周艷紅 (唐山職業(yè)技術(shù)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部，河北 唐山 063000)

維甲類(lèi)X受體(RXRs)是核激素受體超家族成員之一〔1〕，也是目前研究最為透徹的核受體亞家族，RXRs在多種腫瘤組織中均有表達(dá)改變?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是含有9種酶蛋白分子的家族，可以導(dǎo)致基質(zhì)膜和細(xì)胞間質(zhì)成分破壞與降解，在惡性腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。MMP-2是其中的一種，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)MMP-2在惡性腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用研究較多〔2〕，對(duì)于惡性腫瘤的演變過(guò)程中MMP-2的表達(dá)狀況和所起作用研究尚未深入。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)正常結(jié)直腸黏膜、良性病變、結(jié)直腸癌等組織中RXRα和MMP-2的表達(dá)狀況，探討它們與結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，為結(jié)直腸癌的診斷和治療提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和參考指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取唐山市協(xié)和醫(yī)院2005～2007年間資料齊全的結(jié)直腸癌標(biāo)本存檔蠟塊53例，良性腺瘤標(biāo)本31例;正常人黏膜組織37例;年齡41～75歲，平均56歲;以上標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行放療、化療或激素治療。結(jié)直腸癌臨床分期采用TNM方案。Ⅰ期+Ⅱ期22例，Ⅲ期+Ⅳ期31例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性33例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性20例。

1.2 試劑 兔抗人RXRα多克隆抗體和兔抗人MMP-2多克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司;二步法免疫組化試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 免疫組織化學(xué)檢測(cè) 采用二步法免疫組化檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行染色。一抗選用兔抗人RXRα多克隆抗體(稀釋度1∶100)和兔抗人MMP-2多克隆抗體(稀釋度1∶100)。用已知的結(jié)直腸癌陽(yáng)性組織切片做陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替一抗作空白對(duì)照，具體實(shí)驗(yàn)步驟參照北京中杉二步法免疫組化試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4 結(jié)果判定 RXRα陽(yáng)性染色主要集中于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒;MMP-2陽(yáng)性表達(dá)部位主要在細(xì)胞質(zhì)中，呈棕黃色。采用陽(yáng)性細(xì)胞百分比法進(jìn)行半定量分析：計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞呈現(xiàn)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，結(jié)合顯色強(qiáng)弱分別為：陰性(-)不顯色，弱陽(yáng)性(+)＜25%，中度陽(yáng)性(?)26% ～50%，強(qiáng)陽(yáng)性(?)＞50%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件處理，樣本均數(shù)的比較采用方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 RXRα和MMP-2在不同組織中的表達(dá)及相關(guān)性 如表1所示，與正常黏膜和良性腺瘤組比較，結(jié)直腸癌組RXRα表達(dá)率呈下降趨勢(shì)，結(jié)直腸癌組MMP-2表達(dá)率呈上升趨勢(shì)，差異均有顯著性(P＜0.05)。

2.2 RXRα和MMP-2表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系 結(jié)直腸癌組織RXRα低表達(dá)和MMP-2高表達(dá)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床病理分期有關(guān)(P＜0.05)，與腫瘤分化程度無(wú)關(guān)，見(jiàn)表2。

表1 RXRα和MMP-2在不同結(jié)直腸組織的陽(yáng)性表達(dá)率〔%(n/n)〕

表2 RXRα和MMP-2陽(yáng)性表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系〔%(n/n)〕

2.3 RXRα和MMP-2的表達(dá)相關(guān)性 對(duì)RXRα和MMP-2在各組間的蛋白表達(dá)量進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，在結(jié)直腸癌中RXRα和MMP-2蛋白表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.586，P＜0.05)。研究資料表明，MMP-2蛋白在結(jié)直腸癌癌變中起上調(diào)作用，而RXRα蛋白起下調(diào)作用，RXRα蛋白在結(jié)直腸癌癌變中的調(diào)節(jié)作用有待于進(jìn)一步研究。

