鄺兆進(jìn)，操紅纓，黃 萍，吳清和

(廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣東廣州 510006)

大鼠的尿動(dòng)力操作相對(duì)繁雜，尚缺乏統(tǒng)一規(guī)范的操作方法，目前烏拉坦麻醉下經(jīng)尿道插管大鼠膀胱測(cè)壓的方法主要有兩種:一種是兩根無菌3F輸尿管導(dǎo)管先后導(dǎo)入尿道測(cè)壓，分別與壓力傳感器及微量注射泵連接;另外一種是單根3F膀胱測(cè)壓導(dǎo)管，導(dǎo)管接上三通，三通一端與微量注射泵相接，另一端接尿動(dòng)力儀的膀胱壓力傳感器。這兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，本文比較此兩種測(cè)壓方法分別測(cè)量?jī)山M不同年齡大鼠的膀胱充盈期內(nèi)壓，以明確兩種測(cè)壓方法的差異，并為大鼠膀胱測(cè)壓方法的選擇及改進(jìn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 SD♀6月齡大鼠11只，體質(zhì)量240～280 g。SD♀12月齡大鼠11只，體質(zhì)量320～400 g;由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供［SCXK(粵)2008－0020］。

1.2 材料和儀器 測(cè)壓導(dǎo)管:自制3F膀胱測(cè)壓導(dǎo)管、帶接頭連續(xù)硬膜外麻醉導(dǎo)管、三通轉(zhuǎn)換接頭;尿動(dòng)力學(xué)檢查儀為L(zhǎng)aborie 94型(加拿大Laborie公司產(chǎn)品);微量注射泵(浙江史密斯醫(yī)學(xué)儀器有限公司W(wǎng)Z-50C6型);烏拉坦為國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品。

1.3 充盈性膀胱測(cè)壓

1.3.1 方法一(雙管法)［1］① 檢測(cè)前處理:大鼠稱重后，25%烏拉坦(0.7 g·kg－1)腹腔注射麻醉，仰臥位固定。將兩根無菌3F輸尿管導(dǎo)管先后導(dǎo)入尿道，作為膀胱測(cè)壓管和灌注管。將乳膠手套小指末端一截密封包繞連續(xù)硬膜外麻醉導(dǎo)管的末端制成球囊作為腹壓測(cè)定管導(dǎo)入大鼠直腸4 cm。排空大鼠膀胱，測(cè)壓管與壓力傳感器相連;注水管連接微量注射泵，泵水速度為0.5 ml·min－1。② 充盈期膀胱內(nèi)壓及漏尿點(diǎn)壓測(cè)定［2］:體內(nèi)置零后開啟微量注射泵向膀胱內(nèi)灌注生理鹽水，此過程中注意觀察尿道外口有無液體溢出。液體溢出時(shí)記錄的膀胱壓即為膀胱漏尿點(diǎn)壓(bladder leak point pressures，BLPP)，同時(shí)停止灌注，觀察膀胱壓力曲線，記錄其峰值，即為最大膀胱排尿壓(maximum voiding pressure，MVP)。計(jì)算灌注時(shí)間×灌注速度，即膀胱最大容量(maximum bladder capacity，MBC)。以1 ml注射器抽出膀胱內(nèi)殘余尿，即殘余尿量(Post void residual，PVR)［3］。排空膀胱，灌注至膀胱最大容量一半時(shí)，用手指緩緩按壓大鼠上腹部使腹壓逐漸上升以模擬Valsalva動(dòng)作，觀察有無尿液從尿道外口溢出，若有尿液溢出，此時(shí)記錄的膀胱壓即為腹壓漏尿點(diǎn)壓(abdomen leak point pressure，ALPP)［4］。以上壓力均重復(fù)2～3次，取其平均值。

