萎病的抗病性并不好。本試驗(yàn)中的黏籽材料對(duì)人工接種的枯萎病均表現(xiàn)出了中抗和輕抗。供試材料全部為自交純系，植株、果實(shí)、種子等農(nóng)藝性狀較優(yōu)良，以鑒定出的抗病種質(zhì)為親本，運(yùn)用各種育種方法，將抗性基因?qū)胄韪倪M(jìn)的育種材料中，對(duì)抗病新品系的選育將富有實(shí)用價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

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