張 迪，雷光春，龔 成，王忠鎖

(1:北京林業(yè)大學(xué)自然保護(hù)區(qū)學(xué)院，北京100083)

(2:首都師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，北京100048)

(3:天鵝洲白暨豚國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)，石首434400)

基于COI基因序列的太湖新銀魚遺傳多樣性*

張 迪1，2，雷光春1，龔 成3，王忠鎖2＊＊

(1:北京林業(yè)大學(xué)自然保護(hù)區(qū)學(xué)院，北京100083)

(2:首都師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，北京100048)

(3:天鵝洲白暨豚國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)，石首434400)

利用線粒體細(xì)胞色素C氧化酶I(COI)分子標(biāo)記分析長(zhǎng)江中下游太湖新銀魚(Neosalanx taihuensis)8個(gè)地理種群132個(gè)樣本的遺傳多樣性.該基因630 bp片段的堿基序列共檢出8個(gè)核苷酸變異位點(diǎn)(變異率1.27%)，其中局域性單倍型居多(75%)，群體單倍型多樣性較高(h=0.576 ±0.036)，而核苷酸多樣性較低(π =0.00112 ±0.00204).不同地理種群遺傳多樣性差異顯著:有人工移植歷史種群遺傳多樣性較高、隔離度較高的種群遺傳多樣性較低，但大部分的遺傳變異來自于種群內(nèi)(54.83%)，反映出地理隔離和人為干擾對(duì)太湖新銀魚遺傳格局影響顯著.研究表明COI基因適于銀魚科魚類物種鑒別和系統(tǒng)發(fā)育研究，同時(shí)可為同種種群間遺傳關(guān)系分析提供一定的信息.

太湖新銀魚;長(zhǎng)江;線粒體COI;遺傳多樣性;生命條碼

太湖新銀魚(Neosalanx taihuensis Chen)是我國(guó)特有的淡水魚類［1-2］，隸屬于胡瓜魚目(Osmeriformes)銀魚科(Salangidae)［3］.該物種屬于一年生魚類，對(duì)水環(huán)境變化較敏感［4］，同時(shí)具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值.其地理分布區(qū)位于我國(guó)黃河及其以南的東部河流中下游與河口區(qū)［5］.長(zhǎng)江中下游及其附屬湖泊是太湖新銀魚的核心分布區(qū)，是該物種資源保護(hù)的關(guān)鍵區(qū)域［6］.

近30～50 a來，太湖新銀魚天然資源呈現(xiàn)大范圍、長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)衰退趨勢(shì).1980s后，種群退化速度加快.現(xiàn)今，除長(zhǎng)江和淮河中下游少數(shù)大中型湖泊外，其它絕大部分湖泊內(nèi)的天然太湖新銀魚已經(jīng)消失或失去經(jīng)濟(jì)價(jià)值［7-8］.與此同時(shí)，大范圍的太湖新銀魚人工移植改變了該物種的空間分布格局［9］.新建于上游水體的移植種群會(huì)因個(gè)體入侵而對(duì)下游天然種群造成基因污染，影響物種遺傳多樣性空間結(jié)構(gòu)的保護(hù)和進(jìn)化演化信息的保存［7］.因此，選擇合適的分子標(biāo)記研究太湖新銀魚天然種群遺傳多樣性格局為其種質(zhì)資源保護(hù)的當(dāng)務(wù)之急.

太湖新銀魚遺傳多樣性的研究已有較好的基礎(chǔ)，同工酶［10］、RAPD［11］、AFLP［12］和線粒體 Cytb、COII［13-14］等分子標(biāo)記相繼用于其遺傳多樣性分析.Zhao等基于Cytb基因遺傳多樣性分析了包括長(zhǎng)江流域在內(nèi)的3個(gè)流域13個(gè)太湖新銀魚地理種群的遺傳關(guān)系［15］，郭立等以線粒體的4個(gè)常用基因分析了包括太湖新銀魚在內(nèi)的銀魚科魚類的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系［16］.已有的研究報(bào)道為銀魚科魚類系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系的確定提供了重要信息，但對(duì)太湖新銀魚種群遺傳結(jié)構(gòu)和空間分布格局的探索尚顯不足.