1.3.2 方法二(三通法)［5］① 檢測(cè)前處理:大鼠稱重后，以25%烏拉坦(0.7 g·kg－1)腹腔注射麻醉后，仰臥位固定。經(jīng)尿道插入單根3F膀胱測(cè)壓導(dǎo)管，導(dǎo)管接上三通，用注射器抽出膀胱內(nèi)尿液后，三通一端與微量灌注泵相接，另一端接尿動(dòng)力儀的膀胱壓力傳感器，將乳膠手套小指末端一截密封包繞連續(xù)硬膜外麻醉導(dǎo)管的末端制成球囊作為腹壓測(cè)定管導(dǎo)入大鼠直腸4 cm。②充盈期膀胱內(nèi)壓及漏尿點(diǎn)壓測(cè)定同前。

1.4 膀胱測(cè)壓指標(biāo) 膀胱漏尿點(diǎn)壓(BLPP)，腹壓漏尿點(diǎn)壓(ALPP)，最大排尿壓(MVP)，膀胱容量(MBC)，殘余尿量(PVR)，排尿量即有效膀胱容量(voiding volume or effictive cystometric capacity，Vv or ECV=MBC－PVR)，順 應(yīng) 性(bldader compliance，BC= △V/△P=MBC/BLPP)，排尿效率(efficiency of voiding，EV=VV/MBC×100%)。

Tab 1Effect of two cystometric methods on rat BLPP and ALPP of different ages(±s，n=11)

Tab 1Effect of two cystometric methods on rat BLPP and ALPP of different ages(±s，n=11)

*P ＜0.05，P ＜0.01，6-month rats vs 12-month rats;▲▲P ＜0.01 Double catheters vs single catheter connected with tee(the same beloa)

Group BLPP/cm H2O Double catheters method Single catheter conn ected with tee ALPP(cmH2O)Double catheters method Single catheter conn ected with tee 6-month rats 25.545 ±5.444 35.723 ±6.862▲▲43.407 ±11.861 45.678 ±10.823 12-month rats 20.983 ±5.229* 37.381 ±11.672▲▲ 41.017 ±8.547 54.360 ±12.701＊▲▲

Tab 2Effect of two cystometric methods on rat MVP and MBC of different ages(±s，n=11)

Tab 2Effect of two cystometric methods on rat MVP and MBC of different ages(±s，n=11)

Group MVP/cm H2O Double catheters method Single catheter conn ected with tee MBC/ml Double catheters method Single catheter conn ected with tee 6-month rats 23.636 ±5.029 31.159 ±6.639▲▲1.341 ±0.666 1.842 ±0.944 12-month rats 19.124 ±5.572* 33.173 ±11.001▲▲ 2.314 ±1.530* 2.910 ±1.539*

Tab 3Effect of two cystometric methods on rat PVR and Vv of different ages(±s，n=11)

Tab 3Effect of two cystometric methods on rat PVR and Vv of different ages(±s，n=11)

Group RV/ml Double catheters method Single catheter conn ected with tee Vv/ml Double catheters method Single catheter conn ected with tee 6-month rats 0.280 ±0.232 0.219 ±0.162 1.048 ±0.458 2.122 ±0.725▲▲12-month rats 2.036 ±1.839＊＊ 1.126 ±1.068＊＊ 1.145 ±0.599 1.489 ±0.560*

Tab 4Effect of two cystometric methods on rat BC and EV of different ages(±s，n=11)

Tab 4Effect of two cystometric methods on rat BC and EV of different ages(±s，n=11)

Group BC(ml/cm H2O)Double catheters method Single catheter conn ected with tee EV/%Double catheters method Single catheter conn ected with tee 6-month rats 0.054 ±0.027 0.048 ±0.023 79.910±19.298 81.700 ±13.680 12-month rats 0.088 ±0.037* 0.075 ±0.040* 58.216 ±28.788* 58.915 ±26.963*

