摘 要：目的 研究（順）-3-（氯代亞甲基）-6-氟-硫色滿-4-酮（（z）-3-（chloromethylene）-6-fluorothiochroman-4-one，CMFT）體外抗BGC-823腫瘤細(xì)胞機(jī)理。方法 采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)BGC-823腫瘤細(xì)胞周期和凋亡。結(jié)論 CMFT能夠抑制BGC-823細(xì)胞周期并誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。

關(guān)鍵詞：（順）-3-（氯代亞甲基）-6-氟-硫色滿-4-酮 凋亡 周期

中圖分類號(hào)：TQ46 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2012）12（b）-0248-01

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

RPMI1640（索萊寶科技有限公司，北京）；胰蛋白酶（Amersco，美國(guó)）；新生牛血清（天杭生物科技有限公司，浙江）；二甲基亞砜（DMSO）（索萊寶科技有限公司，北京）；Annexin V-FITC試劑盒（BD，美國(guó)）。

1.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)CMFT對(duì)BGC-823細(xì)胞凋亡的影響

取5×106個(gè)細(xì)胞接種于6孔板，培養(yǎng)12h后加入終濃度分別為40，20μmol·L-1的CMFT，DMSO為陰性對(duì)照，加藥24h后收集細(xì)胞，冷PBS洗滌2次，每組細(xì)胞不少于105個(gè)，按照Annexin V-FITC試劑盒操作說明處理細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀FACSC Calibur（BD，美國(guó)）檢測(cè)凋亡。

1.3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)CMFT對(duì)BGC-823細(xì)胞周期的影響

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞5×106個(gè)接種于6孔板中，培養(yǎng)12h，設(shè)DMSO為溶劑對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組加入CMFT使其終濃度為20 μmol·L-1。培養(yǎng)24h后收集細(xì)胞，冷PBS洗2次：每組細(xì)胞不少于106個(gè)，加預(yù)冷75%的乙醇固定24h，過濾，洗滌，PBS重懸，依次加入核糖核酸酶（RNase A）和碘化丙啶（propidium iodide，PI），避光孵育30 min，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)周期。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)用±s表示，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)t檢驗(yàn)。*p <0.05為顯著性差異，**p <0.01為極顯著性差異：細(xì)胞周期數(shù)據(jù)用ModFit LTTM分析軟件（Verity Software House，美國(guó)）處理：凋亡數(shù)據(jù)用Cell Quest/Pro（BD，美國(guó)）進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 CMFT對(duì)BGC-823細(xì)胞凋亡的影響

BGC-823細(xì)胞經(jīng)CMFT作用24h后，對(duì)照組細(xì)胞凋亡8%，20 μmol·L-1CMFT組細(xì)胞凋亡11%，40 μmol·L-1CMFT組細(xì)胞凋亡40%（圖1）。

左上（UL），右上（UR），左下（LL）和右下 （LR）分別表示細(xì)胞損傷，壞死，存活和凋亡比例。A DMSO；B CMFT（20 μmol·L-1）；CCMFT（40 μmol·L-1）

2.2 CMFT對(duì)BGC-823細(xì)胞周期的影響

作用細(xì)胞24 h后，流式細(xì)胞儀分析顯示空白對(duì)照組和加入DMSO的陰性對(duì)照組無(wú)顯著性差異，實(shí)驗(yàn)組G0/G1期細(xì)胞減少，S期和G2/M期細(xì)胞增加，且有顯著性差異（圖2）。

3 討論

近年來(lái)硫色滿酮類化合物的抗腫瘤活性受到人們的關(guān)注，楊更亮等根據(jù)硫色滿酮活性化合物的結(jié)構(gòu)特征，通過結(jié)構(gòu)修飾及改造，在3位、5位、6位和7位引入活性基團(tuán)，設(shè)計(jì)合成了一系列新型硫色滿酮衍生物[3]。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，CMFT誘導(dǎo)了人胃癌BGC-823細(xì)胞凋亡，流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示S期和G2/M期細(xì)胞比例增加，在腫瘤細(xì)胞分裂周期中S+G2期比例升高意味著生長(zhǎng)分?jǐn)?shù)增高，細(xì)胞生長(zhǎng)迅速。但造成細(xì)胞周期G2檢測(cè)點(diǎn)的失活的各種因素也可能造成同樣的現(xiàn)象。關(guān)于CMFT的抗腫瘤機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1] 祝士國(guó)，楊更亮，馬正月，等.氯代硫色烯并[4，3-c]吡唑啉衍生物的合成及其抗真菌活性[J].中國(guó)新藥雜志，2008，17（12）：1034-1036.

[2] 楊更亮，馬正月，田偉.新型抗菌、抗癌化合物及其衍生物的制備和用途[P].中國(guó)專利，專利號(hào)：PTC/CN/2010/000471.