丁香酚對蘇氏圓腹魚芒成魚麻醉效果的研究

研究了24℃水溫條件下，20、40、60、80、100、120mg/L的丁香酚對蘇氏圓腹魚芒(Pangasiussutchi)成魚的麻醉及復(fù)蘇效果，探討了以80mg/L丁香酚將蘇氏圓腹魚芒成魚麻醉，再分別在空氣中暴露5、10、15、20、25min后對其復(fù)蘇效果的影響。結(jié)果表明，60～120mg/L丁香酚效果最佳，平均都可以在3min內(nèi)使其麻醉，麻醉后可在5min內(nèi)完成復(fù)蘇，以80mg/L為例麻醉后在空氣中暴露長達(dá)25min仍可完全復(fù)蘇?？梢?，丁香酚是安全、有效的蘇氏圓腹魚芒麻醉劑，完全可以滿足常規(guī)實(shí)驗(yàn)操作對其麻醉的需要。

蘇氏圓腹魚芒(Pangasiussutchi)；丁香酚；麻醉

蘇氏圓腹魚芒(Pangasiussutchi) 俗稱淡水鯊魚，是原產(chǎn)東南亞的主要淡水養(yǎng)殖鯰類，具有生長快、食性雜、耐低氧、抗病強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。我國于1978年引入該魚，2005年將其作為推廣養(yǎng)殖的魚類[1]。蘇氏圓腹魚芒成魚個(gè)體較大，應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)烈，在進(jìn)行人工授精、測量、標(biāo)記、取血等試驗(yàn)操時(shí)很難控制。因此，選擇一種安全、高效的魚用麻醉劑對蘇氏圓腹魚芒人工操作的順利實(shí)施十分必要。然而，迄今尚未見有關(guān)麻醉劑對蘇氏圓腹魚芒麻醉效果的研究報(bào)道。

丁香酚(Eugenol)又稱丁子香酚、丁香油酚，是一種油狀的有類似丁香香味的天然化合物，對魚有強(qiáng)烈的麻醉作用。近年來，丁香酚已被澳大利亞、智利、芬蘭、新西蘭等許多國家認(rèn)定為沒有殘留期的合法水產(chǎn)麻醉劑[2]，被廣泛應(yīng)用于親魚采卵、活魚運(yùn)輸以及手術(shù)過程的麻醉[3-4]。目前，已有丁香酚對大黃魚[3]、半滑舌鰨[5]、鯉魚和羅非魚[6]、澳洲長鰭鰻[7]等麻醉效果的研究，結(jié)果都證明丁香酚是一種有效的魚類麻醉劑。張朝暉等[8]研究了丁香酚對黃臘鲹耗氧的影響，莊平等[9]報(bào)道了丁香酚對中華鱘幼魚耗氧率與排氨率的影響，馮廣朋等[10]對丁香酚對西伯利亞鱘稚魚耗氧率與幼魚血液生化指標(biāo)的影響進(jìn)行了研究，結(jié)果表明丁香酚麻醉能夠明顯降低魚類耗氧率和排氨率，對血液生化的影響相對較小，適合魚類采卵、運(yùn)輸、手術(shù)以及取血等操作的要求。因此，本研究選用丁香酚為麻醉劑，對其對蘇氏圓腹魚芒成魚的麻醉效果和安全性進(jìn)行了探討，以期為蘇氏圓腹魚芒的麻醉操作提供依據(jù)和參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用魚體長(31.65±5.82)cm，健康活潑，無病無傷。丁香酚從上海榮祥齒科材料有限公司購得，含丁香酚98%以上，相對密度為1.05～1.08g/mL，使用前按丁香酚與無水乙醇1∶10的體積比配制母液。

1.2 方法

(1)試驗(yàn)魚的處理 試驗(yàn)用魚暫養(yǎng)于4000L的溫室塑鋼池中，試驗(yàn)前停飼24h。麻醉和復(fù)蘇在塑料箱中進(jìn)行，試驗(yàn)用水均為20L，水溫約24℃。試驗(yàn)后將試驗(yàn)用魚按不同處理組分別放入500L塑鋼桶中暫養(yǎng)，繼續(xù)觀察72h，統(tǒng)計(jì)存活率。

(2)麻醉程度和復(fù)蘇過程的分期 麻醉程度和復(fù)蘇過程的分期參照劉長琳等[5]、孟慶磊等[7]的方法，并結(jié)合預(yù)備實(shí)驗(yàn)確定。