近年來，DNA條形碼(DNA barcode)技術(shù)發(fā)展迅速［17］.線粒體DNA的COI基因因其長(zhǎng)度適宜、進(jìn)化速率慢、富含系統(tǒng)發(fā)育信息以及易被通用引物所擴(kuò)增等特點(diǎn)而被廣泛用于條形碼分析［17-20］.基于COI基因655 bp堿基片段的分析，Ward等有效地區(qū)分了澳大利亞207種海洋魚類［19］，Schlei等對(duì)鮭科魚類一個(gè)亞科的3個(gè)屬進(jìn)行鑒定［21］，王中鐸等有效鑒別了南海40種硬骨魚類［22］.郭立等研究中所涉及的太湖新銀魚COI基因多樣性分析為本研究提供了重要啟示［16］.本研究選用COI基因標(biāo)記，分析了長(zhǎng)江中下游8個(gè)太湖新銀魚地理種群的遺傳結(jié)構(gòu)，目的在于:1)從種下水平探索COI分子標(biāo)記在銀魚科魚類中作為DNA條形碼的可行性;2)分析太湖新銀魚遺傳多樣性分布格局，探索地理種群形成機(jī)制，并為制定銀魚資源保護(hù)對(duì)策提供科學(xué)依據(jù).

1 材料和方法

1.1 研究區(qū)域及樣點(diǎn)位置

共采集長(zhǎng)江中下游天然銀魚分布區(qū)8個(gè)地理種群的太湖新銀魚，其中長(zhǎng)江中游和下游各4個(gè)種群(圖1).由于鄱陽(yáng)湖南北狹長(zhǎng)、水面寬闊，調(diào)查樣點(diǎn)分散，圖1中標(biāo)出了主要樣點(diǎn)的分布，但數(shù)據(jù)處理時(shí)將羅溪灣、金溪湖、珠湖、龍?zhí)逗蜗录靶旅詈悠窔w為鄱陽(yáng)湖種群.共分析太湖新銀魚樣本132尾，其中洞庭湖16尾，華容東湖16尾，天鵝洲故道4尾，梁子湖20尾，鄱陽(yáng)湖28尾，泊湖16尾，巢湖16尾，南漪湖16尾.

1.2 COI序列分析

以專業(yè)銀魚拖網(wǎng)采集銀魚，所獲銀魚用95%乙醇分類保存.DNA提取時(shí)，取乙醇保存的太湖新銀魚背鰭前方背部肌肉組織約 30 mg，置于 1.5 ml離心管中，用 500 μl勻漿緩沖液(1 mol/L Tris-HCl 25 μl，0.5 mol/L EDTA 50 μl，5 mol/L NaCl)浸泡過夜，以充分溶解去除組織中的乙醇.常規(guī)SDS蛋白酶K消化，酚、氯仿-異戊醇(24:1)各抽提1次，無水乙醇沉淀，70%酒精洗滌獲得基因組DNA.

圖1 研究區(qū)域和采樣湖泊分布Fig.1 Study area and sampling sites of Yangtze River basin

擴(kuò)增mtDNA COI基因5'端630 bp堿基序列，采用以下引物序列［19］:FishF1:5'-TCAACCAACCACAAAGACATTGGCAC-3';FishR1:5'-TAGACTTCTGGGTGGCCAAAGAATCA-3'.

PCR 反應(yīng)體系 25 μl:10 × buffer 2.5 μl，dNTPs(2.5 mM)2 μl，F(xiàn)ishF1、FishR1(10 μM)各 0.5 μl，Taq 酶(2.5U)0.2 μl，反應(yīng)模版為 0.1 ～ 1.0 μg 基因組 DNA，加超純水補(bǔ)至 25 μl.PCR 反應(yīng)程序:95℃ 預(yù)變性2 min;循環(huán)40次，94℃變性30 s，54℃退火30 s，72℃延伸1 min;最后72℃延伸10 min.擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后送博邁德生物有限技術(shù)公司測(cè)序，測(cè)序引物與擴(kuò)增引物相同.序列比對(duì)使用Bioedit 7.0軟件完成［23］.

