王鴻飛 徐 超 周明亮 賀一君 邵興鋒

山核桃油改善小鼠記憶功能的研究

王鴻飛 徐 超 周明亮 賀一君 邵興鋒

(寧波大學食品科學與工程系，寧波 315211)

對山核桃油改善小鼠的記憶功能進行了評價和研究。通過空間航行定位試驗，各試驗組的逃避潛伏期和對照組比較，均有統(tǒng)計學意義(P＜0．05)，其中，低劑量組(34．86±16．45)、高劑量組(30．94±15．36)和對照組(46．39±10．89)比較，有顯著性差異(P＜0．01);在小鼠空間探索試驗中，各劑量組與對照組比較，小鼠穿越平臺次數沒有顯著性差異，在東北象限的停留時間有顯著性差異(P＜0．05)，其中，高劑量組(42．35±12．26)差異有高度統(tǒng)計學意義(P＜0．01)，與定位航行試驗結果基本一致，說明各劑量組小鼠的空間記憶保持能力及空間定位的準確性強于對照組。試驗結果表明，山核桃油對小鼠的記憶能力有顯著的改善作用。

山核桃油 小鼠 改善記憶

山核桃是胡桃科(Juglandaceae)，山核桃屬(Carya Nutt)植物［1］，廣泛分布于北美東部和亞洲東南部［2］，在我國主要分布于浙、皖兩省交界的天目山區(qū)周圍。其中，臨安市的種植面積和年均產量分別約占全國的46．26%和46．77%，是山核桃的主產區(qū)［3］。臨安山核桃(Carya cathayensis sarg．)含仁46%左右，核仁含油率為69．8%～74．01%，油脂含有很高的油酸、亞油酸等不飽和脂肪酸，并且含有豐富的對人體有必要作用的鈣、鎂、磷、鋅、鐵和VB1、VB2、VE、黃酮類物質、磷脂等活性物質，據報道山核桃油具有高效的營養(yǎng)保健價值［4］。常食用山核桃、仁、油產品，具有增強記憶、降低血脂、預防冠心病等功效［5］。

1 材料與方法

1．1 試驗材料

山核桃油:本試驗超臨界CO2萃取法制得，根據氣相色譜分析，主要成分為油酸、亞油酸和亞麻酸等，質量分數分別為68．01%、23．21%和2．11%，其中不飽和脂肪酸占總脂肪酸含量的93．55%［13］。試驗基礎飼料:由浙江省動物實驗中心提供，主要組分為玉米粉(37%)、豆粕(34%)、麩皮(23%)、酵母粉(5%)及食鹽(1%)等。Morris水迷宮:是直徑150 cm，高50 cm的黑色圓形水池，通過記錄得到平均逃避潛伏期、穿過區(qū)域次數和停留時間等參數，判斷小鼠的空間辨別性學習記憶能力。將水池等分為4個象限，如圖1所示，分別稱西北、西南、東南及東北象限，在東北象限正中離池壁33 cm處放一個直徑9 cm，高29 cm的圓形平臺，平臺頂低于水面1 cm。

圖1 Morris水迷宮

1．2 試驗動物及分組

ICR雄性健康小鼠:浙江省實驗動物中心提供，40只，平均體重20 g。合格證號:SOXK(浙)20080032。

按體重隨機區(qū)組分成4組，即對照組，高、中、低劑量組，每組10只，試驗期為6周，飲水充足。各組劑量為:①低劑量組(1組):將山核桃油加入基礎飼料中，樣品質量分數為2．5%(每天每千克體重5．5 mL樣品)，相當于人體推薦量的5倍;②中劑量組(2組):將山核桃油加入基礎飼料中，樣品質量分數為5%(每天每千克體重11 mL樣品)，相當于人體推薦量的10倍;③高劑量組(3組):將山核桃油加入基礎飼料中，樣品質量分數為10%(每天每千克體重22 mL樣品)，相當于人體推薦量的20倍;④對照組(4組):喂飼基礎飼料。

