任聚杰，籍雪平，李獻銳，王貝貝，王 娜

（1.河北科技大學(xué)理學(xué)院，河北石家莊 050018；2.河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河北石家莊 050017）

水－有機混合介質(zhì)中電流型生物傳感器對葡萄糖的響應(yīng)

任聚杰1，籍雪平2，李獻銳2，王貝貝2，王 娜2

（1.河北科技大學(xué)理學(xué)院，河北石家莊 050018；2.河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河北石家莊 050017）

利用自組裝單分子層（SAMs）／普魯士藍（PB）／殼聚糖（Chit）界面固定葡萄糖氧化酶（GOD），構(gòu)建酶生物傳感器，對傳感器在極性非質(zhì)子有機溶劑如乙腈（AN）、二甲基亞砜（DMSO）和N，N-二甲基甲酰胺 （DMF）存在條件下的電化學(xué)特性進行了研究，考察了有機溶劑體積分數(shù)對傳感器響應(yīng)的影響。結(jié)果表明，傳感器在50% （體積分數(shù)）AN中的電流響應(yīng)可達到磷酸緩沖溶液（PBS）中的73%。傳感器響應(yīng)速度快、重現(xiàn)性好、抗干擾能力強，展現(xiàn)了高的靈敏度（57.3 mA·M·cm－2）。該傳感器用于血清標本中葡萄糖的檢測，測定結(jié)果與市售葡萄糖酶光度測定試劑盒測定結(jié)果相吻合。

生物傳感器；葡萄糖氧化酶；水-有機混合介質(zhì)；血清；葡萄糖

人們一直認為酶只能在水介質(zhì)中才能維持其活性，很少考慮介質(zhì)作為一個對其活性的影響因素。后來發(fā)現(xiàn)酶在一定條件下的有機相中也具有催化活性，這一發(fā)現(xiàn)大大促進了酶的理論和應(yīng)用研究［1］。在研究介質(zhì)對酶催化的影響時，常把介質(zhì)分為無水有機介質(zhì)、微水系統(tǒng)和水－有機溶劑混合介質(zhì)等［2］，一般都可叫做非水介質(zhì)。近20年里，人們對酶在非水介質(zhì)中的研究和相關(guān)應(yīng)用取得了一些顯著進展。2001年，KLIBANOV在《Nature》上發(fā)表了“把酶用于有機溶劑以改善酶的性能”的文章，綜述了酶在非水介質(zhì)中的研究及應(yīng)用［3］。已有的研究結(jié)果認為，酶分子中的非共價結(jié)合力（如氫鍵、疏水性和范德華力）對于酶保持其活性結(jié)構(gòu)起著重要的作用，酶表面的水分子對于維持這種相互作用又起著關(guān)鍵的作用。

酶在分析領(lǐng)域的一個重要應(yīng)用是用來構(gòu)筑酶電化學(xué)生物傳感器，酶在非水介質(zhì)中的應(yīng)用使得構(gòu)筑可用于非水介質(zhì)的酶電化學(xué)生物傳感器（以下簡稱非水介質(zhì)酶傳感器）成為可能，同時日益增長的需要（如測定食品、化妝品、藥物中難溶于水的成分等）也促進了非水介質(zhì)酶傳感器的發(fā)展［4］。

酶電化學(xué)傳感器是將酶以某種方式固定在電極表面而形成。為獲得性能優(yōu)良的傳感器，不僅要求電極表面的活性質(zhì)點與電極間有良好的電子交換，而且要求電極表面的酶要具有高的活性和穩(wěn)定性。酶的固定方法和介質(zhì)的性質(zhì)都將影響電極表面酶的微環(huán)境，從而影響酶的活性，進而影響傳感器的響應(yīng)性能。因此，對不同的酶固定方法及介質(zhì)性質(zhì)對非水介質(zhì)酶傳感器性能的影響進行研究，不僅為研制高性能的傳感器打下基礎(chǔ)，也將為理解酶在非水介質(zhì)中的催化機理提供有力的幫助。

在非水介質(zhì)中研究較多的酶傳感器有以酪氨酸酶［5－6］、辣根過氧化物酶［4，7］、過氧化氫酶［8］和膽固醇氧化酶［9－10］為基礎(chǔ)的傳感器。然而，只有少數(shù)研究是基于葡萄糖氧化酶（GOD）的傳感器［11－12］。其中，GRASSINO等構(gòu)筑了一種“GOD／Ru-FeNi（CN）6／石墨”傳感器，并研究了其在有機溶劑含量為0～60% （體積分數(shù)）的水溶液中的響應(yīng)特性，以及在牛奶、果汁等生物樣品中的應(yīng)用［12］。