根據(jù)麻醉過程中的行為特征將麻醉過程分為A1(鎮(zhèn)靜期)、A2(輕度麻醉期)和A3(麻醉期)3個(gè)時(shí)期，詳見表1。

表1 蘇氏圓腹魚芒成魚麻醉程度的分期

根據(jù)復(fù)蘇過程中的行為特征將復(fù)蘇過程分為R1(部分復(fù)蘇期)和R2(完全復(fù)蘇期)2個(gè)時(shí)期，詳見表2。

表2 蘇氏圓腹魚芒成魚復(fù)蘇過程的分期

(3)不同濃度丁香酚的麻醉效果觀察 設(shè)計(jì)20、40、60、80、100、120mg/L的丁香酚濃度梯度進(jìn)行麻醉效果的試驗(yàn)，每組用魚5尾。當(dāng)魚體麻醉程度達(dá)到A3期時(shí)，用秒表記錄麻醉所用時(shí)間，并立即將魚轉(zhuǎn)入清水復(fù)蘇，當(dāng)復(fù)蘇程度達(dá)到R2期時(shí)，記錄復(fù)蘇所用時(shí)間。

(4)空氣中暴露時(shí)間對復(fù)蘇用時(shí)的影響 為研究麻醉后離水操作的可行性，以80mg/L丁香酚濃度進(jìn)行麻醉，待所有個(gè)體全部麻醉后，將試驗(yàn)魚擺放在濕紗布上分別在空氣中暴露5、10、15、20、25min，然后轉(zhuǎn)入清水復(fù)蘇，當(dāng)復(fù)蘇程度達(dá)到R2期時(shí)，記錄復(fù)蘇所用時(shí)間。每組用魚5尾。

(5)統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示，采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，顯著性水平小于0.05時(shí)，采用LSD多重比較法檢驗(yàn)組間差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度丁香酚的麻醉效果

如表3所示，濃度為20～120mg/L的丁香酚都能使蘇氏圓腹魚芒進(jìn)入麻醉A3期，且麻醉后復(fù)蘇率達(dá)100%，72h內(nèi)存活率100%。平均麻醉所需時(shí)間隨著丁香酚濃度的增加而逐漸減少(Plt;0.05)。20mg/L濃度平均麻醉所需時(shí)間最長，平均達(dá)709.80s。濃度升至40mg/L時(shí)，平均麻醉所需時(shí)間大幅減少，僅為187.40s。濃度從40mg/L逐漸升高時(shí)，平均麻醉所需時(shí)間呈緩慢減少的趨勢，至120mg/L時(shí)平均麻醉所需時(shí)間降至94.00s。多重比較結(jié)果表明，不同濃度組間平均麻醉所需時(shí)間，除60mg/L組與40mg/L、80mg/L、100mg/L組之間差異不顯著，及80mg/L組、100mg/L組、120mg/L組3組之間差異不顯著外，其他各組間差異都達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著水平(Plt;0.05)。

表3 不同濃度丁香酚對蘇氏圓腹魚芒成魚的麻醉效果

丁香酚濃度在20～120mg/L范圍內(nèi)，平均復(fù)蘇所需時(shí)間隨著丁香酚濃度的增加而逐漸緩慢增加(Plt;0.05)。麻醉后平均復(fù)蘇所需時(shí)間以20mg/L組為最短，僅為124.80s；以120mg/L組為最長，為260.40s。多重比較結(jié)果表明，不同濃度組間平均復(fù)蘇所需時(shí)間，除20mg/L組與40mg/L組之間差異不顯著，及40mg/L組、60mg/L組、80mg/L組、100mg/L組各組之間不顯著外，其他各組間差異都達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著水平(Plt;0.05)。

2.2 空氣中暴露時(shí)間對復(fù)蘇用時(shí)的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明，以80mg/L丁香酚將試驗(yàn)魚麻醉后再在空氣中暴露，暴露5min左右，個(gè)別個(gè)體鰓蓋恢復(fù)張合；暴露10min左右，大部分個(gè)體鰓蓋恢復(fù)張合；暴露15min左右，部分個(gè)體尾部開始間或翹起，并且翹起幅度和頻率逐漸緩慢增加；暴露25min左右，大部分個(gè)體尾部開始緩慢而有規(guī)律地?cái)[動(dòng)。

