高天曙，王宏賢

(1．河南省中醫(yī)院，河南鄭州 45000;2．河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，河南鄭州 450000)

山楂葉是薔薇科植物山楂的干燥葉。研究［1］表明，山楂葉具有活血化瘀，擴張及軟化血管，降低血壓、膽固醇等多種作用，而黃酮類化合物是以洋芹素和木犀草素為苷元的一系列苷類，是山楂屬植物最主要的化學(xué)成分。有文獻［2］報道，山楂葉黃酮類化合物具有清除羥自由基和超氧自由基、提高機體抗氧化能力、維持體內(nèi)氧化—抗氧化系統(tǒng)平衡作用。本實驗采用超聲乙醇法提取山楂葉黃酮類化合物(以下簡稱HLF)，研究了其對小鼠血清及肝組織超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平的影響，以期為山楂葉的臨床及保健應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 動 物

普通級昆明種小鼠50只，鼠齡3個月，體質(zhì)量(25±2)g，購自鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院實驗動物中心(醫(yī)動字號2011-036號)。小鼠分籠飼養(yǎng)，自由飲水及進食，房間濕度50%左右，溫度(25±1)℃，實驗室適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后用于實驗。

1．2 藥品、試劑與儀器

山楂葉均自野外采摘。將采摘收集的新鮮山楂葉用自來水清洗晾干后，放置于恒溫干燥箱60℃下干燥、粉碎成40目干粉備用。SOD、MDA試劑盒，購自南京建成生物工程有限公司，批號091223。島津UV-2001型紫外可見分光光度計，產(chǎn)地日本;METTLER AE 240萬分之一精密天平，梅特勒—托利多上海儀器有限公司產(chǎn)品。

1．3 HLF 的提取

精密稱取山楂葉干粉20 g，置于250 mL具塞錐形瓶中，加入800 g/L乙醇50 mL，避光浸泡30 min，450 W超聲提取30 min，過濾，濾液用800 g/L乙醇定容至50 mL，即得。

1．4 動物分組、造模與給藥

將適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后的小鼠隨機分為空白對照組、模型對照組、HLF低劑量組(400 μg/g)、HLF 中劑量組(800 μg/g)及 HLF高劑量組(1 200 μg/g)5組，每組10只。模型對照組和各劑量藥物組小鼠每天頸背部皮下注射50 g/L D-半乳糖0．5 mL，空白對照組注射等量生理鹽水，連續(xù)給藥15 d。各劑量藥物組每天灌胃給以HLF(0．02 mL/g)，空白對照組及模型對照組灌胃給以等量生理鹽水，連續(xù)給藥15 d。

1．5 檢測指標

末次給藥24 h后處死動物，分別取小鼠血液及肝組織(制備10 g/L肝組織勻漿)。小鼠血清及肝組織SOD、MDA水平檢測嚴格按照試劑盒說明進行。

1．6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13．0統(tǒng)計分析軟件處理。計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)()±標準差(s)表示，組間比較采用t檢驗。以P＜0．05為差別有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 HLF對小鼠肝組織SOD、MDA水平的影響

與空白對照組對比，模型對照組SOD活力下降，MDA水平升高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．01或P＜0．05)，提示造模成功。與模型對照組對比，HLF高、中、低劑量組小鼠肝組織中SOD活性增加，MDA水平降低，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．01或 P＜0．05)。見表1。

表1 各組小鼠肝組織SOD、MDA水平對比 ±s

表1 各組小鼠肝組織SOD、MDA水平對比 ±s

注：與模型對照組對比，*P ＜0．05，＊＊ P ＜0．05。

組 別 動物數(shù) SOD/(U·mL-1) MDA/(μmol·L-1)空白對照組 10 97．56±5．29＊＊ 6．36±0．52＊＊模型對照組 10 39．32 ±10．18 8．85 ±0．42 HLF 低劑量組 10 76．29 ±11．26* 6．21 ±0．36＊＊HLF中劑量組 10 85．36±12．07＊＊ 6．83±0．31＊＊HLF高劑量組 10 90．05±13．95＊＊ 6．73±0．31＊＊