1.3 數(shù)據(jù)分析

使用Bioedit 7.0軟件對(duì)COI基因序列進(jìn)行編輯、排序及比對(duì)，利用Mega 4.0軟件對(duì)序列的堿基組成、密碼子各位置堿基組成、替換頻率、轉(zhuǎn)換顛換比進(jìn)行計(jì)算［24］.運(yùn)用Dnasp 4.0軟件對(duì)所有序列進(jìn)行單倍型分類，統(tǒng)計(jì)各單倍型頻率，同時(shí)分析8個(gè)群體的遺傳多樣性參數(shù)［25］.在TCS 1.21中以最大簡(jiǎn)約法構(gòu)建單倍型網(wǎng)絡(luò)圖［26］.使用Arlequin 3.1軟件中的分子方差分析(AMOVA)方法評(píng)價(jià)太湖新銀魚不同地理種群的遺傳變異水平［27］.在MEGA 4.0軟件中，基于Kimura雙參數(shù)模型計(jì)算各地理種群內(nèi)及種群間的遺傳距離.

2 結(jié)果與分析

2.1 太湖新銀魚群體COI基因序列多態(tài)性

太湖新銀魚132個(gè)樣本COI基因630 bp堿基序列中 A、T、G、C的平均含量分別為20.2%、25.5%、19.8%、34.5%，其中 A+T(45.7%)比例略小于 G+C(54.3%).

序列比對(duì)結(jié)果顯示COI基因630 bp序列共有8個(gè)變異位點(diǎn)，約占全序列的1.27%，其中7個(gè)變異位點(diǎn)發(fā)生在密碼子第三位點(diǎn)(占可變位點(diǎn)數(shù)的87.5%)，僅有一個(gè)發(fā)生在密碼子第一位點(diǎn)(占可變位點(diǎn)數(shù)的12.5%).簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)4個(gè)，堿基的轉(zhuǎn)換/顛換比(Ts/Tv)為46.67，轉(zhuǎn)換頻率大于顛換頻率(表1).

表1 太湖新銀魚mtDNA COI基因突變位點(diǎn)及單倍型Tab.1 Polymorphic locus and haplotype of mtDNA COI gene of N.taihuensis

2.2 單倍型分析

132尾太湖新銀魚樣本共檢出8個(gè)單倍型(表2)，其中有5個(gè)共享單倍型，3個(gè)單倍型為單個(gè)地理種群所特有.TCS最大簡(jiǎn)約單倍型網(wǎng)絡(luò)圖顯示HapI、HapII個(gè)體為較原始的單倍型，其他單倍型多由該單倍型經(jīng)過一次或兩次變異產(chǎn)生(圖2).在8個(gè)單倍型中，HapI和HapII為明顯的優(yōu)勢(shì)單倍型，占樣本總數(shù)的86.36%.其中 HapI占59.09%(78 個(gè)樣本)、HapII占27.27%(36 個(gè)樣本，表2).

單倍型發(fā)生率和單倍型頻率呈顯著正相關(guān)(R=0.931，P=0.001).HapI和HapII發(fā)生率分別為87.50%和75.00%，表現(xiàn)為流域廣布型.HapVI發(fā)生率為37.50%，HapV發(fā)生率為25.00%，其它單倍型僅見于單個(gè)種群，發(fā)生率為12.50%(圖3).種群?jiǎn)伪缎拓S度(單倍型數(shù))彼此差異懸殊，華容東湖和巢湖種群?jiǎn)伪缎妥钬S富(5個(gè)單倍型)，其次為鄱陽(yáng)湖(3個(gè)單倍型)，而梁子湖則沒有單倍型分化(表2).

圖2 太湖新銀魚單倍型網(wǎng)絡(luò)關(guān)系Fig.2 Genetic relationships of the eight haplotypes

圖3 單倍型頻率及種群發(fā)生率Fig.3 Frequency and occurrence incidence of the COI haplotypes

表2 太湖新銀魚線粒體COI基因單倍型分布Tab.2 Distribution of the eight haplotypes of N.taihuensis mtDNA COI gene

2.3 種群遺傳多樣性分析

8個(gè)種群總的單倍型多樣性(h)較高，介于0～0.667之間，均值為0.576±0.036.核苷酸多樣性(π)較低，介于0.00037～0.03976之間，均值為0.00112±0.00204(表3).種群多樣性系數(shù)最高的為巢湖和華容東湖，其次為天鵝洲故道和鄱陽(yáng)湖，而相對(duì)較低的是洞庭湖和梁子湖種群.

