邱宏聰孟夏臨

1.廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院，廣西南寧530022;2.廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西南寧530022

HPLC法測(cè)定老年咳喘膠囊中甘草酸的含量

邱宏聰1，2孟夏臨1

1.廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院，廣西南寧530022;2.廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西南寧530022

目的:建立老年咳喘片中甘草酸的HPLC含量測(cè)定方法。方法:采用高效液相色譜法，色譜柱為Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 mm)，流動(dòng)相為乙腈－0.05%磷酸溶液(35:65)，流速為1.0 mL·min－1，檢測(cè)波長(zhǎng)為237 nm;進(jìn)樣體積為10 mL。結(jié)果:該方法的線性范圍為0.098～1.97 mg，r=0.9998(n=5);平均回收率(n=6)為99.36%，RSD為1.81%。結(jié)論:該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于老年咳喘片的質(zhì)量控制。

老年咳喘膠囊;甘草酸;高效液相色譜法

老年咳喘膠囊是由黃芪、補(bǔ)骨脂、淫羊藿、甘草等七味藥材組成，具有滋陰壯陽，扶正固本之功效，可提高免疫能力，促進(jìn)病體康復(fù)，用于老年慢性支氣管炎及各種體虛癥。目前已有文獻(xiàn)報(bào)道通過測(cè)定黃芪甲苷［1］指標(biāo)物質(zhì)，建立本品的質(zhì)量控制方法。為更全面的控制本品的質(zhì)量，保證用藥安全、有效，本文采用HPLC法測(cè)定老年咳喘膠囊中甘草酸的含量。

1 儀器與試藥

日本島津公司LC－20A高效液相色譜儀;SPD－20A紫外檢測(cè)器;威瑪龍多媒體色譜數(shù)據(jù)工作站。甘草酸銨對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào):110731－200614，供含量測(cè)定用)，老年咳喘膠囊(購自A公司，共三批)。乙腈為色譜純，水為重蒸水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

色譜柱為Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 mm)，流動(dòng)相為乙腈－0.05%磷酸溶液(35:65)，流速為1.0 mL·min－1，檢測(cè)波長(zhǎng)為237nm;進(jìn)樣體積為10 mL;柱溫為室溫;理論板數(shù)按甘草酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取甘草酸銨對(duì)照品，加流動(dòng)相制成0.2 mg·mL－1的溶液，即得(甘草酸重量=甘草酸銨重量/1.0207)［2］。

2.3 供試品溶液的制備

取本品20片，研細(xì)，混勻，取約0.5 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入流動(dòng)相25 ml，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取對(duì)照品溶液0.5、1、3、5、10ml，分別置10ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，按擬定色譜條件分別進(jìn)樣10ml，測(cè)定。以甘草酸對(duì)照品進(jìn)樣量(mg)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為:Y=706 453.8X+29 745.3，r=0.999 8，表明進(jìn)樣量在0.098～1.97 mg范圍內(nèi)時(shí)，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

對(duì)同一供試品溶，按擬定色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定5次，結(jié)果峰面積平均值為325 491，RSD為1.37%，表明儀器精密度較好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

對(duì)同一供試品溶液分別在0，1，2，4，8，12、24 h按擬定色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果峰面積平均值為330 752，RSD為1.68%，表明供試品溶液至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批次樣品6份，制成供試品溶液，按擬定色譜條件測(cè)定，結(jié)果甘草酸含量的平均值為1.06 mg·g－1，RSD為1.89%，表明重復(fù)性較好。

2.8 加樣回收率測(cè)定

精密稱取6份已知含量(1.06 mg·g－1)的樣品0.25 g，分別精密加入甘草酸銨對(duì)照品(11.76 mg·mL－1)25 mL，制成供試品溶液，按擬定色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率(n=6)為99.36%，RSD為1.81%，見表1，表明方法回收率較好。

圖1 HPLC色譜圖

2.9 陰性對(duì)照試驗(yàn)

取缺甘草的陰性樣品0.5g，按擬定方法提取，測(cè)定。結(jié)果陰性樣品在甘草酸出峰位置無吸收峰，表明處方中其他成分對(duì)測(cè)定無影響。見圖1。

2.10樣品測(cè)定

分別取3批樣品，按擬定方法提取，測(cè)定，計(jì)算樣品中甘草酸的含量，結(jié)果分別為0.38 mg/粒，0.35 mg/粒，0.32 mg/粒。

3 討論

方中的甘草為中國藥典收載品種，成分清楚。其主要成分甘草酸的含量較高，具有抗炎、解毒、保肝和增強(qiáng)免疫等作用［3］，為處方中主要的藥效成分。因此，將其確定為含量測(cè)定項(xiàng)，可更全面、有效的控制本品的質(zhì)量。

本試驗(yàn)對(duì)樣品提取溶劑進(jìn)行了篩選，曾采用70%乙醇、1%醋酸無水乙醇、40%甲醇及本試驗(yàn)流動(dòng)相乙腈－0.05%磷酸溶液，結(jié)果流動(dòng)相提取的樣品雜質(zhì)峰較少，峰型較好，因此采用流動(dòng)相作為提取溶劑。試驗(yàn)還對(duì)超聲時(shí)間進(jìn)行了考察，結(jié)果樣品超聲30 min，甘草酸基本提取完全。通過含量測(cè)定的方法學(xué)考察，結(jié)果表明，用HPLC法測(cè)定老年咳喘膠囊中甘草酸的含量，方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

［1］覃軍，黃鳳婷，凌志敏，等.老年咳喘膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］．中藥材，2010，(6):1005－1007.

［2］中國藥典(一部)［S］.2010:80－81.

［3］謝松梅，崔慧斐.甘草酸的研究進(jìn)展［J］.食品與藥品，2006，8(03A):1.

Determination of Glycyrrhizic Acid in Laonian Kechuan Capsule by HPLC

QIU Hong－cong1，2，MENG Xia－lin1
1.Guangxi Institute of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences，Nanning 530022，China;2.Guangxi Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Quality Stardands，Nanning 530022，China

Objective:To establish a HPLC method for the determination of glycyrrhizic acid in Laonian Kechuan Capsule.Method:A HPLC method was developed.Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 mm)was adopted and the mobile phase consisted of acetonitrile and 0.05%phosphoric acid solution(35:65)with injection volume of 10 mL.The flow rate was 1.0 mL·min－1 and the UV detection was at 237 nm.Results:The linear ranges were 0.098～1.97 mg(r=0.9998，n=5)，and the average recovery(n=6)was 99.36%with 1.81%of RSD.Conclusion:The method is simple，accurate，and suitable for the quality control of Laonian Kechuan Capsule.

Laonian Kechuan Capsule;glycyrrhizic acid;HPLC

R927.2

A

1007－8517(2012)20－0043－02

邱宏聰，碩士，助理研究員，研究方向:藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E－mail:qiuhongcong@163.com。

2012.08.27)