表4 空氣中暴露時(shí)間對丁香酚麻醉的蘇氏圓腹魚芒成魚復(fù)蘇用時(shí)的影響

如表4所示，分別在空氣中暴露5、10、15、20、25min，轉(zhuǎn)入清水后復(fù)蘇率仍達(dá)100%，72h內(nèi)存活率100%。入水后，平均復(fù)蘇所需時(shí)間隨著在空氣中暴露時(shí)間的增加而逐漸減少(Plt;0.05)。麻醉后平均復(fù)蘇所需時(shí)間以在空氣中暴露25min組為最短，僅為130.20s；以在空氣中暴露5min組為最長，為355.00s。多重比較結(jié)果表明，不同空氣中暴露時(shí)間組間平均復(fù)蘇所需時(shí)間，除5min組與15、20、25min組間差異達(dá)到顯著水平(Plt;0.05)外，其他各組間差異都不顯著。

3 討論

3.1 不同濃度丁香酚對蘇氏圓腹魚芒成魚麻醉所需時(shí)間的影響

在已有的魚類麻醉報(bào)道中，除澳洲長鰭鰻[7]等極少數(shù)魚類外，大多數(shù)魚類麻醉所需時(shí)間都隨著麻醉劑濃度的提高而逐漸縮短[2-3,5,8,11-12]。本研究也不例外，丁香酚濃度在20～120mg/L范圍內(nèi)，蘇氏圓腹魚芒成魚平均麻醉所需時(shí)間隨著丁香酚濃度的增加而呈逐漸減少的趨勢(Plt;0.05)。濃度從20mg/L升至40mg/L，平均麻醉所需時(shí)間大幅減少；濃度高于40mg/L時(shí)，平均麻醉所需時(shí)間則隨麻醉劑濃度升高呈緩慢減少的趨勢。

3.2 不同濃度丁香酚對蘇氏圓腹魚芒成魚復(fù)蘇所需時(shí)間的影響

多數(shù)魚類麻醉后復(fù)蘇所用時(shí)間隨著麻醉劑濃度的提高而逐漸增長[2-3,5,8,11-12]，本研究也不例外，丁香酚濃度在20～120mg/L范圍內(nèi)，蘇氏圓腹魚芒成魚平均復(fù)蘇所需時(shí)間隨著丁香酚濃度的增加而以較小幅度逐漸增加(Plt;0.05)。

3.3 空氣中暴露時(shí)間對蘇氏圓腹魚芒成魚復(fù)蘇所需時(shí)間的影響

研究空氣中暴露時(shí)間對復(fù)蘇所需時(shí)間的影響，對于活體離水操作具有一定指導(dǎo)意義。本研究結(jié)果表明，以80mg/L丁香酚將試驗(yàn)魚麻醉后，在5～25min時(shí)間范圍內(nèi)，隨著在空氣中暴露時(shí)間的延長，魚體入水后復(fù)蘇所需時(shí)間呈逐漸減少的趨勢(Plt;0.05)。其原因可能是隨著暴露時(shí)間的延長，魚體代謝逐漸降低了體內(nèi)麻醉劑的濃度，從而導(dǎo)致在空氣中暴露期間試驗(yàn)魚已經(jīng)進(jìn)入復(fù)蘇R1期或者麻醉A2期。另外，研究結(jié)果也表明，麻醉后在空氣中暴露長達(dá)25min，轉(zhuǎn)入清水后復(fù)蘇率仍達(dá)100%，72h內(nèi)存活率100%，足以滿足常規(guī)活體離水操作的要求。

3.4 丁香酚麻醉蘇氏圓腹魚芒成魚的最佳濃度

對于麻醉劑有效濃度的定義，因麻醉劑種類、魚的種類和使用用途而異，帶有一定的主觀性。Marking等[13]認(rèn)為，理想的麻醉濃度需要同時(shí)滿足2個(gè)條件：(1)3min之內(nèi)麻醉；(2)5min之內(nèi)蘇醒。本研究結(jié)果表明丁香酚是一種安全、有效的蘇氏圓腹魚芒麻醉劑，其安全邊界較寬，20～120mg/L的丁香酚都可以使其達(dá)到麻醉A3期，并且可以完全復(fù)蘇。60～120mg/L的丁香酚平均都可以在3min內(nèi)使其麻醉，麻醉后可在5min內(nèi)完成復(fù)蘇，完全可以滿足常規(guī)實(shí)驗(yàn)操作對蘇氏圓腹魚芒麻醉的需要。

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10.3969/j.issn.1673-1409(S).2012.04.009

S917.4

A

1673-1409(2012)04-S033-04

2012-03-20

山東省農(nóng)業(yè)良種工程項(xiàng)目。

孟慶磊(1980-),男,山東莒南人,博士,助理研究員,主要從事魚類遺傳育種研究。

朱永安,E-mailzhuyongan1965@163.com。