表3 太湖新銀魚各種群的單倍型多樣性和核苷酸多樣性Tab.3 Haplotype diversity(h)and nucleotide diversity(π)of N.taihuenesis populations

2.4 種群遺傳距離和AMOVA分析

長(zhǎng)江中下游8個(gè)太湖新銀魚群體的遺傳距離在0.00020～0.00265之間，其中華容東湖和巢湖遺傳差異最大，達(dá)到0.00252;梁子湖和泊湖間遺傳距離最小，僅為0.00020(表4).

表4 太湖新銀魚種群遺傳距離Tab.4 Genetic distance among eight N.taihuenesis populations

AMOVA分析結(jié)果表明長(zhǎng)江中下游太湖新銀魚之間有明顯的遺傳分化，但這種變異主要來源于種群內(nèi)個(gè)體間，而各地理種群之間的分化不明顯(P＞0.05).這一結(jié)果與局域性單倍型豐富現(xiàn)象相一致(表5).

表5 太湖新銀魚mtDNA COI基因序列Ф－統(tǒng)計(jì)量AMOVA分析Tab.5 AMOVA on mtDNA COI gene of N.taihuensis based on Ф-statistics

3 討論

經(jīng)濟(jì)魚類捕撈產(chǎn)量下降是其資源衰退的直接表現(xiàn)，而資源衰退的深層次影響則反映在遺傳多樣性的損失和種質(zhì)退化上.如果說漁業(yè)儲(chǔ)量(fishery stock)可以通過人工增殖等手段來恢復(fù)的話，種群遺傳多樣性的損失卻難以彌補(bǔ)，而長(zhǎng)期進(jìn)化形成的物種空間遺傳結(jié)構(gòu)的破壞則根本無法重建.因此，對(duì)退化物種種質(zhì)狀況的監(jiān)測(cè)和遺傳保護(hù)顯得尤為重要，但這一點(diǎn)并未受到應(yīng)有的重視，既有的研究基礎(chǔ)也非常薄弱［6］.太湖新銀魚為傳統(tǒng)銀魚業(yè)的主要捕撈對(duì)象之一，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值.長(zhǎng)江流域是太湖新銀魚的傳統(tǒng)產(chǎn)區(qū)，具有悠久的商業(yè)生產(chǎn)歷史和最高的商業(yè)產(chǎn)量.但近30～50 a來，該物種持續(xù)衰退，產(chǎn)量持續(xù)下滑，局域經(jīng)濟(jì)絕滅頻發(fā)，資源衰退極其嚴(yán)重［7］.自1980s初起孫幗英等報(bào)道了長(zhǎng)江口和長(zhǎng)江中下游主要湖泊的銀魚資源衰退問題［28-30］，2000s初王忠鎖等從流域尺度上開展了天然銀魚資源的調(diào)查和研究，并系統(tǒng)報(bào)道和分析了長(zhǎng)江流域淡水銀魚資源狀況及其環(huán)境因子相關(guān)性［31］.但這些工作基本停留在漁業(yè)產(chǎn)量和物種多樣性水平，基本沒有涉及銀魚的種質(zhì)衰退問題.

太湖新銀魚活動(dòng)能力較弱，基本屬于靜水定居性魚類，易受堤壩涵閘的阻礙而形成地理隔離.已有研究發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)江流域的大量水工建筑導(dǎo)致的生境破碎和種群隔離對(duì)銀魚空間格局產(chǎn)生顯著影響，是導(dǎo)致銀魚資源退化的重要因素［32］.本研究進(jìn)一步證實(shí)這些物理障礙是導(dǎo)致銀魚遺傳結(jié)構(gòu)發(fā)生變化的重要因素.長(zhǎng)江流域太湖新銀魚8個(gè)遺傳單倍型中局域性單倍型比例較高，占單倍型總數(shù)的75%，其中單種群獨(dú)有單倍型達(dá)4個(gè)，同時(shí)隔離度較高的洞庭湖和梁子湖種群?jiǎn)伪缎拓S度較低.這些結(jié)果既印證了太湖新銀魚天然群體間存在較高的地理隔離，彼此間基因流不暢，又反映出局域種群特有遺傳類型豐富的遺傳多樣性空間格局.這與Zhao等基于線粒體Cytb基因的分析結(jié)果相一致［15］.因此，與其它魚類相比太湖新銀魚局域種群絕滅所造成的遺傳多樣性損失應(yīng)該更大.遺憾的是太湖新銀魚天然資源已經(jīng)從長(zhǎng)江、淮河以外的流域內(nèi)消失，即便在江淮流域其殘存的有效種群也不過10個(gè)［7］.由此推斷我國(guó)太湖新銀魚遺傳資源已經(jīng)遭受了嚴(yán)重?fù)p失，其空間遺傳結(jié)構(gòu)也在天然種群大量絕滅過程中遭到相當(dāng)嚴(yán)重的破壞.

