羅 夏 孫樹青 陶格斯 楊麗敏

近年來，中藥對免疫功能的作用受到普遍重視，并取得了很大進(jìn)展。研究認(rèn)為一些疾病的發(fā)生與機(jī)體免疫抑制關(guān)系密切，很多藥物可以糾正機(jī)體免疫抑制狀態(tài)。中藥以其獨特的療效和較少的副作用逐漸被人們接受和認(rèn)可，并得到廣泛應(yīng)用［1］。目前，國內(nèi)外對中藥免疫調(diào)節(jié)劑的研究，多為單味藥和其所含的單體成分［2，3］，復(fù)方研究較少且不深入。復(fù)方制劑具有單味藥和單體成分所不具備的協(xié)同互補(bǔ)作用，使療效增強(qiáng)、毒副作用減少，在實際應(yīng)用中更具優(yōu)勢。本文采用自制復(fù)方中藥湯劑灌胃實驗小鼠，觀察其對淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和免疫功能的影響。

1 材料與方法

1.1 藥材及試劑

復(fù)方中藥（含茵陳、梔子、蛇床子、苦參、蒲公英、天花粉、大黃、黃芩、黃柏、大青葉、黃連、丹參、連翹）藥材由內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院提供，植物血凝素、瑞氏染色液購自美國Sigma公司。

1.2 實驗動物

80只清潔級昆明小鼠，購自內(nèi)蒙古大學(xué)動物中心，合格證號：SCXK（蒙）2002～001，體重18～22g，雌雄各半。

1.3 實驗方法

1.3.1 中藥湯劑的制備：取每一味藥材單獨醇提，即取藥材1kg，粉碎，加入70%乙醇5 000ml，醇提兩次，每次2h，兩次提取液合并；藥渣再水煮兩次，每次2h，過濾。將所有藥液混合后置于60℃鼓風(fēng)干燥箱中烘干，制成干粉。實驗時稱取各味藥物混合物，蒸餾水溶解，配制成所需濃度后，滅菌，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 1%雞紅細(xì)胞懸液的制備［4，5］：無菌操作自雞心采血，加相當(dāng)于血液量5倍的阿氏液，搖勻，4℃貯存。用時吸取紅細(xì)胞并加入2倍量滅菌生理鹽水洗滌，1 500r／min離心5min，棄上清，再加入滅菌生理鹽水懸浮血球，2 000r／min離心5min，然后用生理鹽水配制成濃度為1%紅細(xì)胞懸液備用。

1.3.3 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實驗：取實驗小鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為對照組、低劑量中藥組（2.5mg／kg／天）、中劑量中藥組（12.5mg／kg／天）和高劑量中藥組（50mg／kg·天），每組10只。各藥物組小鼠均灌胃給藥，早晚各一次，連續(xù)15天；對照組等量蒸餾水灌胃。各組小鼠自由進(jìn)食。實驗第16天各組小鼠肌肉注射植物血凝素0.4mg／只／天，連續(xù)2天。實驗第18天分別取各組小鼠尾靜脈血制備細(xì)胞涂片，瑞氏染色，油鏡下觀察200個淋巴細(xì)胞，計算淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率（%）。

1.3.4 巨噬細(xì)胞吞噬實驗：取實驗小鼠40只，按1.3.3的方法分組和給藥。實驗第16天，灌胃后每只小鼠腹腔注射6%的淀粉肉湯0.5ml，24h后腹腔注射1%雞紅細(xì)胞懸液1ml，40min后頸椎脫臼處死，并在腹腔注入3ml無Ca2＋、Mg2＋的 Hank’s液3ml，按摩腹部數(shù)分鐘后，注射器吸取腹腔液于小試管內(nèi)，500r／min離心5min，取上清涂片、晾干［6］，瑞氏染色后，油鏡觀察，計數(shù)100個巨噬細(xì)胞，計算吞噬率。吞噬率＝吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)／100個巨噬細(xì)胞×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 復(fù)方中藥對小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響

各中藥組與對照組淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率比較，差異顯著（P＜0.01），中劑量中藥組淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率高于低、高劑量組（P＜0.05或P＜0.01），見表1。

表1 復(fù)方中藥對小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響（s，n均＝10）

表1 復(fù)方中藥對小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響（s，n均＝10）

注：與對照組比較，1）P＜0.01；與低劑量中藥組比較，2）P＜0.05；與高劑量中藥組比較，3）P＜0.01

組 別 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率（%）3.81低劑量中藥組 32.34士6.731）中劑量中藥組 36.21士6.611）2）3）高劑量中藥組 29.17士9.111）對照組 21.11士

