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        HPLC法測定朱格倫烏日-6中羥基紅花黃色素A的含量

        2012-11-29 08:00:44王明新朱艷紅
        中國民族醫(yī)藥雜志 2012年2期
        關(guān)鍵詞:烏日黃色素紅花

        王明新朱艷紅

        (1.內(nèi)蒙古呼倫貝爾市人民醫(yī)院,內(nèi)蒙古 海拉爾 021000;2.通遼市藥品檢驗所,內(nèi)蒙古 通遼 028000)

        朱格倫烏日-6是由蓮子、石榴、肉桂、豆蔻、蓽茇、紅花六味藥組成的復(fù)方蒙藥制劑。功能主治為使反常之精華歸位,調(diào)經(jīng)。用于由赫依所致的白帶過多,月經(jīng)淋漓,腰腎部疼痛,不消化引起的胃痛等病。紅花為該方中主要成份之一,具有活血通經(jīng),散瘀止痛功效。對本方的臨床療效有重要作用,以紅花中主要有效成分羥基紅花黃色素A為定量監(jiān)控指標(biāo)可有效地控制產(chǎn)品的質(zhì)量。本文采用HPLC法測定其中羥基紅花黃色素A的含量,方法簡單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。可作為質(zhì)量控制的方法。

        1 儀器、試劑和藥品

        島津LC-10AT高效液相色譜儀,SPD-10Avp檢測器、CTO-2A柱溫箱、SIL-HTA自動進(jìn)樣器、CLASS-VP工作站組成。甲醇、乙腈為色譜純,水為高純水,磷酸為分析純。羥基紅花黃色素A(批號:111637-200503購自中國藥品生物制品檢定所。朱格倫烏日-6批號:20061208 20090606 20090612由呼倫貝爾市蒙醫(yī)院制劑室提供。

        2 方法和結(jié)果

        2.1 色譜條件:色譜柱:phenomenexC18柱(250mm×4。6mm,5μm),流動相為甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26:2:72),檢測波長為 403nm,流速為 1.0mL·min-1,進(jìn)樣量 10μL。

        2.2 溶液的制備

        2.2.1 對照品溶液制備:精密稱取羥基紅花黃色素A對照品適量,加50%甲醇制成每1mL含羥基紅花黃色素A 0.04275mg·mL-1。

        2.2.2 供試品溶液:取朱格倫烏日-6,研細(xì),取粉末2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入50%甲醇50mL,密塞,超聲(功率90W,頻率59kHz)處理40min,放冷,過0.45μm微孔濾膜取續(xù)濾液,即得。

        2.2.3 陰性樣品溶液:按照朱格倫烏日-6的制備工藝制備不含紅花的陰性樣品,并按“2.2.2”項下方法制成陰性樣品溶液。

        2.3 系統(tǒng)適用性試驗:取對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液,在上述色譜條件下進(jìn)樣分析,理論塔板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計算不低于3000。樣品中其他成分對羥基紅花黃色素A的測定無干擾。結(jié)果見圖1。

        圖1 羥基紅花黃色素A對照品(A)、樣品(B)、缺紅花陰性樣品(C)高效液相色譜圖

        2.4 線性關(guān)系考察:精密吸取配制好的對照品溶液2、6、8、10、15、20、30μL分別進(jìn)樣。以峰面積A為縱坐標(biāo),以對照品進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。羥基紅花黃色素A進(jìn)樣量在0.0855~1.2825μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好?;貧w方程為Y=3045787.8X-71952.8 r=0.999。

        2.5 精密度試驗:取取“2.2.1”項下的對照品溶液,在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次,羥基紅花黃色素A色譜峰面積的RSD(n=6)為0.42%。

        2.6 重復(fù)性試驗:取樣品粉末6份,按“2.2.2”項下方法操作,平行制備供試品溶液6份,在上述色譜條件下進(jìn)行分析測定。結(jié)果羥基紅花黃色素A含量的平均值(n=6)為1.09mg·g-1,RSD為0.9%。

        2.7 穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液,室溫放置,分別于0,2,4,6,8,12,24h 按上述色譜條件測定。測得羥基紅花黃色素A峰面積的RSD(n=6)1.6%。結(jié)果表明供試品溶液室溫旋轉(zhuǎn)24h內(nèi)穩(wěn)定。

        2.8 回收率試驗:精密稱取已知含量的樣品約1g,共6份,分別精密加入羥基紅花黃色素A對照品溶液適量,按“2.2.2”項下方法操作,測定含量,并計算回收率。結(jié)果見表1。羥基紅花黃色素A平均回收率(n=9)為100.1%。

        表1 朱格倫烏日-6中羥基紅花黃色素A的回收率

        2.9 樣品測定:取朱格倫烏日-6,按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,在上述色譜條件下進(jìn)樣分析,記錄色譜峰面積,計算含量。結(jié)果見表2。

        表2 朱格倫烏日-6中羥基紅花黃色素A的含量測定結(jié)果(n=3)

        3 討 論

        3.1 試驗對提取方法、提取時間進(jìn)行了考察,結(jié)果采用50%甲醇超聲提取40min進(jìn)行供試品溶液的制備,該法提取效能高,干擾物質(zhì)少,操作簡單、快捷。

        3.2 配制一定濃度的羥基紅花黃色素A對照品溶液,分別在200~500nm波長內(nèi)進(jìn)行全掃描,羥基紅花黃色素A在403nm處有較強的紫外吸收。實驗選擇403nm進(jìn)行測定。

        3.3 本文建立了一種準(zhǔn)確可靠、專屬性強、簡單快捷的定量方法,通過對黃芩苷的含量測定,達(dá)到控制該制劑質(zhì)量的目的。

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