摘 要 本文以羅非魚(yú)魚(yú)鱗明膠為原料，利用六種蛋白酶對(duì)明膠進(jìn)行酶解，測(cè)定其不同酶解產(chǎn)物的抗氧化性、血管緊張素I轉(zhuǎn)換酶（ACE）抑制活性、α-葡萄糖苷酶（AG）抑制活性等生物活性。六種蛋白酶水解液中，胰蛋白酶水解液和堿性蛋白酶水解液的羥自由基清除力為76.7%和76%，高于VC的65.6%；除中性蛋白酶對(duì)DPPH自由基沒(méi)有清除力以外，其余5種蛋白酶均對(duì)DPPH自由基有清除力，但是低于VC；胃蛋白酶水解液對(duì)α-葡萄糖苷酶的活性抑制作用最強(qiáng)，為67.1%，而中性蛋白酶、堿性蛋白酶和胰蛋白酶水解液對(duì)α-葡萄糖苷酶沒(méi)有抑制作用。6種蛋白酶的水解產(chǎn)物均有的ACE抑制活性。

關(guān)鍵詞 魚(yú)鱗；明膠；酶解產(chǎn)物；生物活性

中圖分類號(hào) TS20 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1673-9671-(2012)062-0228-01

魚(yú)鱗是有鱗魚(yú)加工的主要副產(chǎn)品之一，占魚(yú)體重量的1%-5%。目前對(duì)魚(yú)鱗的開(kāi)發(fā)利用主要有以下幾個(gè)方面：提取魚(yú)鱗膠，作為食品、化妝品等原材料，具有抗氧化和降低血壓、降低血液總膽固醇、抗衰老等功效；制備魚(yú)鱗水解液，除水解出大量的氨基酸外還會(huì)產(chǎn)生具有特定功能的肽；提取魚(yú)銀，作為一種昂貴的生物試劑，用于珍珠裝飾業(yè)和油漆制造業(yè)；低值淡水魚(yú)的魚(yú)鱗可用來(lái)開(kāi)發(fā)魚(yú)鱗涼粉、魚(yú)鱗凍膏、干制魚(yú)鱗等食品，制作成各種工藝品；提取卵磷脂；提取鳥(niǎo)嘌呤，用于治療白血病。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

冷凍羅非魚(yú)魚(yú)鱗；木瓜蛋白酶、胰蛋白酶；胃蛋白酶；酸性蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

真空泵、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；冷凍干燥機(jī)；氨基酸自動(dòng)分析儀；精密增力電動(dòng)攪拌器

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 魚(yú)鱗明膠提取

魚(yú)鱗50.00 g按照設(shè)定的提取時(shí)間、溫度、液料比提取，經(jīng)鐵篩過(guò)濾，濾液用105℃干燥，得到明膠。

2.2 明膠酶解產(chǎn)物活性研究

2.2.1 明膠的酶解

不同蛋白酶對(duì)同一底物的水解效果不同，本實(shí)驗(yàn)選用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶和堿性蛋白酶分別對(duì)明膠進(jìn)行水解。

2.2.2 抗氧化活性的測(cè)定

1）羥自由基清除作用。試管中依此加入硫酸亞鐵1mL，水楊酸-乙醇1 mL，樣品1 mL，H2O2 1 mL，將混合液在37℃水浴鍋中反應(yīng)30 min，取出后用分光光度計(jì)在510 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值。

計(jì)算公式為：清除率I（%）=[1-（As-Ao）/Ac ]×100

2）DPPH自由基清除力。試管中加入4 mL樣品，1 mLDPPH-乙醇溶液，充分震蕩后暗室反應(yīng)30min，用分光光度計(jì)在517 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值。（不加樣品加蒸餾水為空白對(duì)照，以100 μg/ml的VC作陽(yáng)性對(duì)照）