極性有機溶劑可與水在一定濃度范圍內(nèi)互溶，有些酶電極在含有少量水的極性溶劑中就表現(xiàn)出高響應(yīng)性［13－14］，而另一些酶電極則要在含有大量水的極性溶劑中才對底物產(chǎn)生響應(yīng)［15－16］。最近，研究人員研制了一種可用于水介質(zhì)中的高靈敏葡萄糖傳感器，該傳感器是基于電沉積在自組裝單分子層 （SAMs）上的可控普魯士藍 （PB）和殼聚糖（Chit）構(gòu)成的［17］。在中性介質(zhì)中，PB展現(xiàn)了對H2O2還原的高度穩(wěn)定性和優(yōu)異的電催化活性。在此基礎(chǔ)上，筆者將探索該葡萄糖傳感器在水－極性有機溶劑混合介質(zhì)中的電化學(xué)特性，研究介質(zhì)的性質(zhì)如疏水性、介電常數(shù)（ε）和黏度（η）等對傳感器電化學(xué)行為的影響規(guī)律。

1 實驗部分

1.1 試劑和儀器

CHI750電化學(xué)工作站，上海辰華儀器公司提供；KQ2200DE超聲波清洗器，昆明超聲儀器有限公司提供；79HW-1恒溫加熱磁力攪拌器，江蘇榮華儀器制造有限公司提供；DV215CD精密電子天平，OHAUS公司提供。

乙腈（AN）、二甲基亞砜（DMSO）和N，N-二甲基甲酰胺（DMF），均為分析純，天津永大化學(xué)試劑有限公司提供；高氯酸四乙基銨（TEAP），分析純，TCI化工發(fā)展有限公司提供；殼聚糖（Chit），脫乙酰度為75%～85%，浙江玉環(huán)化學(xué)試劑公司提供；葡萄糖氧化酶（GOD），10 000 U／mg，Sigma公司提供；葡萄糖，分析純，中國天津凱通化學(xué)試劑廠提供；鐵氰化鉀，分析純，上?；瘜W(xué)試劑廠提供；0.1 mol／L磷酸鹽緩沖溶液（PBS），由K2HPO4－KH2PO4配制；其他試劑均為分析純，實驗用水均為高純水。

1.2 電化學(xué)測量

采用三電極系統(tǒng)檢測：工作電極為修飾電極，參比電極為Ag／AgCl（3 mol／L KCl），對電極為鉑絲。在室溫下，以1 mmol／L的 K3［Fe（CN）6］／K2［Fe（CN）6］（含0.1 mol／L PBS）為氧化還原探針，采用循環(huán)伏安法（CV）對電極表面進行表征。電位掃描速率為20 m V／s，電位掃描范圍為－0.15～0.5 V（vs.Ag／AgCl（3 mol／L KCl））。此外，采用電流－時間曲線研究傳感器對葡萄糖電流響應(yīng)，應(yīng)用電勢為0.0 V。電解質(zhì)溶液為PBS與有機溶劑的混合物，其中有機溶劑含有30 mmol／L TEAP，以增加溶液導(dǎo)電性。

1.3 酶電極制備

將直徑為2 mm的金電極依次用粒徑為1.0，0.3，0.05μm的Al2O3粉拋光成鏡面，電極每次用蒸餾水超聲清洗。然后把電極依次置于丙酮、Piranha溶液（V（H2SO4）∶V（H2O2）＝3∶1）中超聲。用水清洗后晾干。然后按照文獻［17］報道方法對金電極進行修飾。首先將電極浸入10 mmol／L硫辛酸胺的無水乙醇溶液，在4℃保持15 h，修飾硫辛酸胺單分子自組裝層（SAMs），取出后依次用無水乙醇、蒸餾水沖洗。然后將電極置于0.050 mol／L K3［Fe（CN）6］＋0.050 mol／L Fe2（SO4）3＋0.10 mol／L K2SO4＋0.050 mol／L H2SO4溶液中，在－0.05～＋0.5 V電勢范圍內(nèi)連續(xù)掃描，電沉積普魯士藍（PB）。將電極清洗后，在其表面滴加5μL質(zhì)量濃度為10 mg／m L的GOD溶液，置于4℃冰箱中。干燥后，于電極表面滴加5μL體積分數(shù)為1%的Chit，用0.25%（體積分數(shù)）戊二醛交聯(lián)30 min。修飾電極記為Chit／GOD／PB／SAMs／Au。