2．2 HLF對小鼠血清SOD、MDA水平的影響

與模型對照組對比，HLF高、中劑量組小鼠血清SOD水平顯著提高，MDA水平降低，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．01)，而低劑量組血清SOD、MDA水平與模型對照組對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05)。見表2。

表2 各組小鼠血清SOD、MDA水平對比 ±s

表2 各組小鼠血清SOD、MDA水平對比 ±s

注：與模型對照組對比，*P ＜0．05，＊＊ P ＜0．01。

組 別 動物數(shù) SOD/(U·mL-1) MDA/(μmol·L-1)空白對照組 10 796．38 ±16．25* 671．36 ±41．52*模型對照組 10 439．19 ±25．18 520．85 ±35．42 HLF 低劑量組 10 472．15 ±25．26* 528．39±41．36 HLF中劑量組 10 636．36±31．07＊＊ 736．15±35．31＊＊HLF高劑量組 10 683．56±28．96＊＊ 775．73±42．31＊＊

3 討論

在正常生理情況下，生物體內(nèi)的氧化—抗氧化系統(tǒng)保持著動態(tài)平衡。自由基是最外層軌道上未配對電子的原子、分子、離子或基團，具有較強的氧化能力［3］。在正常情況下，體內(nèi)所需要利用的自由基通常維持在一個有利無害的較低水平的動態(tài)生理濃度，對生物體細胞并無損害，并且生物體內(nèi)同時存在著一個內(nèi)源性的自由基清除系統(tǒng)，如SOD。SOD具有較強的抗氧化作用［4］，能夠清除體內(nèi)過剩的氧自由基及其衍生物，從而有效地防止或減輕體內(nèi)自由基所導(dǎo)致的氧化損傷。但在病理情況下，如腦出血、腦梗死等，機體短時間內(nèi)大量生成的自由基，超出了SOD的清除能力，必然使自由基生成與清除之間的平衡乃至機體氧化—抗氧化系統(tǒng)的動態(tài)平衡遭到破壞。大量自由基的強氧化作用使生物膜中的多不飽和脂肪酸形成脂質(zhì)過氧化物MDA。MDA水平變化情況能反映出生物體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接地反映出機體細胞受自由基攻擊和細胞損傷的嚴重程度。SOD是機體最重要的抗氧化酶，具有有效清除氧自由基、保護細胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整使其免于氧化損傷等作用。因此，SOD和MDA的水平變化能夠反映出體內(nèi)自由基的生成與清除，氧化—抗氧化系統(tǒng)平衡的動態(tài)變化情況［5］。

本實驗結(jié)果表明，HLF能夠顯著提高模型小鼠血清及肝組織SOD活性，降低模型小鼠血清及肝組織中MDA水平，提示HLF具有提高抗氧化能力、減輕自由基損傷、促進體內(nèi)氧化—抗氧化系統(tǒng)平衡恢復(fù)等作用，在臨床、保健等方面值得進一步研究與應(yīng)用。

［1］張遠榮，蔣企洲．山楂葉黃酮的抗氧化作用［J］．藥學(xué)與臨床研究，2011，19(3)：287．

［2］葉希韻，王耀發(fā)．山楂葉總黃酮對血管內(nèi)皮細胞氧化損傷的保護作用［J］．中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2002，19(4)：267．

［3］馬新方，李勇．魚腥草多糖體內(nèi)抗氧化活性研究［J］．中醫(yī)研究，2011，24(2)：20．

［4］吳丹，陳凱，王冬梅．腦梗塞病人血漿SOD和MDA水平測定分析［J］．承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2006，23(4)：423．

［5］馬琳，張麗娥，劉勇，等．腦梗塞患者血漿β-內(nèi)啡肽及血清 MDA、SOD 的變化［J］．西安醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2000，21(3)：238．