計(jì)算公式為：DPPH自由基清除率I（%）=（Ac-As）/Ac×100

2.2.3 血管緊張素I轉(zhuǎn)換酶抑制活性測(cè)定

取5ul樣品加入15 ul的ACE酶（37℃ 5 min）后，加入25 ulHHL（三肽馬尿酰-組氨酸-亮氨酸）（37℃ 25 min），再加入0.1%三氟乙酸（TFA）10 ul于16500×g的速度4℃離心20 min后，取上清液在228 nm處紫外光檢測(cè)條件下檢測(cè)馬尿酸的峰面積。（以緩沖液替代樣品作為空白對(duì)照）

計(jì)算公式為：抑制率I（%）=（Ac- As）/Ac×100%

2.2.4 α-葡萄糖苷酶抑制活性的測(cè)定

抑制劑活力測(cè)定：根據(jù)Tremblay等的方法測(cè)定AG的活性，即以pNPG為底物，0.5 mol/L碳酸鈉溶液為終止液。在37℃，pH6.8的條件下反應(yīng)，用酶標(biāo)儀在405 nm波長(zhǎng)處比色測(cè)定。

計(jì)算公式為：抑制率I（%）=1-[（As- AB）/Ac×100%]

3 結(jié)果與討論

3.1 抗氧化活性的測(cè)定

3.1.1 羥自由基清除作用

六種蛋白酶水解液中，胰蛋白酶水解液和堿性蛋白酶水解液的羥自由基清除力較強(qiáng)分別為76.7%和76.0%，甚至高于VC的65.6%；其次為中性蛋白酶水解液、酸性蛋白酶水解液和胃蛋白酶水解液；而木瓜蛋白酶水解液清除率僅為6.8%。

3.1.2 DPPH自由基清除力

六種蛋白酶水解液中，堿性蛋白酶水解液的DPPH自由基清除力最強(qiáng)為42.2%，低于陽(yáng)性對(duì)照VC的47.7%，其次為胃蛋白酶水解液30.8%和酸性蛋白酶水解液25.6%，再次為胰蛋白酶水解液16.3%和木瓜蛋白酶水解液10.9。中性蛋白酶對(duì)DPPH自由基沒(méi)有清除能力。

3.2 血管緊張素I轉(zhuǎn)換酶抑制活性測(cè)定

六種蛋白酶水解液中，酸性蛋白酶水解液的ACE抑制率最高為71.7%，其次為木瓜蛋白酶水解液68.9%和堿性蛋白酶水解液68.7%，再次為胰蛋白酶水解液63.9%和中性蛋白酶水解液61.5%，ACE抑制率最低的是胃蛋白酶水解液僅為0.78%。

3.3 α-葡萄糖苷酶抑制活性的測(cè)定

六種蛋白酶水解液對(duì)AG活性有截然不同的作用。酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶對(duì)AG有抑制作用，其中胃蛋白酶水解液的抑制率為67.10%，對(duì)AG的抑制作用最強(qiáng)。而中性蛋白酶、堿性蛋白酶和胰蛋白酶明膠水解液對(duì)AG沒(méi)有抑制作用。

4 結(jié)論

六種不同的酶（酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶）水解魚(yú)鱗明膠，對(duì)其生物活性進(jìn)行比較。其中胰蛋白酶水解液和堿性蛋白酶水解液的羥自由基清除力較強(qiáng)分別為76.7%和76.0%，高于VC的65.6%；堿性蛋白酶水解液的DPPH自由基清除力最強(qiáng)42.4%，但不及VC；六種蛋白酶水解液中酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶對(duì)AG活性有抑制作用，其中胃蛋白酶水解液的抑制作用最強(qiáng)為67.10%；六種酶水解液均有ACE抑制作用，酸性蛋白酶水解液的ACE抑制率最高71.7%。

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作者簡(jiǎn)介

康樂(lè)（1983—），女，遼寧遼陽(yáng)人，助教，碩士研究生，研究方向：食品科學(xué)。