魏 霞，張立鳳，魏 海

（1.四平巨能藥業(yè)有限公司，吉林 四平 136000；2.吉林益民堂制藥有限公司，吉林 四平 136001；3.四平婦嬰醫(yī)院，吉林 四平 136000）

歸龍筋骨寧片由穿山龍、當(dāng)歸、桃仁（炒）、桂枝、丹參、地楓皮、制草烏、乳香（炒）、蒼術(shù)（炒）、川牛膝、威靈仙、甘草、千年健、紅花、馬錢子（制）等中藥組成。具有祛風(fēng)活血，舒筋止痛的作用，用于風(fēng)寒濕痹，關(guān)節(jié)疼痛［1］。本研究以歸龍筋骨寧片中馬錢子的主要成分士的寧的含量為指標(biāo)，探討其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的定量檢測方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-2010高效液相色譜儀（紫外可見雙波長檢測器SPD-10AVP Plus）；BSZZ4S型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；KDQX-260超聲波清洗機（濟寧科電檢測儀器有限公司）。

1.2 試藥

士的寧對照品，含量測定用，批號110721-200211，中國藥品生物制品檢定所提供；醋酸乙酯、乙腈，色譜純，山東禹王實業(yè)有限公司禹城化工廠；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

按照高效液相色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI D）測定［2］，色譜柱：Shim-pack柱，4.6mm×150mm；乙腈-水（11：89）含三乙胺0.01mol／L，用磷酸調(diào)pH 值至3為流動相；流速：1.0mL／min；檢測波長260nm；理論板數(shù)按士的寧峰計算應(yīng)不低于2500。分離度大于1.5。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取士的寧對照品適量，加醋酸乙酯制成每1mL含0.05mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品重量差異項下的10片，除去糖衣，精密稱定，研細，取0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加氯仿25mL與濃氨試液1mL，密塞，輕輕振搖，稱定重量，放置24h，稱定重量，用氯仿補足減失的重量，振搖，精密量取續(xù)濾液10mL，置分液漏斗中，用硫酸溶液振搖提取5次，每次20mL，合并硫酸液，用濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，用氯仿振搖提取5次（30mL、20mL、20mL、20mL、20mL），合并氯仿液，蒸干，殘渣加醋酸乙酯使溶解，移至5mL量瓶中，加醋酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 缺馬錢子的陰性對照溶液制備

依據(jù)處方中的比例，按制法制備缺馬錢子的陰性對照樣品，按“2.2.2”項方法制備陰性對照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

分別精密吸取供試品溶液及對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀中測定。結(jié)果士的寧在9～10min內(nèi)出峰，而且與前后的峰均有較好的分離，見圖1、圖2，陰性樣品不干擾樣品測定，見圖3。

2.4 線性關(guān)系的考察

精密稱取士的寧對照品，分別加醋酸乙酯制成0.02514mg／mL、0.1257mg／mL、0.2514mg／mL、0.3352mg／mL、0.419mg／mL的溶液，分別精密吸取上述溶液10μL注入液相色譜儀，測定峰面積積分值，計算（見表1）。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，士的寧對照品進樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（見圖4）。得回歸方程Y＝17762.8+1870822X，相關(guān)系數(shù)r＝0.9996，結(jié)果表明士的寧量在0.2514～4.19μg／mL范圍內(nèi)，峰面積積分值與士的寧量呈線性關(guān)系。

表1 士的寧對照品峰面積積分值

圖4 士的寧標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5 精密度試驗

取同一對照品溶液，精密吸取此溶液10μL，按“2.1”項色譜條件重復(fù)進樣5次，測定士的寧峰面積，以測定結(jié)果的相對偏差反映方法的精密度，結(jié)果見表2。

表2 精密度試驗士的寧峰面積

2.6 重現(xiàn)性試驗

取同一樣品，按“2.2.2”項方法制備5份供試液，分別進樣測定，測定結(jié)果見表3。?

表3 重現(xiàn)性試驗士的寧峰面積

2.7 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，按“2.2.2”項方法制備供試液，分別在0、2、4、6、8h測定士的寧峰面積，結(jié)果其 RSD值為0.70%，表明樣品在8h內(nèi)穩(wěn)定。見表4。

表4 穩(wěn)定性試驗士的寧峰面積

2.8 加樣回收率試驗

將已知含量（0.21mg／片）的樣品除去糖衣研細，分別精密稱取0.5g，共計5份，分別精密加入士的寧對照品0.7mg按“2.2.2”項方法制備供試液，進樣量10μL，測定士的寧峰面積，計算士的寧含量和回收率，結(jié)果見表5。

表5 加樣回收率試驗中士的寧含量和回收率

2.9 樣品測定

取3批樣品按“2.2.2”項方法制備供試液，并進行含量測定，測定結(jié)果見表6。

表6 樣品測定中士的寧的含量

3 討論

選用加氯仿25mL與濃氨試液1mL溶解，用硫酸溶液振搖提取，用濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，用氯仿振搖提取，蒸干，殘渣加醋酸乙酯使溶解，可將士的寧提取完全。用乙腈-水（11：89）含三乙胺0.01mol／L，用磷酸調(diào)pH 值至3為流動相，分離效果較好，且無干擾吸收峰。

應(yīng)用HPLC法對歸龍筋骨寧片中馬錢子有效成分士的寧的含量進行了測定，該方法靈敏度、準(zhǔn)確度高，專屬性強，重現(xiàn)性好，可作為質(zhì)量控制方法。

［1］國家藥品標(biāo)準(zhǔn).內(nèi)科腦系經(jīng)絡(luò)肢體分冊［S］.標(biāo)準(zhǔn)編號：WS-10814（ZD-0814）-2002.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.