李衛(wèi)東

（德州學(xué)院農(nóng)學(xué)系，山東 德州253013）

曲霉菌病是由曲霉菌定居、繁殖于禽類，尤其常見于雞、火雞、鴨、鵝和鴿等體內(nèi)所引起的真菌感染性疾病。幼禽常引起暴發(fā)，發(fā)病率和死亡率均較高，而成年禽則多為散發(fā)，以組織器官（特別是肺和氣囊）發(fā)生炎癥和小結(jié)節(jié)為特征。早在19世紀(jì)就有鳥類感染霉菌的報(bào)道，1842年Rayer首次發(fā)表了由白曲霉菌引起的曲霉菌病，1863年其他學(xué)者發(fā)現(xiàn)了由煙曲霉菌引起的曲霉菌病。近年我國(guó)各地報(bào)道了很多養(yǎng)禽場(chǎng)曲霉菌病的發(fā)病情況，但是土雞的發(fā)病少見。2011年9月在德州市夏津縣某土雞養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)生了曲霉菌病病例，報(bào)道如下。

1 發(fā)病情況

某雞養(yǎng)殖場(chǎng)8月下旬購(gòu)回選育的土雞雛3 000只，在引進(jìn)后按常規(guī)方法投藥預(yù)防雞白痢，使用常規(guī)疫苗預(yù)防雞新城疫、腔上囊病等。第14周齡開始出現(xiàn)發(fā)病和死亡，因養(yǎng)殖戶認(rèn)為外觀似雞白痢癥狀，馬上使用治療量的抗菌藥物拌料飼喂，但是，疾病不僅沒有控制住，反而病情加重，死亡率逐漸增高，發(fā)病6 d后死亡數(shù)達(dá)到242只，死亡率為8.07%。獸醫(yī)人員發(fā)現(xiàn)，飼料是自配飼料，飼料袋包裝不具備防潮防水作用，飼料袋直接堆放在飼料加工間和育雛室旁的飼料貯藏間，加工貯藏間的地面沒有水泥結(jié)構(gòu)，不具備防潮作用，打開飼料袋發(fā)現(xiàn)飼料有結(jié)塊變色，有發(fā)霉味。

2 臨床癥狀

雛雞發(fā)病初期精神沉郁，兩翅下垂，閉目呆立一處，食欲減少甚至廢絕，對(duì)外界反應(yīng)淡漠。隨后出現(xiàn)呼吸困難，喘氣，頭頸伸直，張口呼吸，有時(shí)可見甩頭，有啰音，冠髯發(fā)紺。個(gè)別雛雞眼睛感染，瞬膜下形成黃白色干酪樣小球狀物，眼瞼突出。有下痢癥狀，最后倒地死亡，頭向后彎曲，喙發(fā)紫。檢查采食量與死亡的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，采食量越多的雞只，死亡速度越快。

3 剖檢病變

剖檢9例病死雞，發(fā)現(xiàn)本次雞感染病變主要見于肺和氣囊。肺臟可見典型的霉菌結(jié)節(jié)，從粟粒到綠豆大小不等，結(jié)節(jié)呈灰白色、黃白色或淡黃色，均勻散布在整個(gè)肺臟，捏上去質(zhì)地較硬。肺臟彈性消失，質(zhì)地變硬。氣囊壁、腹腔和內(nèi)臟漿膜也有與肺臟相似的霉菌結(jié)節(jié)，切面有層狀結(jié)構(gòu)，中心為干酪樣壞死組織，內(nèi)含絲絨狀菌絲體。病程較長(zhǎng)者，氣囊增厚，表面有白色的霉菌性假膜和墨綠色的曲霉菌落，形成鈣化灶。少部分雞在肝、心、腎和脾臟也見到少量類似的結(jié)節(jié)。

4 診斷

4.1 根據(jù)發(fā)病日齡、飼料發(fā)霉、群發(fā)、癥狀特點(diǎn)以及剖檢發(fā)現(xiàn)曲霉菌結(jié)節(jié)初步診斷為禽曲霉菌病。

4.2 病理組織學(xué)檢查 發(fā)現(xiàn)病雞發(fā)生彌漫性肺炎，病灶呈纖維素性肺炎和卡他性肺炎，肺泡和支氣管充滿黏液、核碎片、纖維素、白細(xì)胞等炎癥細(xì)胞和霉菌菌絲。

4.3 取結(jié)節(jié)病灶壓片直接顯微鏡鏡檢 取肺部結(jié)節(jié)，用兩塊載玻片壓碎，加一滴生理鹽水，在顯微鏡下觀察見有分隔的菌絲，但沒有見到成串分生孢子和頂囊。

4.4 取霉斑表面覆蓋物涂片鏡檢 發(fā)現(xiàn)有球狀成串分生孢子，孢子柄短，頂囊呈燒瓶狀，連接在縱橫交錯(cuò)的分隔分支的菌絲上。

4.5 分離培養(yǎng) 取霉菌結(jié)節(jié)病灶，接種于薩布勞氏（Sabouraud）培養(yǎng)基，經(jīng)37℃培養(yǎng)10～12 h，可見白色致密絲絨狀菌落。經(jīng)24～48 h培養(yǎng)后，菌落形成大量孢子，其中心區(qū)淺藍(lán)色，表面深綠色、灰綠色甚至為黑色絲絨狀，而菌落邊緣呈白色，取菌落涂片染色鏡檢，見頂囊長(zhǎng)出分生孢子鏈，菌絲、孢子梗和孢子的形態(tài)與體內(nèi)霉斑所見的霉菌形態(tài)相同。

