陳振威，多婷，楊玉瑩 顧玉芳，溫凌子，梁雄燕

(長江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，湖北荊州434025)

靈山麻雞內(nèi)臟型馬立克氏病并發(fā)大腸桿菌病的調(diào)查與診斷

陳振威，多婷，楊玉瑩 顧玉芳，溫凌子，梁雄燕

(長江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，湖北荊州434025)

對湖北省荊州市某專業(yè)土雞養(yǎng)殖場的靈山麻雞內(nèi)臟型馬立克氏病并發(fā)大腸桿菌肉芽腫病例進行了病理學(xué)和組織學(xué)診斷。系統(tǒng)剖檢顯示病雞心肌、肝臟、肺臟、胸肌及脾臟表面和內(nèi)部均有灰白色或黃白色結(jié)節(jié)。病理組織學(xué)觀察可見，病雞心、肝、脾、肺、腎及法氏囊等組織均發(fā)生不同程度的變性、壞死，顯示有大量的多形態(tài)淋巴細胞增生；同時，肝臟組織還有大量單核巨細胞、多核巨細胞浸潤及肉芽腫。細菌學(xué)檢驗可見大腸桿菌。結(jié)果顯示此病例為內(nèi)臟型馬立克氏病并發(fā)大腸桿菌病。

馬立克氏?。淮竽c桿菌肉芽腫；病理學(xué)

馬立克氏病(Marek’s disease，MD)是由皰疹病毒科(Herpesviridae)馬立克氏病病毒(Marek’s disease virus，MDV)引起的一種禽類古老接觸性傳染性腫瘤疾病[1]。主要經(jīng)過呼吸道進入體內(nèi)，以引起全身各組織器官出現(xiàn)多形態(tài)的淋巴細胞增生為特征。1907年，Marek首次發(fā)現(xiàn)該病毒。1961年，在英國科學(xué)家Biggs的倡導(dǎo)下，正式命名該病為馬立克氏病[2]。該病傳染性強，傳播速度極快，潛伏期較長，急性發(fā)病的雞場淘汰及死亡率達10%～80%，是危害養(yǎng)禽業(yè)的最重要的傳染病之一。近年的研究表明，MDV除了造成禽類機體產(chǎn)生腫瘤以外，還同時存在免疫抑制的危害[3-4]，致使被感染禽類的免疫功能受損，導(dǎo)致機體抵抗力以及對其他疫苗免疫反應(yīng)性的降低，極其容易并發(fā)或繼發(fā)感染其他病原，會造成更大的損失。

大腸桿菌性肉芽腫又稱Hjarre氏病，主要侵害成年雞和火雞，一般呈散在發(fā)生，個別雞群發(fā)病率高達75%。O4、O8、O9及O18型大腸桿菌，可引起雞小腸、盲腸、腸系膜和肝臟等處出現(xiàn)粟粒大肉芽腫結(jié)節(jié)[4]。

2012年3月，湖北省荊州市某養(yǎng)殖場林地散養(yǎng)的8000只靈山麻雞在82日齡時，雞群開始零星出現(xiàn)腹瀉、食欲不振、精神萎靡等癥狀，使用環(huán)丙沙星進行抗生素治療，療效不明顯。90～98日齡時，雞群大面積發(fā)病，病雞被毛凌亂無光，精神沉郁、體態(tài)消瘦、臥地不起，腹瀉，排土黃色糞便，被覆白色黏液，每天死亡20～30只。經(jīng)剖檢、病理組織學(xué)診斷和細菌學(xué)檢測，確診該病例為內(nèi)臟型馬立克氏病并發(fā)大腸桿菌病，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

林地散養(yǎng)的82～98日齡靈山麻雞，來源于湖北省荊州市某專業(yè)土雞養(yǎng)殖場。

1.2 方法

1.2.1 臨床調(diào)查

對發(fā)病雞群臨床癥狀和免疫狀況進行調(diào)查，記錄臨床癥狀，取典型病例進一步進行細菌學(xué)檢測和病理學(xué)診斷。

1.2.2 細菌學(xué)檢測

無菌取心血、肝組織，制備血涂片和組織觸片，進行瑞氏染色鏡檢；同時用心血和無菌肝組織，接種TSA平板進行細菌培養(yǎng)，革蘭氏染色鏡檢。

1.2.3 病理學(xué)診斷

對病雞進行系統(tǒng)剖檢，觀察各系統(tǒng)大體病變。取具有典型病變的心、肝、脾、肺、腎及法氏囊制作石蠟組織切片進行病理學(xué)診斷。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床調(diào)查情況