2.2 復(fù)方中藥對小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響

各中藥組與對照組比較巨噬細(xì)胞吞噬功能顯著增強(qiáng)（P＜0.01），中劑量組作用最大，明顯高于低、高劑量組（P 均＜0.05），見表2。

表2 復(fù)方中藥對小鼠巨噬細(xì)胞吞噬率的影響（s，n均＝10）

表2 復(fù)方中藥對小鼠巨噬細(xì)胞吞噬率的影響（s，n均＝10）

注：與對照組比較，1）P＜0.01；與低劑量中藥組比較，2）P＜0.05；與高劑量中藥組比較，3）P＜0.05

組 別 巨噬細(xì)胞吞噬率（%）3.23低劑量中藥組 33.22士4.711）中劑量中藥組 38.27士7.911）2）3）高劑量中藥組 26.40士4.811）對照組 19.78士

3 討 論

脾臟為外周免疫器官，是T、B等淋巴細(xì)胞成熟、分化及發(fā)生免疫應(yīng)答的主要場所［7，8］。其中，T細(xì)胞在受到非特異性有絲分裂原如刀豆蛋白（ConA）等刺激后，能轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，繼而分裂增殖。T淋巴細(xì)胞的功能狀態(tài)在很大程度上反應(yīng)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能水平，在機(jī)體早期抗感染和細(xì)胞內(nèi)寄生菌感染的免疫功能中起重要作用。T細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率可反映機(jī)體的細(xì)胞免疫功能狀態(tài)。本研究結(jié)果表明，不同劑量中藥組均可顯著提高實驗小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，且在一定濃度范圍內(nèi)隨藥物濃度的升高而逐漸增加。

巨噬細(xì)胞不僅參與機(jī)體的非特異性和特異性免疫反應(yīng)，而且是兩種免疫反應(yīng)的“橋梁細(xì)胞”，在人體生理和病理過程中都發(fā)揮重要作用［5］，是機(jī)體防御功能的重要組成部分。在炎癥反應(yīng)中，巨噬細(xì)胞是參與非特異性免疫反應(yīng)和特異性免疫反應(yīng)的主要細(xì)胞，通過多種途徑對體內(nèi)的“非己”異物進(jìn)行識別和清除；在特異性免疫反應(yīng)中承擔(dān)著加工、處理抗原，傳遞抗原信息的職能。而巨噬細(xì)胞的吞噬能力是衡量機(jī)體非特異性免疫功能的指標(biāo)之一，常用于評價藥物對細(xì)胞免疫功能的影響。復(fù)方中藥含有多種有效成分，具有清熱解毒，消炎止癢，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能優(yōu)點［9］。本實驗結(jié)果也表明，作者所擬復(fù)方中藥能顯著提高小鼠巨噬細(xì)胞吞噬率，且在一定范圍內(nèi)隨藥物濃度的升高而增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的能力。表明復(fù)方中藥能增加巨噬細(xì)胞的免疫反應(yīng)，提高機(jī)體免疫力。因此認(rèn)為該復(fù)方中藥對小鼠免疫功能有顯著的調(diào)節(jié)和促進(jìn)作用。對其吞噬功能及增強(qiáng)免疫機(jī)能的機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

1 孫 燕.中醫(yī)中藥在腫瘤綜合治療中的應(yīng)用［J］.中西醫(yī)結(jié)合志，1997，6（6）：323～324.

2 張 群，雷林生，吳曙光.多糖類藥物作用的受體及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的研究進(jìn)展［J］.中草藥，2005，36（4）：614～616.

3 張其威，張楚瑜.抗病毒中藥研究的最新進(jìn)展［J］.中成藥，2005，27（1）：116～119.

4 徐淑云，卞如濂，陳 修.藥理實驗方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1 833～1 836.

5 陳 奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1992：315～317.

6 蔣紅麗，曹雨辰.復(fù)方中藥注射液對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2006，25（4）：33～34.

7 Nyati KK，Prasad KK，Rizwan A，et al.Lymphocyte transformation test detects a response to campylobacter jejuni antigens in patients with guillain－barrésyndrome［J］.Med Microbiol Immunol，2010，199（2）：109～116.

8 Iwasaki A，Medzhitov R.Regulation of adaptive immunity by the innate immune system［J］.Science，2010，327（5 963）：291～295.

9 咼愛秀，黃興國，雷黎明.苦參堿對免疫功能低下小鼠免疫功能的影響［J］.中國現(xiàn)代藥物雜志，2008，2（11）：7～9.