張辰露，吳三橋，韓 豪，周建軍，緱慧君

（1.陜西省資源生物重點實驗室，陜西漢中723000；2.漢中市藥品檢驗所，陜西漢中 723000）

秦巴山區(qū)不同產(chǎn)地娑羅子中七葉皂苷的含量比較Δ

張辰露1＊，吳三橋1，韓 豪1，周建軍1，緱慧君2

（1.陜西省資源生物重點實驗室，陜西漢中723000；2.漢中市藥品檢驗所，陜西漢中 723000）

目的：對秦巴山區(qū)10個不同產(chǎn)地娑羅子藥材中的七葉皂苷成分進行分析比較。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為Hypersil ODSC18（100 mm×4.6 mm，5μm），檢測波長為220 nm，流動相為乙腈-0.02%磷酸溶液（35∶65，V/V），流速為1 mL·min－1，柱溫為20℃。結(jié)果：10個不同產(chǎn)地樣品中七葉皂苷A的含量均高于七葉皂苷B，且均符合2010年版《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)（七葉皂苷A＞0.7%）。產(chǎn)自略陽的樣品中七葉皂苷A和七葉皂苷B的含量最高，分別為28.46和19.77 mg·g－1（生藥）；其次為康縣、留壩的樣品，寧強、勉縣、寧陜、鎮(zhèn)坪的樣品含量居中，而平利、西鄉(xiāng)、洋縣的樣品含量則相對較低。10個產(chǎn)地樣品中七葉皂苷A含量在1.16%～2.85%之間，七葉皂苷B含量在0.89%～1.98%之間，平均值分別為1.92%和1.43%，其中七葉皂苷A與七葉皂苷B的含量比在1.14～1.45之間。結(jié)論：秦巴山區(qū)不同產(chǎn)地娑羅子中七葉皂苷含量和組成存在明顯差異，種源、生態(tài)環(huán)境等因素對娑羅子藥材有效成分的積累過程影響較大，控制藥材產(chǎn)地來源對保障娑羅子藥材質(zhì)量的穩(wěn)定性有著重要意義。

娑羅子；七葉皂苷；秦巴山區(qū)；產(chǎn)地；高效液相色譜法

娑羅子為七葉樹科植物七葉樹Aesculuschinensis Bge.、浙江七葉樹A.chinensis Bge.var.chekiangensis（Hu et Fang）Fang和天師栗A.wilsonii Rehd.的干燥成熟種子。娑羅子的主要成分為皂苷類化合物，具有疏肝、理氣、和胃、止痛、殺蟲之功效，還具有抗炎、消腫脹、抗?jié)B出、抗腫瘤作用[1]。七葉樹原產(chǎn)于黃河流域，通常分布在海拔1 000 m以下的山坡和林中，我國以河北、陜西、山西、河南、江蘇、浙江等地分布較多，多野生、散生，呈零星分布。我國的陜西秦嶺、湖北神農(nóng)架是娑羅子的主產(chǎn)區(qū)，為七葉樹的最佳適生區(qū)[2]。除具有藥用價值之外，七葉樹也是世界上著名觀賞樹種之一，因市場需求逐年增大，各地人工種植發(fā)展迅速[3]。

近年來，對娑羅子的研究主要集中在化學(xué)成分的分析與分離提純技術(shù)、藥理學(xué)、栽培技術(shù)以及加工技術(shù)等方面，對于原藥材的品質(zhì)差異性分析還鮮有報道[2～6]。然而多種因素如種質(zhì)資源、生長環(huán)境和種植技術(shù)的差異都可能影響娑羅子的藥材品質(zhì)，因此筆者對秦巴山區(qū)的娑羅子資源進行調(diào)查取樣，采用高效液相色譜（HPLC）法對其有效成分七葉皂苷進行分析比較，以期為今后中藥材產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供參考。

1 儀器與試藥

HP1100 HPLC儀、G1314AVWD紫外檢測器（美國Agilent公司）；R201BL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；FA2004電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；302恒溫干燥箱（山東濰坊醫(yī)療器械公司）；TTL-10A超純水器（北京同泰聯(lián)科技發(fā)展公司）；KQ5200DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

七葉皂苷鈉對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：10346-0001，其中七葉皂苷A為總皂苷的43.5%，七葉皂苷B為32.0%，干燥失重11.8%）；甲醇、乙腈為色譜純，磷酸為優(yōu)級純，乙醇、乙酸乙酯等為分析純。娑羅子于2008年10－11月分別采自陜西略陽、留壩、洋縣、寧強、勉縣、西鄉(xiāng)、寧陜、平利、鎮(zhèn)坪縣與甘肅康縣，共10個產(chǎn)區(qū)，選擇單粒直徑不小于2.5 cm、成熟飽滿的娑羅子為樣品，均經(jīng)陜西省資源生物重點實驗室楊培君教授鑒定為真品。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品處理