在天然種群衰退的同時(shí)，太湖新銀魚被人工移植到本無銀魚分布的數(shù)千個(gè)水庫(kù)或湖泊［9］.新建于江河上游水體的太湖新銀魚移植種群會(huì)因個(gè)體順?biāo)铝鞫肭窒掠蔚奶烊环N群，并可能對(duì)天然種群遺傳結(jié)構(gòu)和遺傳多樣性格局構(gòu)成威脅.本研究中有太湖新銀魚人工移植歷史的巢湖和華容東湖兩種群的COI單倍型達(dá)到5個(gè)，顯著高于其它未受移植影響的種群的單倍型數(shù)(不超過3個(gè)，表1).由此推斷，人工移植過程對(duì)天然太湖新銀魚種群的遺傳結(jié)構(gòu)確實(shí)產(chǎn)生一定的影響.Zhao等［15］對(duì)太湖新銀魚流域內(nèi)種群間遺傳距離高于流域間的報(bào)道應(yīng)該在一定程度上與人工移植的影響有關(guān)，因?yàn)橹榻饔虻奶裸y魚基本都是1980s后人工移植新建的，其遺傳結(jié)構(gòu)更類似于源種群(source population)，不具備珠江流域的地理區(qū)域代表性.由于案例較少，本文關(guān)于移植種群影響太湖新銀魚遺傳多樣性空間格局的推斷有待進(jìn)一步深入研究.

作為DNA條形碼研究的目的基因應(yīng)具有相對(duì)保守性以便于用通用引物擴(kuò)增，同時(shí)應(yīng)具有足夠的變異以確保物種或種群間的區(qū)分度［17］.核基因由于太過保守，在物種層次進(jìn)行鑒別較有難度.線粒體12S和16S核糖體基因中存在大量的插入和缺失現(xiàn)象，使序列比對(duì)受到障礙，容易造成錯(cuò)誤的比對(duì)［33］.而線粒體基因組基因插入、刪除很少，線粒體13個(gè)蛋白編碼基因中僅COI、線粒體細(xì)胞色素b(Cytb)基因擁有適合的長(zhǎng)度和慢的進(jìn)化速率［34-35］.相比之下，COI基因序列變化比Cytb慢，蘊(yùn)含簡(jiǎn)明的系統(tǒng)發(fā)育信息，更適合解析親緣關(guān)系密切的分類類群，因而被較廣泛地應(yīng)用于動(dòng)物物種鑒定和系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系的生命條碼研究［17-20］.Hebert等［17，34］認(rèn)為當(dāng)種間的遺傳距離大于種內(nèi)的遺傳距離，且距離差異大約10倍時(shí)，相關(guān)目的基因可以有效鑒別物種.本例研究結(jié)果顯示太湖新銀魚COI基因種內(nèi)平均遺傳距離為0.125%，而與同科的大銀魚(Protosalanx hyalocranius)、短吻間銀魚(Hemisalanx brachyrostralis)及寡齒新銀魚(N.oligodontis)等種間遺傳距離平均值為4.443%(未發(fā)表).種間遺傳距離為種內(nèi)遺傳距離的35倍.相比鱭屬(Coilia)、鲌屬(Culter)、大馬哈魚(Oncorhynchus sp.)以及班鱒屬(Salmo)等魚類，其種內(nèi)的遺傳距離更小，且遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于Herbert建議的1%的水平［34，36］.綜合本結(jié)果和郭立等［16］的研究結(jié)論，我們認(rèn)為線粒體COI基因非常適合銀魚科魚類的物種鑒別和系統(tǒng)發(fā)育研究.

就種下水平的研究而言，COI基因蘊(yùn)含的信息量小于線粒體Cytb基因.同期測(cè)序結(jié)果顯示，太湖新銀魚Cytb基因的變異率約為COI基因的3倍(未發(fā)表)，Zhao等的研究也給出了近似的結(jié)果［15］.