3 討論

RXRs在多種腫瘤組織中均有表達(dá)改變，它在調(diào)控細(xì)胞分化和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用。Brabender等〔3〕檢測(cè)食管癌和Barrett食管患者組織中RXRα mRNA情況，發(fā)現(xiàn)癌組織中RXRα mRNA的表達(dá)顯著下降，在有廣泛淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中表達(dá)更低，術(shù)后生存時(shí)間更短，RXRα mRNA表達(dá)下降與食管癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后有關(guān)。RXRs受體表達(dá)部位與腫瘤的惡性程度也有一定聯(lián)系〔4〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在結(jié)直腸癌中RXRα的陽(yáng)性表達(dá)率低于良性腺瘤組及正常黏膜組，而且RXRα的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期相關(guān)，與腫瘤分化程度無(wú)相關(guān)性，提示RXRα有望作為判定結(jié)直腸癌分化程度、病理分期的一種新的參考指標(biāo)，予以進(jìn)一步的研究。

MMPs在腫瘤或間質(zhì)細(xì)胞中的過(guò)表達(dá)和癌癥的演變進(jìn)展之間存在一定的因果關(guān)系。國(guó)內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)MMP-2在多種腫瘤組織中(如肺癌、胃癌、食管癌、卵巢上皮癌、宮頸癌等)表達(dá)水平均顯著高于相應(yīng)正常黏膜組織，同時(shí)發(fā)現(xiàn)MMP-2水平與腫瘤分期及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示MMPs與腫瘤進(jìn)展相關(guān)，并指出了為腫瘤干預(yù)治療而對(duì)MMPs進(jìn)行研究的重要性〔5～9〕。國(guó)外學(xué)者Roeb等〔10〕在對(duì)20例結(jié)腸癌、10例直腸癌患者進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸組織中MMP-2及MMP-9在腫瘤組織中水平均顯著高于相應(yīng)正常黏膜組織，以MMP-9升高明顯;而在直腸腫瘤中，僅MMP-2水平顯著增高。

本研究的結(jié)果表明，MMP-2的表達(dá)從正常黏膜組織到結(jié)直腸癌有逐漸增加的趨勢(shì)，而且MMP-2與腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理參數(shù)之間有相關(guān)性，這一結(jié)果表明，MMP-2在結(jié)直腸癌前病變向癌轉(zhuǎn)變的過(guò)程中具有重要意義，在癌變發(fā)生之后，它與腫瘤分化程度無(wú)相關(guān)性。

RXRα與MMP-2在各種結(jié)直腸癌組織中明顯負(fù)相關(guān)性，提示RXRα和MMP-2與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

1 Ahuja HS，Szanto A，Nagy L，et al.The retinoid X receptor and its ligands：versatile regulators of metabolic function，cell differentiation and cell death〔J〕.J Biol Homeost Agents，2003;17(1)：29-45.

2 馬 莉，張桂華，戚 鳳.基質(zhì)金屬蛋白酶-2與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展〔J〕.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2009;25(10)：1524-5.

3 Brabender J，Lord RV，Metzger R，et al.Role of retinoid X receptor mRNA expression in Barrett's esophagus〔J〕.J Gastrointest Surg，2004;8(4)：413-22.

4 Buentig N，Stoerkel S，Richter E，et al.Predictive impact of retinoid X receptor alpha expression in renal cell carcinoma〔J〕.Cancer Biother Radiopharm，2004;19(3)：331-42.

5 常延河，鄭素琴，伊 雪，等.KISS-1和MMP-2在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其與轉(zhuǎn)移和預(yù)后的關(guān)系〔J〕.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2010;20(19)：2937-40.

6 華 敏，朱 宏，馮亞?wèn)|，等.MMP-2、Cox-2蛋白在胃癌中的表達(dá)及臨床意義〔J〕. 南通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2010;30(5)：319-21.

7 葉曉鋒，高 平，韓恩善，等.MMP-2和PTEN蛋白在食管鱗癌中表達(dá)及臨床意義〔J〕.寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2010;32(11)：980-1.

8 高義軍，韓 萍，戴 琪，等.MMP-2在卵巢上皮性癌組織中的表達(dá)及臨床意義〔J〕. 西部醫(yī)學(xué)，2010;22(11)：2000-2.

9 羅曉華，龐 霞，張占薪，等.VEGF-C、VEGFR-3和MMP-2在宮頸癌組織中的表達(dá)及其與侵襲、轉(zhuǎn)移的關(guān)系〔J〕.中國(guó)婦幼保健，2010;25：5384-6.

10 Roeb E，Dietrich CG，Winograd R，et al.Activity and cellular origin of gelatinases in patients with colon and rectal carcinoma〔J〕.Cancer，2001;92：2680-91.