1．3 空間學習記憶試驗

以Morris水迷宮試驗檢測小鼠的空間學習記憶能力，水溫(22±1)℃。①定位航行試驗:試驗前一天將小鼠放入水中自由游泳2 min，使其熟悉迷宮環(huán)境。試驗歷時4 d，每天訓練4次。訓練開始時，將平臺置于東北象限，分別從池壁4個象限的中點將小鼠面向池壁放入水池，讓其尋找水池中唯一安全的平臺，記錄小鼠找到平臺的時間，4次訓練將小鼠分別從不同象限放入水中，找到平臺后在臺上保持15 s，至60 s找不到平臺，即將其引導至平臺上，同樣保持15 s，潛伏期記為60 s。取試驗前4天逃避潛伏期，計算其均數。②空間探索試驗:第5天進行空間探索試驗，撤除平臺，記錄小鼠在2 min中內穿過平臺所在位置的次數及停留在東北象限的時間［6－12］。

1．4 統(tǒng)計學處理

應用SPSS13．0統(tǒng)計軟件進行分析，數據以珔X±s表示，各組之間的比較采用重復測量數據的多因素方差分析。

2 結果與分析

2．1 定位航行試驗

定位航行試驗結果見表1、表2、圖2。

表1 小鼠逃避潛伏期試驗數據(n=10，珔X，單位:s)

表2 小鼠逃避潛伏期試驗象限合并數據(n=10，珔X±s，單位:s)

圖2 小鼠逃避潛伏期試驗結果

從表2和圖2中可以看出，試驗小鼠對環(huán)境參照物需要有個熟悉辨認過程，各組小鼠逃避潛伏期從第1天到第4天依次縮短。各試驗組的逃避潛伏期和對照組比較，均有統(tǒng)計學意義(P＜0．05)，其中，低劑量組(34．86±16．45)、高劑量組(30．94±15．36)和對照組(46．39±10．89)比較，有差異具有高度統(tǒng)計學意義(P＜0．01)。試驗結果表明山核桃油對小鼠的記憶能力有顯著的改善作用。

2．2 空間探索試驗

小鼠空間探索試驗及體重變化結果分別見表3和表4。

表3 小鼠空間探索試驗結果(n=10，珔X±s)

表4 試驗小鼠體重變化

從表3中可以看出，在小鼠空間探索試驗中，各劑量組與對照組比較，小鼠穿越平臺次數均無顯著差異，但劑量組小鼠穿越平臺次數明顯增多;與對照組比較，劑量組小鼠在東北象限停留時間均有顯著性差異(P＜0．05);其中，高劑量組小鼠(42．35±12．26)在東北象限停留時間明顯延長，具有高度統(tǒng)計學意義(P＜0．01)，可知，空間探索試驗與定位航行試驗結果基本一致，說明山核桃油對小鼠的記憶能力有增強作用，且高劑量作用更為明顯。由表4可以看出，各試驗組小鼠初始體重無明顯差異，在試驗末期，各組小鼠體重均有增長。與對照組比較，高劑量組小鼠體重增加顯著(P＜0．05)。

3 討論與結論

山核桃油含有很高的不飽和脂肪酸，其中單不飽和脂肪酸包括油酸68．01%、花生烯酸0．13%，多不飽和脂肪酸包括亞油酸(LA)23．21%、亞麻酸2．11%，并且含有一定量的磷脂［13］。

迷宮試驗是動物智力測試常用方法，一般包括Y形迷宮試驗、電迷宮試驗、水迷宮試驗等。Morris水迷宮試驗(Morris Water Maze)是研究動物記憶能力非常有效的方法之一，是一種讓試驗動物學習在水中尋找隱藏平臺并通過分析其尋找平臺所用時間和所走路徑判斷其記憶功能好壞的試驗方案，是一種研究空間學習記憶的標準試驗。