1.5 動(dòng)物護(hù)理 檢測(cè)完畢后，動(dòng)物活力碘消毒尿道外口及肛門，使用慶大霉素 0.5 mg·kg－1，ip，qd，共 3 d。方法一測(cè)完5 d后，再用方法二重復(fù)測(cè)定1次。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料均采用±s表示，兩兩之間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩種測(cè)定方法對(duì)大鼠BLPP、ALPP的影響 如Tab 1所示，用雙管法測(cè)得12月齡組動(dòng)物BLPP比6月齡組低(P＜0.05)，ALPP差異無顯著性，而三通法測(cè)得兩組動(dòng)物的BLPP差異無顯著性，12月齡組的ALPP比6月齡組的高。結(jié)果顯示，三通法測(cè)得兩組動(dòng)物的BLPP、ALPP均高于雙管法的測(cè)定結(jié)果。

2.2 兩種測(cè)定方法對(duì)大鼠MVP、MBC的影響 如Tab 2所示，雙管法測(cè)得12月齡組動(dòng)物MVP比6月齡組的低、MBC比6月齡組的高，且差異存在顯著性(P＜0.05)，而三通法測(cè)得的兩組動(dòng)物的MVP無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，12月齡組的MBC比6月齡組的高。兩種方法測(cè)定結(jié)果顯示，三通法測(cè)得兩組動(dòng)物的MVP值均明顯高于雙管法的測(cè)定值(P＜0.01)，而MBC值亦有增高的趨勢(shì)。

2.3 兩種測(cè)定方法對(duì)大鼠PVR、Vv的影響 如 Tab 3所示，雙管法測(cè)得12月齡組動(dòng)物PVR比6月齡組的高(P＜0.01)，Vv差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而三通法測(cè)得12月齡組動(dòng)物PVR比6月齡組的多(P＜0.01)，Vv比6月齡組高。兩種方法測(cè)定結(jié)果看，三通法測(cè)得兩組動(dòng)物的Vv比雙管法高，PVR比雙管法小。結(jié)果顯示:三通法對(duì)大鼠排尿的影響較雙管法小。

2.4 兩種測(cè)定方法對(duì)大鼠BC、EV的影響 如Tab 4所示，兩種方法測(cè)得12月齡組動(dòng)物BC比6月齡組的大，而EV比6月齡組小(P＜0.05)。兩種方法測(cè)得的結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

正常排尿過程的是由膀胱、尿道相互協(xié)調(diào)共同完成的。尿道、膀胱結(jié)構(gòu)功能改變及病變均也可產(chǎn)生下尿路癥狀(LUTS)。而老齡化是膀胱及尿道的結(jié)構(gòu)功能改變的主要因素。

漏尿點(diǎn)壓［6］(LPP)是指尿液從尿道口流出時(shí)的膀胱壓力，根據(jù)驅(qū)使尿液流出的膀胱壓力的來源不同，分為兩類:①膀胱漏尿點(diǎn)壓(BLPP);② 腹壓漏尿點(diǎn)壓(ALPP)。ALPP主要反映尿道括約肌的關(guān)閉能力，腹壓增加使尿道括約肌關(guān)閉能力增強(qiáng);而BLPP主要反映開放尿道所需的逼尿肌壓力，逼尿肌壓增加會(huì)使尿道開放，這兩個(gè)指標(biāo)對(duì)梗阻診斷及上尿路功能預(yù)測(cè)有較大的臨床意義。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，用雙管法測(cè)出的膀胱壓力(BLPP、MVP)12月齡組比6月齡組的低，與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果［1］相似，說明老齡化動(dòng)物容易出現(xiàn)尿失禁等情況，其原因可能是由于膀胱及尿道括約肌隨著老齡化其功能也開始下降［7］。而用三通法則前面兩指標(biāo)沒有差異，且測(cè)得的ALPP，12月齡組大鼠比6月齡組大鼠高，這樣結(jié)果與上述理論相反。且三通法各壓力指標(biāo)測(cè)定的結(jié)果均比雙管法高。其原因可能是微量注射泵的部分壓力通過三通閥傳導(dǎo)到壓力感應(yīng)器上，使膀胱內(nèi)壓測(cè)定結(jié)果在實(shí)際壓力基礎(chǔ)上疊加所致，對(duì)于這種情況在臨床上膀胱穿刺造瘺測(cè)壓時(shí)，通過減除測(cè)壓前微量泵所致的壓力。但實(shí)驗(yàn)中微量泵的壓力不會(huì)固定不變，會(huì)隨著膀胱灌注壓的增大而增大。這也就是本實(shí)驗(yàn)方法的缺點(diǎn)，使得測(cè)得結(jié)果不符合理論的原因。