4.6 動(dòng)物試驗(yàn) 將分離到的煙曲霉接種于20日齡雛鴿4只，胸肌注射，4 d后發(fā)病，發(fā)生癥狀及病理變化與雛雞相同。

4.7 飼料霉菌檢查 取1 g飼料樣品，加9 mL生理鹽水，搖勻，吸取上清液0.2 mL，接種于薩布勞氏瓊脂平板2個(gè)，培養(yǎng)3 d，檢查菌落，再換算成孢子含量，經(jīng)檢查換算，每克飼料中曲霉菌孢子含量為138個(gè)。

5 治療與處理

5.1 立即停喂發(fā)霉的飼料，全場(chǎng)檢查所有墊料、飼料原料等，處理已經(jīng)發(fā)霉的各種材料物品，保持墊料與環(huán)境的干燥，注意通風(fēng)防潮，嚴(yán)防發(fā)霉。

5.2 做好周圍環(huán)境、雞舍、用具等清洗消毒工作，每天帶雞消毒1次。

5.3 用制霉菌素拌料，雛雞按5 000 IU/只，每天2次，連用3～5 d。食欲廢絕的重癥患雛，適當(dāng)增加藥量，直接灌服，連用3～5 d。

5.4 飼料中添加多種維生素，連用5 d，增加機(jī)體的抗病力。

5.5 每天用1次阿莫西林飲水，連用5 d，防止其他疾病的繼發(fā)感染。

通過以上治療與預(yù)處理方法的應(yīng)用，土雞群死亡數(shù)量明顯降低，4 d左右控制了病情。

表2 7株動(dòng)物源性大腸桿菌對(duì)6種抗菌藥物最低抑菌濃度 （MICμg/mL）值

多重耐藥株的大量出現(xiàn)，可能與耐藥性質(zhì)粒［2］、菌體細(xì)胞膜通透性，菌體上存在的主動(dòng)外排系統(tǒng)有關(guān)［3－5］。菌體細(xì)胞膜通透性的改變僅能引起低程度的耐藥，多重耐藥主要與存在于膜上的主動(dòng)外排系統(tǒng)有關(guān)，菌體細(xì)胞膜通透性的改變與主動(dòng)外排系統(tǒng)的超量表達(dá)共同作用可引起細(xì)菌對(duì)多種抗菌藥物高頻率高水平耐藥，耐藥性質(zhì)粒的存在可使多重耐藥水平提高數(shù)倍。大腸桿菌膜上存在Ecr、EmrE、EmrAB、EmrD、QacE、AcrAB、AcrEF等主動(dòng)外排系統(tǒng)。其中染色體DNA上的AcrAB基因編碼的AcrAB蛋白是最主要的主動(dòng)外排系統(tǒng)，可完成多種藥物的外輸，如果使該系統(tǒng)失活，則菌株即從多重耐藥狀態(tài)變?yōu)橄鄬?duì)敏感狀態(tài)。多重耐藥性的產(chǎn)生是由于外輸泵轉(zhuǎn)錄增加或相應(yīng)的mRNA穩(wěn)定性增加所致。AcrAB基因的轉(zhuǎn)錄水平增加相應(yīng)的mRNA穩(wěn)定性增加引起的多重耐藥程度和范圍尚待進(jìn)一步研究。

臨床應(yīng)用較多的慶大霉素、鏈霉素、復(fù)方新諾明、氟哌酸等的耐藥株已顯著增加，只有極少使用的頭孢氨芐對(duì)大腸桿菌的抑制作用強(qiáng)，因而，應(yīng)盡量避免使用臨床應(yīng)用較多的藥物，一方面影響臨床治療效果，另一方面促進(jìn)耐藥因素的擴(kuò)散。

［1］ 王晶鈺，于艷榮，張彥明，等.雞源大腸桿菌某些生物學(xué)特性與致病力相關(guān)特性的研究［J］.中國(guó)家禽，1999，11（6）：5－10.

［2］ 趙靜，楊漢春，查振林.規(guī)?；i場(chǎng)大腸桿菌耐藥性監(jiān)測(cè) ［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，1998，24（11）：12－13.

［3］ 張小林，李家泰.主動(dòng)外排系統(tǒng)在大腸桿菌中的分布與表達(dá)［J］.中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，1999，15（3）：171－174.

［4］ Martin J，Everett，Yu Fang Jin，etal.J V Piddock Conrtribution of Individual Mechanisms to Fluoroquinolone Resistance in 36Escherichia coli Strains Isolatated from Humans and Animals［J］.Antimicrob Agents Chemother，1996，40：2380－2385.

［5］ John D，Goldman，David G，etal.Multiple Antibiotic Resisrance（mar）Locus Protects Escherichia coli from Rapid Cell Killing by Fluoroquinolones［J］.Antimicrob Agents Chemother，1996.40：1266－1268.