2 結(jié)果與討論

2.1 修飾電極的電化學(xué)表征

電化學(xué)阻抗譜（EIS）和 CV 是探測修飾電極表面性能的有效工具。實驗中以［Fe（CN）6］3－／［Fe（CN）6］4－為探針，采用CV對金電極表面的組裝過程進行監(jiān)測。

修飾電極在1 mmol／L［Fe（CN）6］3－／［Fe（CN）6］4－溶液（0.1 mol／L PBS，p H 值為7.0）中的循環(huán)伏安曲線如圖1所示。裸金電極顯示了很好的法拉第響應(yīng)（見圖1 A中的a曲線），這是氧化還原過程的擴散控制特性。相反，在SAMs修飾的電極上幾乎觀察不到電流響應(yīng)（見圖1 B中的b曲線），表明SAMs對氧化還原探針有很好的屏障作用。當(dāng)PB電沉積到電極表面后，電流響應(yīng)明顯增加（見圖1 B中的c曲線），表明PB層在電極與氧化還原探針之間形成了電子轉(zhuǎn)移通道，促進了電子轉(zhuǎn)移。這是由于PB的良好電子媒介作用所致，使電子轉(zhuǎn)移更容易。當(dāng)GOD組裝到電極后，電流響應(yīng)又降低（見圖1 B中的d曲線）。這是GOD的非導(dǎo)電性所致。隨著Chit的進一步組裝（見圖1 B中的e曲線），電流響應(yīng)又有所增加，說明與GOD相比，Chit促進了電子轉(zhuǎn)移。上述CV結(jié)果和EIS實驗的結(jié)果［17］均表明SAMs，PB GOD和Chit成功組裝到金電極上。

圖1 裸 金電極，SAMs／Au 電 極，PB／SAMs／Au 電 極，GOD／PB／SAMs／Au，Chit／GOD／PB／SAMs／Au電極在1 mmol／L［Fe（CN）6］3－／［Fe（CN）6］4－ 溶液中的循環(huán)伏安曲線Fig.1 Cyclic voltammograms of bare Au electrode，SAMs／Au electrode，PB／SAMs／Au electrode，GOD／PB／SAMs／Au electrode and Chit／GOD／PB／SAMs／Au electrode in 1 mmol／L ［Fe（CN）6］3－／［Fe（CN）6］4－

2.2 有機溶劑對酶傳感器的影響

實驗選擇了極性非質(zhì)子溶劑AN（ε＝35.9），DMSO（ε＝46.5）和DMF（ε＝36.7）與PBS的混合介質(zhì)，考察了有機溶劑體積分數(shù)對酶電極響應(yīng)信號的影響。有機溶劑的體積分數(shù)從10%增加到60%時，傳感器的響應(yīng)信號隨有機溶劑含量的變化如圖2所示。

由圖2可知，隨著有機溶劑含量的增加響應(yīng)電流逐漸降低，但3種溶劑對電極響應(yīng)信號影響有所不同。在含AN的PBS溶液中，隨AN含量的增加響應(yīng)電流先快速下降，然后緩慢降低。在50%（體積分數(shù)，下同）的AN溶液中，響應(yīng)信號可以達到在純PBS中的73%。當(dāng)AN體積分數(shù)超過50%時，響應(yīng)電流明顯降低。在含DMF和DMSO的PBS溶液中，響應(yīng)電流先緩慢降低，當(dāng)有機溶劑超過30% 時，響應(yīng)電流明顯下降。在30%DMF和30%DMSO溶液中的響應(yīng)信號分別達到在純PBS中的59%和57%。

傳感器在混合介質(zhì)中的電流響應(yīng)比在PBS中低，這一事實可從以下幾個方面解釋。首先，有機溶劑的介電常數(shù)比水低，會使GOD的離子化程度降低，從而使其活性下降。其次，AN，DMF和DMSO都是非質(zhì)子溶劑，會對蛋白質(zhì)分子中的氫鍵產(chǎn)生影響，從而導(dǎo)致GOD結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)換。因此，隨著有機溶劑含量的增加，會導(dǎo)致酶活性逐漸降低，但傳感器在水－有機溶劑混合介質(zhì)中響應(yīng)的靈敏度足以滿足葡萄糖檢測要求。

