袁 泉 詹正民 (武漢市第一醫(yī)院超聲科，湖北 武漢 430022)

前列腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中受多種蛋白的調(diào)節(jié)，其表達(dá)不僅與預(yù)后相關(guān)，而且對(duì)其生物學(xué)行為有重要調(diào)節(jié)作用?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2和-9是其家族的重要成員，對(duì)腫瘤的進(jìn)展有重要作用，研究顯示MMP-2和-9的表達(dá)可能與血管生成密切相關(guān)〔1，2〕。超聲檢測(cè)血流分級(jí)的基礎(chǔ)依賴于腫瘤中的新生血管，同時(shí)超聲檢測(cè)作為術(shù)前診斷的重要技術(shù)，具有無(wú)創(chuàng)，操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，而且超聲在檢測(cè)中，可以有效地判斷血流〔3〕。本文通過(guò)超聲檢測(cè)前列腺癌老年患者血流分級(jí)，觀察其與術(shù)后癌組織中MMP-2和-9的表達(dá)關(guān)系，探討術(shù)前超聲檢測(cè)的價(jià)值，以期為臨床早期診斷及指導(dǎo)治療提供幫助。

1 材料與方法

1.1 一般資料 2010年1月至2010年12月在南寧市第一人民醫(yī)院確診為前列腺癌并需要進(jìn)行手術(shù)治療的老年患者共99例，年齡60～87歲，平均70.3歲。納入均符合WHO的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理學(xué)主治醫(yī)師再次確診。

1.2 超聲檢測(cè)方法 使用ALOKA Prosound F75型超聲儀，腔內(nèi)探頭頻率6～10 MHz，分析血流分級(jí)。具體標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)：腫瘤內(nèi)無(wú)血流顯示;Ⅰ級(jí)：腫瘤內(nèi)1～2處點(diǎn)狀或條狀血流顯示;Ⅱ級(jí)：3～4條彩色血流顯示;Ⅲ級(jí)：5條以上彩色血流顯示〔4〕。

1.3 前列腺癌中MMP-2和-9的檢測(cè)方法 MMP-2和-9的濃縮液均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，依不同配比稀釋后進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇最適合的稀釋比例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)。MMP-2和-9的檢測(cè)應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)的SP法。具體步驟：脫蠟后置于自來(lái)水中放置10 min，以3%H2O2去離子水進(jìn)行孵育10 min，待高壓鍋蒸煮修復(fù)后分別滴加MMP-2或-9的一抗，室溫37℃孵育1～2 h或過(guò)夜，應(yīng)用PBS緩沖液沖洗，每次5 min，共3次;加入二抗，室溫狀態(tài)孵育20 min，PBS緩沖液沖洗，每次5 min，共3次;加入辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素，室溫狀態(tài)孵育約30 min，PBS緩沖液沖洗，每次5 min，共3次;DAB顯色后，應(yīng)用自來(lái)水進(jìn)行沖洗，蘇木素復(fù)染、脫水、透明、封片。實(shí)驗(yàn)均由同一病理科主管技師進(jìn)行操作，避免人為誤差。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SAS6.12進(jìn)行t檢驗(yàn)或χ2檢驗(yàn)，多組間定量資料比較采用方差分析，并應(yīng)用SNK法進(jìn)行兩兩比較，同時(shí)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行線性相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 前列腺癌中不同血流分級(jí)與MMP-2和-9表達(dá)陽(yáng)性率的關(guān)系 前列腺癌中MMP-2和-9的表達(dá)與不同血流分級(jí)相關(guān)，即隨著術(shù)前血流分級(jí)的增加，MMP-2和-9表達(dá)的陽(yáng)性率明顯增加(P＜0.01)。見(jiàn)表1。

2.2 前列腺癌不同臨床病理特征中血流分級(jí)與MMP-2和-9表達(dá)陽(yáng)性率的差別 不同Gleason評(píng)分、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)、Ki67表達(dá)的前列腺癌血流分級(jí)與MMP-2和-9的表達(dá)差別均顯著(P＜0.01，P＜0.000 1)。見(jiàn)表2。