經(jīng)調(diào)查，雞群按照常規(guī)免疫程序進行了MDV免疫。雞群82日齡時，零星出現(xiàn)腹瀉、食欲不振、精神萎靡等癥狀，使用環(huán)丙沙星進行抗生素治療，療效不明顯。90～98日齡時，雞群大面積發(fā)病，病雞被毛凌亂無光，精神沉郁、體態(tài)消瘦、臥地不起，腹瀉，排土黃色糞便，被覆白色黏液，每天死亡20～30只。

2.2 細菌學(xué)檢測結(jié)果

血涂片、肝臟抹片，經(jīng)瑞氏染色鏡檢，可見散在分布的粉紅色、兩端鈍圓、單個或成對排列的短桿狀菌，疑似大腸桿菌。

TSA平板培養(yǎng)，單菌落涂片，革蘭氏染色鏡檢，可見短桿菌，呈革蘭氏陰性，兩鈍圓，疑似大腸桿菌。

2.3 病理變化

系統(tǒng)剖檢：剖檢典型癥狀病雞，可見肝臟高度腫大，顏色暗淡，肝組織有栗粒至蠶豆大小不一灰白色結(jié)節(jié)。肝葉被覆黃白色網(wǎng)狀纖維素性膜(圖1)；腹腔內(nèi)見乳黃色干酪狀物質(zhì)。心包腔內(nèi)有積液，心臟腫大，心肌呈灰白或淡黃色，心肌內(nèi)有黃豆大灰白色結(jié)節(jié)(圖2)。脾臟上有散在分布的粟粒狀壞死(圖3)。肺臟背面有較多的淡黃色結(jié)節(jié)(圖4)。腎臟質(zhì)脆，顏色棕紅。胸部肌肉組織中有黃豆大小的腫瘤結(jié)節(jié)，質(zhì)地硬實，切開呈現(xiàn)似卵黃狀的干酪樣。

圖1 具蠶豆大小腫瘤結(jié)節(jié)并腫大的肝臟圖2 具黃豆大灰白色結(jié)節(jié)的心肌

病理組織學(xué)觀察：肝臟在低倍鏡視野下，幾乎看不見正常結(jié)構(gòu)，肝組織中有大量的界限清晰的肉芽腫(圖5)。高倍鏡視野下，可見該結(jié)節(jié)的中央為凝固性壞死，壞死細胞核濃縮、破碎、溶解、消失，胞漿H.E.紅染，呈團塊狀。周圍可見過度增生的上皮樣細胞，細胞腫大，胞漿豐富，紅染，細胞界限不清。同時，有少量的中性粒細胞浸潤。另外，肝組織中有大量的多形態(tài)淋巴細胞增生，瘤細胞的大小和形狀均有所不同，胞核近似圓形，大小不一，深染，缺乏胞漿。同時伴有大量的單核巨噬細胞和多核巨細胞增生，可見胞體巨大，形態(tài)不規(guī)則，胞漿豐富，紅染，細胞核呈葡萄狀(圖6)。

心臟組織在低倍鏡視野下，可見散在分布的團塊狀壞死灶，周圍心肌纖維混濁不清，縱橫紊亂，著色不均，邊緣處心肌纖維完全溶解。高倍鏡視野下，心肌間質(zhì)中，有大量的多形態(tài)淋巴細胞浸潤，瘤細胞大小不一，形態(tài)各異，細胞核呈圓形或近似圓形，有的較小，深染，缺乏胞漿；有的體積較大，胞核。同時心肌壞死可見間質(zhì)中有大量的網(wǎng)狀纖維，毛細血管擴張充血，血管壁增厚(圖7)。

圖3 具彌散分布粟粒狀壞死的脾臟圖4 具淡黃色腫瘤結(jié)節(jié)的肺臟

圖5 肝組織中的肉芽腫(640×)圖6 多形態(tài)淋巴細胞大量增生的肝組織(640×)

脾臟白髓區(qū)的鞘動脈周圍網(wǎng)狀細胞疏松，有輕微的水腫，部分細胞發(fā)生壞死，細胞核溶解、消失。淋巴小結(jié)疏松，變小。紅髓區(qū)的髓竇里有散在的多形態(tài)淋巴細胞增生，細胞形態(tài)多樣，大小不均，胞核深染，胞漿色淺(圖8)。

圖7 多形態(tài)淋巴細胞大量增生的心肌間質(zhì)(640×)圖8 多形態(tài)淋巴細胞大量增生的脾臟(640×)

圖9 具顆粒變性、水泡變性及壞死的腎小管上皮細胞(640×)