2.3 電活性物質(zhì)的干擾

在30%（體積分數(shù)，下同）DMSO溶液中加入葡萄糖和不同電活性干擾物，傳感器的響應(yīng)信號見圖3。結(jié)果顯示，與0.50 mmol／L葡萄糖產(chǎn)生的信號相比，0.50 mmol／L尿酸（UA）、1.0 mmol／L對乙酰氨基酚（AP）和0.10 mmol／L抗壞血酸（AA）產(chǎn)生的電流很小。表明UA，AP和AA對傳感器響應(yīng)的影響可以忽略不計。這與在PBS中的結(jié)果相一致［17］。AP和UA在50%AN和30%DMF中對傳感器的響應(yīng)（未顯示在圖中）與30%DMSO中情況類似，而0.10 mmol／L AA的響應(yīng)信號明顯，但當(dāng)其濃度降到0.02 mmol／L時，電流響應(yīng)可以忽略不計。傳感器表現(xiàn)出了很好的抗干擾能力，這主要歸功于殼聚糖交聯(lián)膜的良好選擇滲透性。殼聚糖交聯(lián)膜可以減少或抑制電活性物質(zhì)的通透，同時讓葡萄糖的氧化產(chǎn)物 H2O2自由通過［17］。結(jié)果表明，不僅在PBS而且在有機溶劑存在下，殼聚糖膜均展現(xiàn)了優(yōu)良的抗干擾能力。

圖2 傳感器的電流響應(yīng)與有機溶劑含量之間的關(guān)系曲線Fig.2 Relation between the peak currents of the biosensor and the organic solvent contents

2.4 酶傳感器對葡萄糖的響應(yīng)

考察了酶傳感器在PBS與有機溶劑的混合溶液中的電流響應(yīng)行為。酶電極在50%AN，30%DMF和30%DMSO溶液中對葡萄糖的電流響應(yīng)見圖4。

當(dāng)向含有50%AN的PBS中加入葡萄糖時，在10 s之內(nèi)傳感器的響應(yīng)達到最大穩(wěn)態(tài)電流的95%，接近在PBS中的響應(yīng)速度［17］（見圖4中的a曲線）。傳感器在30%DMF和30%DMSO中的響應(yīng)速度比在50%AN中慢，20 s內(nèi)才能達到最大穩(wěn)態(tài)電流的95%（分別見圖4中的b曲線和c曲線）。這主要歸結(jié)于底物的擴散速度。底物的擴散速度是影響傳感器電流響應(yīng)快慢的一個重要因素。由于溶劑黏度差別（20℃時，水：1.00×103Pa·s；AN：0.37×103Pa·s；DMF：0.92×103Pa·s；DMSO：2.24×103Pa·s），葡萄糖在水，AN，DMF和DMSO中的擴散速度不同。另外，有機溶劑與水混合比例不同時的黏度也不同。一般隨著有機溶劑含量的增加黏度下降，純有機溶劑黏度最小。在AN－水體系中，黏度隨二者比例改變而改變［18］。50%AN的黏度為0.82×103Pa·s（25℃），接近于水的黏度（0.89×103Pa·s，25℃）。因此傳感器在50%AN中的響應(yīng)速度接近于水溶液中的響應(yīng)速度。而30%DMF的黏度比水大［19］，因此，電流響應(yīng)比在水中慢。同理，傳感器在30%DMSO中的響應(yīng)也比在水中慢。然而，傳感器在30%DMF和30%DMSO的響應(yīng)足夠滿足葡萄糖檢測的要求。

傳感器對葡萄糖濃度的線性響應(yīng)曲線見圖5。標準曲線的線性范圍、回歸方程及傳感器的靈敏度見表1。在50%AN中，傳感器對葡萄糖響應(yīng)的靈敏度接近在PBS中的靈敏度。

圖3 Chit／GOD／PB／SAMs／Au電極對葡萄糖和不同電活性干擾物質(zhì)的電流響應(yīng)Fig.3 Current response obtained at the Chit／GOD／PB／SAMs／Au electrode for glucose and different electroactive interferents

圖4 Chit／GOD／PB／SAMs／Au電極對葡萄糖響應(yīng)的電流-時間曲線Fig.4 Current-time curves of the Chit／GOD／PB／SAMs／Au electrode for glucose