總之，COI基因適宜銀魚科魚類DNA條形碼分析及對(duì)銀魚科魚類進(jìn)行快速有效的物種鑒定.而在同種不同地理種群間遺傳關(guān)系研究中應(yīng)結(jié)合Cytb等基因一并分析，以獲取足夠量的信息，服務(wù)于太湖新銀魚等銀魚的種質(zhì)資源評(píng)估、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)和科學(xué)管理.

致謝:本研究的樣品采集得到黃德利、許隆君、研究地區(qū)各級(jí)漁業(yè)主管部門的大力支持和湖區(qū)漁民的鼎立幫助，遺傳多樣性分析實(shí)驗(yàn)得益于張愛兵教授的指導(dǎo)，在此一并致以誠(chéng)摯的感謝.

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Genetic diversity of Neosalanx taihuensis based on mitochondrial COI sequences

ZHANG Di1，2，LEI Guangchun1，GONG Cheng3＆ WANG Zhongsuo2
(1:School of Nature Conservation，Beijing Forestry University，Beijing 100083，P.R.China)
(2:College of Life Science，Capital Normal University，Beijing 100048，P.R.China)
(3:Swan Oxbow National Reserve for Lipotesvexillifer，Shishou 434400，P.R.China)

Neosalanx taihuensis is an annual fish with commercial importance.This species is endemic to China，occurring in inland waters affiliated to the eastern-flowing rivers southern to the Yellow River，e.g.the rivers of Yellow，Huaihe，Yangtze，Ou and Pearl etc.Among these river basins，the Yangtze River tests to be the most important region for this species with the highest fishery stocks and the most populations，and thus to be the core area for its conservation and sustainable exploitation.In the near decades，however，N.taihuensis decreased severely with most of the natural populations extinguished economically or even ecologically.The local population extinction infers that the species'genetic diversity must have suffered bad influence and some genetic types must have lost as result.To test this presumption，we conducted an icefish-specific investigation in the mid-lower reaches of Yangtze River during August，2006.Totally eight populations were sampled and used in the followed experiment on their genetic diversity.Based on the gene diversity of mitochondrial cytochrome oxidase subunit I(COI)，we mainly focus on two points:1)to find out the genetic diversity in single population and among populations for understanding the genetic status of wild N.taihuensis in the river basin，2)to check the suitability of COI gene for DNA barcoding study in the family of Salangidae.We selected 132 specimens，representing eight different geographic populations in the mid-lower Yangtze River basin，and analyzed their base sequences of COI gene.Among the 630 bp nucleotide sequence of COI gene，eight(1.27%)was variation sites，contributing to eight gene haplotypes.Although the number of gene haplotype and the nucleotide diversity index(π =0.00112 ±0.00204)were not high，haplotype diversity(h)was fairly rich(h=0.576 ± 0.036)in the populations at river basin scale.Taking spatial distribution pattern into account，most gene haplotypes distributed in spatially narrow region with quite low occurrence incidences of 12.5%or 25.0%，occurred in one or two lakes respectively.Haplotype richness in each population varied significantly from each other，with a high fixation index.The least haplotypes occurred in the two highly isolated lakes of Dongting and Liangzi，and the highest haplotype richness occurred in the two lakes with icefish introduction histories.This result indicates that a high inter-population variation existed in the studied region.So we concluded that wild populations of N.taihuensis have suffered great ecological isolation，although they are geographically near to each other.Comparing with several other salangid fishes，e.g.Protosalanx hyalocranius，Hemisalanx brachyrostralis and N.oligodontis，the inter-specific genetic distance was 4.443%，amounting to some 35 times of that in N.taihuensis populations(0.125%).Compared with other fish taxa，such as Coilia，Culter，Oncorhynchus and Salmo，the intra-specific genetic distance was much smaller within N.taihuensis populations(＜1%).In conclusion，the COI gene is good and suitable to DNA barcode study in species identifying and systematic study，and can be useful in the assessment，monitoring and conservation management of icefish genetic diversity.

Neosalanx taihuensis;Yangtze River;COI;genetic diversity;DNA barcode

＊ 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30570290)、北京市自然科學(xué)基金項(xiàng)目(8112010)和北京市教委科技計(jì)劃項(xiàng)目(KM201110028011)聯(lián)合資助.2011－05－03收稿;2011－08－15收修改稿.張迪，女，1988年生，碩士研究生;E-mail:zhangdibluesky@163.com.

＊＊ 通信作者;E-mail:zhongsuo@yahoo.com.cn.