2.3 前列腺癌中血流分級(jí)與MMP-2和-9表達(dá)的相關(guān)性 經(jīng)線性相關(guān)分析，血流分級(jí)與MMP-2表達(dá)的陽(yáng)性率呈正相關(guān)性(r=0.49，P=0.029 3)，血流分級(jí)與MMP-9表達(dá)的陽(yáng)性率呈正相關(guān)性(r=0.45，P=0.022 6)。

表1 前列腺癌中不同血流分級(jí)與MMP-2和-9表達(dá)陽(yáng)性率的比較( s，%)

表1 前列腺癌中不同血流分級(jí)與MMP-2和-9表達(dá)陽(yáng)性率的比較( s，%)

血流分級(jí) n MMP-2 F值 P值 MMP-9 F值 P值0級(jí) 23 25.08±6.65 11.02 0.003 9 19.48±6.64 10.06 0.009 8Ⅰ級(jí) 25 35.43±6.54 34.16±7.46Ⅱ級(jí) 26 54.53±10.79 42.64±6.51Ⅲ級(jí)25 67.57±10.03 57.65±14.54

表2 前列腺癌不同臨床病理特征中血流分級(jí)與MMP-2和-9表達(dá)陽(yáng)性率的差別( s，%)

表2 前列腺癌不同臨床病理特征中血流分級(jí)與MMP-2和-9表達(dá)陽(yáng)性率的差別( s，%)

臨床病理特征n 血流分級(jí)〔n(%)〕0～Ⅰ級(jí) Ⅱ～Ⅲ級(jí) χ2值 P值 MMP-2 t值 P值 MMP-9 t值 P值Gleason 43.694 7 ＜0.001 15.43 ＜0.000 1 12.32 ＜0.000 1≤6分 55 43(78.18)12(21.82)38.75±11.03 33.42±7.69＞7分 44 5(11.36)39(88.64)53.25±12.54 46.57±9.20 PCNA 13.763 0 0.000 2 10.85 0.002 9 11.29 0.000 2＜25% 47 32(68.09)15(31.91)39.85±8.74 33.02±9.84≥25% 52 16(30.77)36(68.23)49.86±8.93 44.35±7.64 Ki67 6.304 3 0.0120 8.54 0.010 3 9.07 0.008 6＜25% 49 30(61.22)19(38.78)40.32±7.06 33.95±8.73≥25% 50 18(36.00)32(64.00)48.75±7.39 43.53±8.29