圖5 電流響應(yīng)隨葡萄糖含量變化的標準曲線Fig.5 Calibration curves of the biosensor as a function of glucose concentration

表1 傳感器在不同體積分數(shù)有機溶劑中的參數(shù)Tab.1 Parameters of the biosensor in different volume percentage of organic solvents

2.5 酶電極的儲存穩(wěn)定性

酶電極的儲存環(huán)境是影響其重現(xiàn)性的重要因素。儲存條件不當(dāng)會直接影響其壽命和靈敏度。在水－有機溶劑中，如果將使用過的電極直接浸入PBS儲存，不可避免地會導(dǎo)致酶的滲漏，影響電極的靈敏度。如果將電極在冰箱干態(tài)儲存，修飾膜易翹起，甚至從電極表面剝離。經(jīng)過實驗，發(fā)現(xiàn)將電極密封于含有PBS的器皿中，且電極表面不直接與PBS接觸時儲存效果最好。該環(huán)境下保存的電極可使酶膜保留適當(dāng)水分，這不僅維持了酶活性又可避免酶滲漏和酶膜從電極表面剝離。

實驗結(jié)果表明，電極在該條件下儲存2周，電流響應(yīng)仍能達到80%。電極良好的儲存穩(wěn)定性歸功于殼聚糖膜良好的生物兼容性，該膜可為酶提供維持酶活性的微環(huán)境。

2.6 血清標本中葡萄糖檢測

為了驗證電極在實際樣品中對葡萄糖的響應(yīng)，將構(gòu)建的傳感器用于糖尿病人血糖檢測。為了獲得對所有樣品大致相當(dāng)?shù)碾娏黜憫?yīng)，根據(jù)血清中葡萄糖含量的不同，需用血清的體積量為10～40μL。本方法在50%AN中對糖尿病人血糖的檢測結(jié)果見表2，相對標準偏差（RSD）在10%以內(nèi)。

本方法測定的結(jié)果與標準分光光度酶法進行了比較。2種方法的回歸分析所得線性回歸方程為y＝0.902x＋0.72，式中y和x分別是采用本方法和標準方法測得的葡萄糖濃度。R2＝0.959，表明2種方法的相關(guān)性良好。

表2 糖尿病人血清中葡萄糖測定結(jié)果Tab.2 Test result of glucose in serum of diabetic patients

3 結(jié) 語

研究了水－有機溶劑混合介質(zhì)中葡萄糖生物傳感器的電化學(xué)特性，探討了有機溶劑體積分數(shù)對傳感器響應(yīng)的影響。酶傳感器在50%AN中的靈敏度接近在PBS中的靈敏度，展現(xiàn)了對葡萄糖快速、靈敏的響應(yīng)。該傳感器具有良好的儲存穩(wěn)定性，可用于PBS或水－有機溶劑混合介質(zhì)中血糖的檢測。

［1］CAMPANELLA L，F(xiàn)AVERO G，PERSI L，et al.Organic phase enzyme electrodes：Application and theoretical studies［J］.Anal Chim Acta，2001，426：235-247.

［2］CHATTERJEE S，RUSSELL A J.Determination of equilibrium and individual rate constants for subtilisin-catalyzed transesterification in anhydrous environments［J］.Biotechnol Bioeng，1992，40：1 069-1 077.

［3］KLIBANOV A M.Improving enzymes by using them in organic solvents［J］.Nature，2001，409：241-246.

［4］KONASH A，MAGNER E.Characterization of an organic phase peroxide biosensor based on horseradish peroxidase immobilized in eastman AQ［J］.Biosens Bioelectron，2006，22：116-123.

［5］WANG B，ZHANG J，DONG S.Silica sol-gel composite film as an encapsulation matrix for the construction of an amperometric tyrosinase-based biosensor［J］.Biosens Bioelectron，2000，15：397-402.

［6］CAMPANELLA L，BONANNI A，MARTINI E，et al.Determination of triazine pesticides using a new enzyme inhibition tyrosinase OPEE operating in chloroform［J］.Sens Actuators B，2005，111：505-514.

［7］IWOUHA E I，LEISTER I，MILAND E，et al.Reactivities of organic-phase biosensors（Ⅰ）：Enhancement of the sensitivity and stability of amperometric peroxidase biosensors using chemically modified enzymes［J］.Anal Chem，1997，69：1 674-1 681.

