明倩倩，游 勇，王 闖，張志元

(1長(zhǎng)沙健硒保生物科技有限公司，長(zhǎng)沙410022;2長(zhǎng)沙市植保植檢站，長(zhǎng)沙410013;3長(zhǎng)沙學(xué)院生物工程與環(huán)境科學(xué)系，長(zhǎng)沙410022)

桃，隸屬薔薇目，梅亞科，桃屬。桃軟腐病是由黑根霉菌(Rhizopus nigricans)引起初生淺褐色水漬狀圓形至不規(guī)則形病斑，擴(kuò)展很快，病部長(zhǎng)出疏松的白色至灰白色棉絮狀霉層，致果實(shí)呈軟腐狀，后產(chǎn)生暗褐色至黑色菌絲、孢子囊及孢囊梗[1，2]。桃采收期集中在高溫的7、8月份，再加上貯運(yùn)過(guò)程中易受損傷，很容易發(fā)生軟腐病，造成大量爛果[3]。因此嚴(yán)格把關(guān)保證桃安全貯藏，研究防治桃軟腐病的有效藥劑，減少初侵染對(duì)桃貯藏尤為重要。本試驗(yàn)采用4種藥劑對(duì)桃軟腐病菌的抑菌能力進(jìn)行研究，旨在為果園病害防治和桃貯藏前的藥劑處理提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 桃軟腐病病原菌分離

取長(zhǎng)有白色霉層的桃果實(shí)，采用組織分離法，在無(wú)菌條件下，切病健交界處組織成邊長(zhǎng)為0.5 cm的小塊，放在培養(yǎng)皿中，用滅菌的鑷子夾小塊桃在75%酒精中消毒10 s，再用0.1%升汞液適量表面消毒1 min，再經(jīng)無(wú)菌水漂洗3次，過(guò)火焰去除部分水分后，放入培養(yǎng)基平板上，每個(gè)培養(yǎng)皿3～4塊組織均勻排放，將培養(yǎng)皿用封口膜封好，置于28℃培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)。36 h后選擇培養(yǎng)皿中長(zhǎng)出黑根霉的菌落，在顯微鏡下檢測(cè)，確定為黑根霉后用接種鉤挑取一小塊菌絲，轉(zhuǎn)入試管斜面培養(yǎng)基中，置于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待長(zhǎng)出白色菌絲后移入冰箱中冷藏保藏[4]。

1.2 4種殺菌劑對(duì)桃軟腐病菌的抑菌試驗(yàn)

(1)供試藥劑及使用濃度。40%地?zé)o菌(阜城津金農(nóng)藥有限公司);20%五氯硝基苯(山西省臨汾有機(jī)化工廠);硫酸銅(分析純);生物農(nóng)藥水生康(長(zhǎng)沙高新區(qū)千力農(nóng)業(yè)生物科技有限公司)。

(2)不同殺菌劑對(duì)桃軟腐病菌菌絲生長(zhǎng)的影響試驗(yàn)

試驗(yàn)設(shè)5個(gè)處理，重復(fù)3次。處理1:40%地?zé)o菌2 g/L;處理2:20%五氯硝基苯2 g/L;處理3:硫酸銅(分析純)2 g/L;處理4:生物農(nóng)藥水生康2 g/L;處理5:對(duì)照組(無(wú)菌水)。

采用生長(zhǎng)速率法[5]測(cè)定殺菌劑對(duì)桃軟腐病病菌的殺菌效果。首先將桃軟腐病菌活化，將試管中的菌種接種到培養(yǎng)基中，置于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36 h后菌種即已活化。然后，將供試藥劑分別用無(wú)菌水稀釋成所需的濃度待用。在滅菌培養(yǎng)皿中倒入PDA培養(yǎng)基12 mL，培養(yǎng)基凝固后，取100 uL殺菌劑稀釋液倒入培養(yǎng)基中(直徑為75 mm)，用三角玻棒將藥液均勻涂布到培養(yǎng)基上。用打孔器(直徑為12 mm)制取已活化的病菌菌餅，菌絲面朝下接種于表面有藥的PDA培養(yǎng)基中央，置于28℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)黑暗培養(yǎng)。

(3)試驗(yàn)結(jié)果調(diào)查。培養(yǎng)3 d后測(cè)量供試病菌在含不同藥劑培養(yǎng)基上的菌落直徑，與對(duì)照組比較計(jì)算各藥劑處理對(duì)菌落擴(kuò)展的生長(zhǎng)抑制率[6]，分析比較不同殺菌劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同殺菌劑對(duì)桃軟腐病病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果

試驗(yàn)結(jié)果表明，各處理對(duì)桃軟腐病菌的抑菌效果具有極顯著性差異，20%五氯硝基苯2 g/L對(duì)桃軟腐病菌的抑制效果最好，處理4對(duì)桃軟腐病菌也有一定的抑菌作用(表1)。

表1 不同殺菌劑對(duì)桃軟腐病病菌的抑制效果

2.2 不同濃度的20%五氯硝基苯的殺菌作用

根據(jù)上述不同殺菌劑培養(yǎng)皿中菌絲生長(zhǎng)的情況，20%五氯硝基苯2 g/L的殺菌效果最好。為了進(jìn)一步探索20%五氯硝基苯抑菌效果的最佳濃度，研究了不同濃度的20%五氯硝基苯殺菌作用影響的試驗(yàn)。結(jié)果表明:抑菌效果隨使用濃度的提高而增強(qiáng)，但當(dāng)濃度至2 g/L時(shí)，再提高濃度至4 g/L，抑菌效果增加值就很小了(表2)。因此，生產(chǎn)上使用20%五氯硝基苯最佳濃度為2 g/L。

表2 五氯硝基苯不同使用濃度的抑制效果

3 討論與小結(jié)

20%五氯硝基苯溶液對(duì)桃軟腐病的抑制效果最好，該化合物可有效地抑制菌絲的生長(zhǎng)，最適宜的使用濃度為2 g/L。實(shí)際生產(chǎn)中，在冬季，桃樹(shù)要進(jìn)行枯枝清理并燒毀，減少初侵染來(lái)源，在春季噴施濃度2 g/L的20%五氯硝基苯溶液可以抑制病原真菌的生長(zhǎng)，降低桃果實(shí)帶菌率，從而減少桃貯運(yùn)期病害的發(fā)生，減少果實(shí)的腐爛損失。

[1]方中達(dá).植病研究法[M].北京:農(nóng)業(yè)出版社，1998.117－120.

[2]劉明久，許桂芳.三種入侵植物浸提液對(duì)桃軟腐病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用[J].氨基酸和生物資源，2008，30(2):9－11.

[3]張曉宇，王春生 ，趙桂芳，等.桃果實(shí)采后生理研究及貯藏保鮮技術(shù)應(yīng)用進(jìn)展[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2008，24(5):117－120.

[4]胡海文，楊海清，王 朋，等.桃褐腐病菌拮抗細(xì)菌的分離篩選與鑒定[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2009，25(12):195－200.

[5]郝永娟，劉春艷.幾種殺菌劑對(duì)葡萄白腐病的室內(nèi)外藥效評(píng)價(jià)[J].現(xiàn)代農(nóng)藥，2002，1(6):34－35.

[6]鐘麗娟，趙新海，張慶華，等.甘薯軟腐病菌的分離鑒定及室內(nèi)抑菌試驗(yàn)[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，(7):87－88.