本試驗表明，山核桃油對小鼠的記憶能力有顯著改善作用。多不飽和脂肪酸與磷脂結合參與生物體膜構成，研究顯示多不飽和脂肪酸是構成腦細胞線粒體、微粒體和突觸體的基本元素，直接影響人的生長發(fā)育，對于改善大腦機能，提高記憶力和學習能力均有很好的功效。另外，亞油酸可以在人體內經長鏈不飽和化反應之后，變?yōu)榛ㄉ南┧岵⒗^而轉為二十二碳五烯酸(n－3C22:5，DPA)，DPA再經去飽和酶轉化為二十二碳六烯酸(n－3C22:6，DHA)。LA和DHA本身就是組成腦細胞和腦神經的重要物質，是腦細胞和腦神經生長發(fā)育、保持正常運作的必需物質。它還可以促進神經網絡的形成，改善心腦血管功能和大腦供血狀況，使大腦的自我營養(yǎng)體系得以完善，并能對因年齡等因素萎縮、死亡的腦細胞起到明顯的修復作用。因此，多不飽和脂肪酸對記憶、思維等智力過程至關重要，這可能是富含多不飽和脂肪酸堅果類食品具有改善記憶作用的理論依據［14－15］。陳文雄等［16］研究了n－3系列多不飽和脂肪酸和?；撬釋Υ笫竽X神經發(fā)育的影響，?；撬嶙鳛樯窠浾{節(jié)因子，調節(jié)突觸形成的電活動，促進突觸形成，試驗證明n－3系列多不飽和脂肪酸是突觸體膜中磷脂酰乙醇胺的主要成分，n－3系列多不飽和脂肪酸可促進神經細胞對牛磺酸的攝取，從而具有健腦益智作用。Lessard等［17］研究表明，n－3系列脂肪酸，尤其是α－亞麻酸、EPA和DHA對動物的智力發(fā)育和人類健康有著很有意義的作用。

細胞是機體的基本單位，而磷脂是生物細胞不可缺少的成分。據研究報道，磷脂能促進胎兒大腦發(fā)育，增強嬰幼兒智力;顯著增強記憶，提高學生的學習效率;對防治中年以后的記憶力下降、老年性癡呆癥及神經異常等老年性神經疾病也有效［18－20］?？傊字欣谙?、增強記憶、提高學習能力。

結果還表明，與對照組比較，各劑量組改善小鼠記憶效果顯著，各劑量組之間并沒有呈現出明顯的量效關系，這可能是由于分組時所造成的實驗動物的差異、試驗環(huán)境對動物的影響等多方面的因素。

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Studies on Improving the Memory Capacity of Mice

Wang Hongfei Xu Chao Zhou Mingliang He Yijun Shao Xingfeng
(Ningbo University Department of Food Science and Engineering，Ningbo 315211)

The effect of carya kernel oil on the improvement of memory capacity of mice was evaluated and studied．The results were as following，Concerning the memory capacity of mice，comparing with control group，all dose groups had statistical significance(P＜0．05)．In orientation sailing experiment，it was revealed that escape latencies of dose group(low dose group P＜0．01，high dose group P＜0．01，middle dose group P＜0．05)are all shorter than control group．In spatial memory trial experiment，comparing with control group，the number of crossing the platform had not statistical significance，staying time in northeast quadrant of dose group(high dose group P＜0．01，low dose group P＜0．05，middle dose group P＜0．05)are all more than control group，the result is the same as the result of the orientation sailing experiment．Thus the experiment results of the research showed that carya kernel oil could greatly improve the memory capability of mice．

carya kernel oil，mice，improving the memory

TS222+．1

A

1003－0174(2012)07－0063－05

寧波大學人才基金(2006244)

2011－09－19

王鴻飛，男，1964年出生，教授，農產品加工、食品科學