［8］CAMPANELLA L，CAPESCIOTTI G S，GATTA T，et al.An innovative organic phase enzyme electrode（OPEE）for the determination of ethanol in leadless petrols［J］.Sens Actuators B，2010，147：78-86.

［9］LIU W H，HOUNG W C，TSAI M S.Bioconversion of cholesterol to cholest-4-en-3one in aqueous／organic solvent two-phase reactors［J］.Enzyme Microb Technol，1996，18：184-189.

［10］LEON R，F(xiàn)ERNANDES P，PINHEIRO H M，et al.Whole-cell biocatalysis in organic media［J］.Enzyme Microb Technol，1998，23：483-500.

［11］ADANYI N，TOTH-MARKUS M，SZABO E E，et al.Investigation of organic phase biosensor for measuring glucose in flow injection analysis system［J］.Anal Chim Acta，2004，501：219-225.

［12］GRASSINO A N，MILARDOVIC S，GRABARIC Z，et al.Amperometric assessment of glucose electrode behaviour in mixed solvents and determination of glucose in dairy products［J］.Food Chem，2011，125：1 335-1 339.

［13］IWUOHA E I，SMYTH M R.Organic phase application of amperometric glucose sensor［J］.Analyst，1994，119：265-268.

［14］IWUOHA E I，SMYTH M R.Reactivity of a glucose oxidase electrode in a polar organic solvent［J］.Anal Proc，1994，31：19-21.

［15］WANG J，DEMPSEY E，EREMENKO A，et al.Organic-phase biosensing of enzyme inhibitors［J］.Anal Chim Acta，1993，279：203-208.

［16］IWUOHA E I，ADEYOJU O，DEMPSEY E，et al.Investigation of the effects of polar organic solvents on the activity of tyrosinase entrapped in a poly（estersulphonic acid）polymer［J］.Biosens Bioelectron，1995，10：661-667.

［17］JI X，REN J，NI R，et al.A stable and controllable Prussian blue layer electrodeposited on self-assembled monolayers for constructing highly sensitive glucose biosensor［J］.Analyst，2010，135：2 092-2 098.

［18］SNYDER L R.Classification of the solvent properties of common liquids［J］.J Chromatogr Sci，1978，16：223-234.

［19］VOLPE C D，GUARINO G，SARTORIO R，et al.Diffusion，viscosity，and refractivity data on the system dimethylformamide-water at 20℃and 40℃［J］.J Chem Eng Data，1986，31：37-40.

［20］李 彤，伊麗麗，魏福祥，等.測酚生物傳感器研究進展［J］.河北工業(yè)科技（Hebei Journal of Industrial Science and Technology），2008，25（3）：172-176.

［21］王 亮，尚會建，王麗梅，等.葡萄糖檢測方法研究進展［J］.河北工業(yè)科技（Hebei Journal of Industrial Science and Technology），2010，27（2）：132-135.

Response of amperometric biosensor to glucose in aqueous-organic mixed media

REN Ju-jie1，JI Xue-ping2，LI Xian-rui2，WANG Bei-bei2，WANG Na2
（1.College of Sciences，Hebei University of Science and Technology，Shijiazhuang Hebei 050018，China；2.Basic Medical College，Hebei Medical University，Shijiazhuang Hebei 050017，China）

A biosensor was fabricated with glucose oxidase（GOD）immobilized on self-assembled monolayers（SAMs）／Prussian blue（PB）／chitosan（Chit）.The electrochemical characteristics of the biosensor were studied in the presence of dipolar aprotic organic solvents such as acetonitrile（AN），dimethyl sulfoxide（DMSO）andN，N-dimethyl formamide（DMF）.The effect of volume percentage of organic solvents on biosensor response was investigated.It is observed that the response current of the biosensor in 50%AN reaches 73%of that in phosphate buffer solution（PBS）.The amperometric signals are fast，reproducible and exhibiting high sensitivity（57.3 m A·M·cm－2）.The biosensor was used to determine glucose in serum specimens，and the results are consistent with those obtained with the commercially available glucose enzyme photometric kit.

biosensor；glucose oxidase；aqueous-organic mixed media；serum；glucose

O657.1

A

1008-1542（2012）05-0391-06

2012-06-18；

2012-09-05；責(zé)任編輯：張士瑩

河北省自然科學(xué)基金資助項目（B2010000844）

任聚杰（1963-），男，河北石家莊人，教授，博士，主要從事電化學(xué)分析方面的研究。

籍雪平教授。E-mail：xpji03＠yahoo.com.cn