腎臟的腎小球體積增大，細胞顯著腫脹，毛細血管網(wǎng)渾濁不清，腎小球嚴(yán)重缺血。部分腎小球囊中見滲出的紅細胞。腎小管上皮細胞發(fā)生了不同程度的顆粒變性、水泡變性及壞死。變性細胞腫大，胞漿內(nèi)出現(xiàn)細小顆粒，H.E.染色呈淡紅色。變性嚴(yán)重的細胞胞漿疏松呈空網(wǎng)狀。壞死細胞可見胞核溶解、消失(圖9)。

肺臟的肺泡壁增寬，有散在的多形態(tài)淋巴細胞浸潤。肺泡腔因受周圍細胞擠壓，略有縮小，腔內(nèi)無明顯的病理變化。法氏囊的淋巴濾泡結(jié)構(gòu)完整，濾泡之間有馬立克氏病瘤細胞浸潤。

3 討論

雞的腫瘤性疾病，例如馬立克氏病、禽白血病等均可引起禽類大多數(shù)內(nèi)臟器官發(fā)生腫瘤結(jié)節(jié)，眼觀難以區(qū)分，容易造成誤診，給臨床診斷及疫情防控帶來一定的難度。在病理學(xué)診斷中，應(yīng)特別注意將馬立克氏病與禽白血病加以區(qū)分。馬立克氏病的腫瘤細胞由多形態(tài)淋巴細胞構(gòu)成，其中包括成淋巴細胞、大中小淋巴細胞以及網(wǎng)狀細胞。經(jīng)典的禽淋巴細胞白血病則是以形態(tài)較為一致的成淋巴細胞為主[6]。另外，法氏囊的變化具有診病意義?；捡R立克氏病時，腫瘤出現(xiàn)在法氏囊淋巴濾泡之間[7]。而發(fā)生禽白血病時，腫瘤細胞生長在濾泡內(nèi)[8-9]。診斷中通過對發(fā)病的雞病理組織學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)腫瘤組織主要侵害肝臟、心臟、脾臟、肺臟、腎臟等，法氏囊淋巴濾泡結(jié)構(gòu)正常，濾泡之間見有腫瘤細胞生長，而在血液涂片、肝臟觸片以及病理組織石蠟切片中，均未發(fā)現(xiàn)禽白血病相關(guān)成淋巴細胞浸潤或髓細胞性瘤細胞的增生等癥狀，因此本病例應(yīng)為內(nèi)臟型馬立克氏病。另外，診斷中還利用禽白血病特異性引物H5/H7[8-10]對病雞肝臟所提取的DNA進行了PCR法擴增，未出現(xiàn)陽性的特異性片段，故排除禽白血病感染的可能。

細菌學(xué)檢查、心血涂片、肝組織觸片及心血和肝組織細菌培養(yǎng)均見革蘭氏陰性、兩端鈍圓的短桿狀細菌，結(jié)合剖檢所見肝臟包膜和各組織的肉芽腫，診斷為大腸桿菌。病理組織石蠟切片顯示，本病例肝臟組織中肉芽腫數(shù)量最多，大腸桿菌對肝臟損傷最為嚴(yán)重。肝臟組織中發(fā)現(xiàn)了大量的巨噬細胞浸潤，說明馬立克氏病引起單核巨噬細胞系統(tǒng)活躍，在肝臟中極易形成肉芽腫結(jié)節(jié)，也說明該雞群感染馬立克氏病的同時并發(fā)了大腸桿菌肉芽腫。

目前，對馬立克氏病的治療尚無特效的療法。為了控制該病的蔓延，病雞必須徹底檢出淘汰，充分隔離，徹底消滅傳染源。在該病的防控上，最有效的方法是綜合防控。臨床調(diào)查顯示該雞群進行了常規(guī)馬立克氏疫苗免疫，但是仍然爆發(fā)了此病，究竟是何種原因造成了免疫失敗，有待進一步探討。值得注意的是，接種疫苗時必須選用合格的疫苗并考慮母源抗體的影響，避免母源抗體的干擾。對于本病例雞群大腸桿菌的防控，重點仍應(yīng)是如何合理選擇和有效使用抗生素，因為林下散養(yǎng)不同于籠養(yǎng)容易控制環(huán)境衛(wèi)生。

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2012-09-25

陳振威(1987-)，男，江西萍鄉(xiāng)人，碩士生，研究方向為動物病源與分子生物學(xué)。

楊玉瑩，E-mailyangggcn@gmail.com。

10.3969/j.issn.1673-1409(S).2012.10.002

S858.31

A

1673-1409(2012)10-S005-04