使用雙管法的缺點(diǎn)在于，雙管法使用兩根導(dǎo)管，在尿道中占用較大的空間，且兩管間有縫隙，影響尿道括約肌的關(guān)閉能力，使不能完全起到正常控尿的功能，故測(cè)出兩組動(dòng)物的ALPP無差異;而三通法使用一根導(dǎo)管，這樣可以減少對(duì)尿道閉合功能的影響但增加尿道阻力。有學(xué)者［1］認(rèn)為可能因?yàn)榻?jīng)尿道置管測(cè)壓，導(dǎo)管起到了支撐尿道的作用，在一定程度上降低了尿道的密閉性，這也是該方法有悖正常生理狀態(tài)的欠缺之處。但有學(xué)者認(rèn)為［8］，經(jīng)尿道置管雖可能因?yàn)閿U(kuò)張尿道或激活傳入神經(jīng)而影響膀胱尿道功能，但目前尚無更好的無創(chuàng)性方法能有效的測(cè)定局部的尿道反應(yīng)和功能。

當(dāng)尿液開始排放時(shí)，膀胱逼尿肌無抑制性收縮，尿道括約肌松馳，膀胱壓大于尿道壓使尿液排出;當(dāng)膀胱壓與尿道壓相同或相近時(shí)，則停止排尿。尿液的排泄情況與膀胱的舒縮能力有關(guān)與，與測(cè)壓導(dǎo)管的存在影響無關(guān)，故兩種方法測(cè)得兩組動(dòng)物的膀胱容量MBC、排尿后的殘余尿量PVR、膀胱的舒縮功能BC及排尿效率EV無影響，這可能與年齡有一定的關(guān)聯(lián)性。有些學(xué)者已經(jīng)對(duì)年齡相關(guān)性的尿動(dòng)力進(jìn)行研究，但由于動(dòng)物數(shù)少等原因，膀胱壓力指標(biāo)有年齡的變化趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，兩種大鼠膀胱測(cè)壓方法對(duì)尿動(dòng)力的測(cè)定存在明顯差異，用雙管法測(cè)得兩組動(dòng)物的BLPP、MVP、MBC、PVR、BC、EV差別均存在顯著性(P＜0.05～0.01)，符合生理學(xué)意義;三通法測(cè)定結(jié)果顯示，兩組動(dòng)物比較，MBC、PVR、Vv、BC、EV差別均有顯著性(P＜0.05～0.01)，符合生理學(xué)意義，而12月齡組ALPP比6月齡組高與膀胱老年化括約肌功能下降不一至;說明兩種方法測(cè)定的結(jié)果存在一定的差異性。以上兩種方法各有優(yōu)劣:雙管法測(cè)定大鼠的BLPP、MVP比較接近真實(shí)情況，但影響尿道的閉合能力，對(duì)于年齡化對(duì)ALPP的影響還需進(jìn)一步研究;而三通法對(duì)膀胱括約肌的閉合能力及排尿的影響相對(duì)較少，但要排除管道阻力及泵壓力的疊加對(duì)壓力測(cè)定結(jié)果等影響。兩種方法對(duì)于膀胱儲(chǔ)尿排尿能力相關(guān)的指標(biāo)PVR、Vv、BC、EV無明顯影響，故兩種方法被應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)研究有其一定的科學(xué)性。因此，制備直徑更小的單根雙腔或三腔導(dǎo)管用于動(dòng)物的尿動(dòng)力學(xué)研究，以盡可能減小導(dǎo)管對(duì)尿道的擴(kuò)張和刺激影響將有助于本方法的改進(jìn)。

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