3 討論

超聲對(duì)腫瘤的血流能較好地反映出來(lái)，已經(jīng)在惡性腫瘤術(shù)前診斷中得到應(yīng)用〔4〕，但是在前列腺癌術(shù)前分級(jí)中報(bào)道較少，而前列腺癌老年人多見(jiàn)，應(yīng)用超聲術(shù)前診斷前列腺腫瘤簡(jiǎn)便、易行，患者無(wú)痛苦，易于接受。實(shí)體腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)分為血管生長(zhǎng)前期和血管化的浸潤(rùn)性生長(zhǎng)期，在血管前期，其原發(fā)腫瘤直徑常小于3 mm，中心部位主要靠彌散作用獲得營(yíng)養(yǎng)，因此病變相對(duì)靜止，腫瘤生長(zhǎng)緩慢，當(dāng)腫瘤生長(zhǎng)進(jìn)入浸潤(rùn)性生長(zhǎng)期，此時(shí)將新生大量血管，此時(shí)影像學(xué)檢測(cè)血流將具有重要價(jià)值。當(dāng)腫瘤細(xì)胞增殖時(shí)，MMP-2和-9以酶原形式分泌到基質(zhì)中，不僅能夠在細(xì)胞表面活化其他促轉(zhuǎn)移的細(xì)胞因子，而且其還具有廣泛的底物特異性和強(qiáng)大的基質(zhì)降解功能〔5，6〕。當(dāng)腫瘤細(xì)胞惡變時(shí)，腫瘤細(xì)胞通過(guò)分泌MMP-2和-9來(lái)降解構(gòu)成基底膜的成分，從而破壞了機(jī)體防御時(shí)腫瘤浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移的自然屏障，促使腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移〔7，8〕。近來(lái)有研究顯示MMP家族對(duì)血管生成有重要促進(jìn)作用〔2〕，因此，超聲檢測(cè)血流分級(jí)可能與MMP-2和-9表達(dá)有一定的相關(guān)性。本結(jié)果顯示前列腺癌隨著血流分級(jí)的增加，MMP-2和-9表達(dá)的陽(yáng)性率明顯增加，且血流分級(jí)、MMP-2和-9的表達(dá)與腫瘤的Gleason評(píng)分、PCNA、Ki67表達(dá)密切相關(guān)，由于以上因素均與前列腺癌預(yù)后相關(guān)，因此術(shù)前檢測(cè)血流分級(jí)可能對(duì)判斷患者的預(yù)后有一定價(jià)值。超聲檢測(cè)是無(wú)創(chuàng)性檢測(cè)，能有效提供血流圖像，而且前列腺癌的癌組織中血管及血流均很豐富，也為超聲術(shù)前判斷腫瘤的生物學(xué)行為和指導(dǎo)治療提供了重要幫助。本實(shí)驗(yàn)中顯示血流分級(jí)與MMP-2和-9的表達(dá)呈正相關(guān)性，這也直接證實(shí)了二者的協(xié)同作用，這與MMP-2和-9對(duì)血管生成的促進(jìn)作用的研究結(jié)論一致，也為腫瘤血管學(xué)的超聲聲像研究提供了理論依據(jù)。綜上，術(shù)前對(duì)前列腺癌患者應(yīng)用超聲檢測(cè)血流分級(jí)，能無(wú)創(chuàng)性地判斷腫瘤中血管形成情況，同時(shí)反映MMP-2和-9的表達(dá)特點(diǎn)，對(duì)于判斷腫瘤預(yù)后和指導(dǎo)臨床治療有一定價(jià)值。

1 Xiao LJ，Lin P，Lin F，et al.ADAM17 targets MMP-2 and MMP-9 via EGFR-MEK-ERK pathway activation to promote prostate cancer cell invasion〔J〕.Int J Oncol，2012;40(5)：1714-24.

2 劉愛(ài)東，龐久玲，劉士生.胃癌中基質(zhì)金屬蛋白酶-9和CD105表達(dá)關(guān)系的研究〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2009;29(4)：886-7.

3 高 偉，黃 力.二維超聲和CT對(duì)前列腺癌術(shù)前分期的價(jià)值〔J〕.暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2005;26(6)：798-802.

4 麻繼紅，趙玉珍，紀(jì)小惠，等.腎癌彩色血流平均密度與病理組織學(xué)分級(jí)及微血管密度的對(duì)比研究〔J〕.中華超聲影像學(xué)雜志，2005;14(9)：682-4.

5 Wang Q，Diao X，Sun J，et al.Regulation of VEGF，MMP-9 and metastasis by CXCR4 in a prostate cancer cell line〔J〕.Cell Biol Int，2011;35(9)：897-904.

6 劉愛(ài)東，龐久玲，郭紅輝.基質(zhì)金屬蛋白酶-9在胃癌中的表達(dá)及意義〔J〕. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011;20(18)：2226-7.

7 Reis ST，Pontes JJ，Antunes AA，et al.MMP-9 overexpression due to TIMP-1 and RECK underexpression is associated with prognosis in prostate cancer〔J〕.Int J Biol Markers，2011;26(4)：255-61.

8 Aalinkeel R，Nair BB，Reynolds JL，et al.Overexpression of MMP-9 contributes to invasiveness of prostate cancer cell line LNCaP〔J〕.Immunol Invest，2011;40(5)：447-64.