從每個產(chǎn)地樣品中挑選大小均一的娑羅子若干，自然晾曬后于45℃烘箱中烘干15 h，粉碎，過60目篩，密封保存，備用。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液 精密稱取娑羅子樣品粉末1.5 g，置索氏提取器中，加乙醚加熱回流1 h，棄去乙醚液，藥渣連同濾紙筒揮干溶劑后置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇80 mL，超聲處理（功率：160 W，頻率：40 kHz）30 min，濾過，濃縮，以正丁醇萃取，減壓濃縮，低溫揮干溶劑，以甲醇定容至50 mL，搖勻，待測[1]。

2.2.2 對照品溶液 精密稱取七葉皂苷鈉對照品50 mg，以甲醇定容至50 mL，搖勻，得濃度為1.0 mg·mL－1的對照品溶液，待測。

2.3 色譜條件

參照《中國藥典》方法[1]并進行優(yōu)化。色譜柱：Hypersil ODSC18（100 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：乙腈-0.02%磷酸溶液（35∶65，V/V）；檢測波長：220 nm；流速：1 mL·min－1；進樣量：10μL；檢測時間：16.5 min；柱溫：20℃。在此條件下，樣品中七葉皂苷主要組分可達到基線分離。色譜見圖1。

2.4 方法學(xué)考察

圖1 高效液相色譜圖A.七葉皂苷鈉對照品；B.供試品；1.七葉皂苷A；2.七葉皂苷B ；3.七葉皂苷C；4.七葉皂苷DFig 1 HPLC chromatogramsA.aescine sodium control；B.test sample；1.escin A；2.escin B；3.escin C；4.escin D

2.4.1 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液適量，加甲醇制備成質(zhì)量濃度分別為0.10、0.30、0.50、0.80、1.00 mg·mL－1的系列梯度溶液，各進樣10μL，按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得七葉皂苷A和七葉皂苷B的回歸方程、r和線性范圍，詳見表1。

表1 七葉皂苷A和七葉皂苷B的線性關(guān)系考察結(jié)果Tab 1 Results of linear relationship of escin A and B

2.4.2 精密度試驗 精密吸取0.80 mg·mL－1的對照品溶液適量，按上述色譜條件重復(fù)進樣6次，測定峰面積。結(jié)果，七葉皂苷A和七葉皂苷B的RSD分別為1.23%和1.41%（n均為6），表明儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，按上述色譜條件分別于0、3、6、9、12、15、18、21、24 h進樣10μL，測定峰面積。結(jié)果，七葉皂苷A和七葉皂苷B的RSD分別為2.04%和1.58%（n均為9），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4 重復(fù)性試驗 精密稱取娑羅子樣品粉末適量，共6份，分別按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件進樣10μL，測定樣品含量。結(jié)果，七葉皂苷A和七葉皂苷B的平均含量分別為24.36、17.29 mg·g－1（生藥），RSD分別為2.01%和1.85%（n均為6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品（產(chǎn)地：勉縣，含量：七葉皂苷A為19.51 mg·g－1（生藥），七葉皂苷B為14.01 mg·g－1（生藥））0.10 g，置于100 mL容量瓶中，精密加入質(zhì)量濃度為2.485μg·mL－1的對照品溶液（七葉皂苷A占43.5%，七葉皂苷B占32.0%）1 mL，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，再稀釋100倍后按上述色譜條件進樣測定，計算加樣回收率，結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）Tab 2 Results of recovery tests（n＝6）

2.5 樣品含量測定

取10個不同產(chǎn)地樣品，分別按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，照上述方法測定樣品中七葉皂苷A和七葉皂苷B的含量，重復(fù)3次，取平均值，結(jié)果見表3。

表3 不同產(chǎn)地娑羅子中七葉皂苷組分含量測定結(jié)果（n＝3）Tab 3 Contents and ingredient of escin in Aesculi Semen from different producing areas（n＝3）

3 討論

由HPLC圖可看出，娑羅子中七葉皂苷類成分主要有4種，分別為七葉皂苷A、B、C和D，其他組分含量均較低。秦巴山區(qū)10個縣所產(chǎn)的娑羅子中七葉皂苷A的含量均大于七葉皂苷B，所有產(chǎn)地樣品均符合《中國藥典》規(guī)定（七葉皂苷A含量＞0.7%[1]）。其中，產(chǎn)自略陽的藥材中七葉皂苷A和七葉皂苷B的含量最高，分別為28.46和19.77 mg·g－1（生藥）；其次為產(chǎn)自康縣、留壩的樣品，寧強、勉縣、寧陜、鎮(zhèn)坪的樣品含量居中，而平利、西鄉(xiāng)、洋縣的樣品中七葉皂苷A和七葉皂苷B的含量相對較低。10個產(chǎn)地樣品中七葉皂苷A的含量范圍為11.57～28.46 mg·g－1（生藥），七葉皂苷B的含量范圍為8.89～19.77 mg·g－1（生藥），平均值分別為19.16和14.34 mg·g－1（生藥）。

秦巴山區(qū)中所分布的娑羅子主要來源于七葉樹。本試驗結(jié)果表明，秦巴山區(qū)10個不同產(chǎn)地的娑羅子中七葉皂苷A和七葉皂苷B不僅在含量上差異較大，而且七葉皂苷A與七葉皂苷B的比值也不同，其中康縣、略陽和留壩的比例為1.45、1.44和1.40，西鄉(xiāng)、洋縣、寧強、勉縣的比例在1.29～1.39之間，而鎮(zhèn)坪、平利、寧陜的比例在1.14～1.25之間。費學(xué)謙等[7，8]的研究表明，不同品種來源的娑羅子中七葉皂苷各個組分的比例存在差異。另有藥理學(xué)研究表明，七葉皂苷A、B、C、D的比例與藥效有關(guān)，當(dāng)它們的比例不同時，其活性和毒性也不同[9]。藥材種源、生態(tài)環(huán)境等因素的差異對娑羅子有效成分的積累過程影響較大，直接影響著藥材的內(nèi)在品質(zhì)[10]。因此，控制藥材產(chǎn)地來源對保障娑羅子藥材質(zhì)量的穩(wěn)定性有著重要意義。通過分析比較秦巴山區(qū)娑羅子中有效成分的構(gòu)成，可了解秦巴山區(qū)娑羅子資源概況，以期為藥源地的選擇提供參考。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：275.

[2] 徐 文，陳西倉，張振綱.七葉樹的栽培技術(shù)與開發(fā)利用[J].中國野生植物資源，2003，22（3）：34.

[3] 劉順良，陳敬然，王文森.娑羅子的化學(xué)成分藥理及臨床研究進展[J].時珍國醫(yī)國藥，2004，15（8）：528.

[4] 田曉麗.七葉皂苷的藥理學(xué)研究進展[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2009，11（5）：76.

[5] 任曉蕾，張海英，李玉珍，等.七葉皂苷鈉治療急性腦卒中有效性和安全性的Meta分析[J].中國藥房，2011，22（11）：1 029.

[6] 張辰露.不同炮制方法對娑羅子飲片質(zhì)量的影響[J].中成藥，2010，32（9）：1 548.

[7] 費學(xué)謙，丁 明，周志春，等.七葉樹種子皂苷含量及其組分的產(chǎn)地變異分析[J].林業(yè)科學(xué)研究，2005，18（2）：227.

[8] 郭 杰，徐 嵬，楊秀偉.娑羅子中三萜皂苷成分的HPLC定量分析[J].中草藥，2007，38（5）：767.

[9] 薛云麗，侯金玲，王 芃，等.不同組成比例的七葉皂苷鈉抗炎作用及急性毒性研究[J].齊魯藥事，2009，28（5）：305.

[10] 馬 鵬，李隆云，喻 強，等.不同產(chǎn)地仙茅藥材的HPLC指紋圖譜研究[J].中國藥房，2011，22（39）：3 692.

Comparison of the Contentsof Escin in Aesculi Semen from Different Originsin Qinba Mountain Area

ZHANG Chen-lu，WU San-qiao，HAN Hao，ZHOU Jian-jun
（Shaanxi Key Laboratory of Bio-resource，Shaanxi Hanzhong 723000，China）
GOU Hui-jun
（Hanzhong Institute for Drug Control，Shaanxi Hanzhong 723000，China）

OBJECTIVE：To compare the contents of escin in Aesculi Semen from different origins in Qinba mountain area.METHODS：HPLC method was adopted.The determination was performed on Hypersil ODS C18（100 mm×4.6 mm，5μm）column with mobile phase consisted of acetonitrile-water-0.02%phosphoric acid（35∶65，V/V）at flow rate of 1 mL·min－1.The detection wavelength was set at 220 nm and the column temperature was 20℃.RESULTS：The content of escin A（＞0.7%）was higher than that of escin B in all samples from 10 different producing areas in accordance with pharmacopeia（2010 edition）.The contents of escin A and escin B from Lüeyang county were 28.46 mg·g－1and 19.77 mg·g－1and were the highest，followed by samples from Kangxian and Liuba，Ningqiang，Mianxian，Ningshan，Zhenping，and the samples from Pingli，Xixiang and Yangxian were lower than them.The range of escin A content from 10 different producing areas was 1.16%～2.85%，the range of escin B content was 0.89%～1.98%，and their averages were 1.92%and 1.43%.The ratios of escin A and escin B were 1.14～1.45.CONCLUSION：The contents and compositions of escins in Aesculi Semen from different origins in Qinba mountain area are significant.The influence of provenance，ecological environment and other factors to the accumulation of effective components in Aesculi Semen is obviously.To select material habitat is very important for stability guarantee of Aesculi Semen.

Aesculi Semen；Escin；Qinba mountain area；Producing area；HPLC

R284.1；R927.2

A

1001-0408（2012）35-3323-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.35.21

2011-09-01

2012-01-09）