姜淑貞 張培奇 楊維仁 楊在賓* 季方 （山東農(nóng)業(yè)大學動物科技學院 泰安 271018 肥城市安莊鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站 Amlan International, Chicago, Illinois, United States of America）

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玉米赤霉烯酮污染日糧對斷奶母豬陰戶的影響

姜淑貞①張培奇②楊維仁①楊在賓①*季方③（①山東農(nóng)業(yè)大學動物科技學院 泰安 271018 ②肥城市安莊鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站 ③Amlan International, Chicago, Illinois, United States of America）

選擇35±1日齡、平均體重為10.36±1.21kg健康的三元(斯格×長×大)雜交斷奶母豬20頭，研究不同水平玉米赤霉烯酮(ZEA)污染日糧對斷奶母豬陰戶大小的影響。將試驗母豬按照體重隨機分為4個處理，對照組仔豬飼喂基礎日糧，3個試驗組分別在基礎日糧的基礎上添加1、2和3mg/kg的ZEA。結果表明：日糧添加1.1~3.2mg/kg ZEA顯著增加斷奶母豬的陰戶長、寬和陰戶面積(P＜0.05)。隨ZEA水平的升高，母豬的陰戶長、寬和陰戶面積的直線回歸增加的趨勢(P＜0.05)。

仔豬 玉米赤霉烯酮 陰戶

全世界谷物和飼料普遍受到玉米赤霉烯酮(zearalenone，ZEA)的嚴重污染。在中國，落后的谷物收獲條件和油料加工過程加重ZEA的污染，低質(zhì)量的玉米和糧食加工副產(chǎn)品，特別是非常規(guī)原料的廣泛使用，使ZEA等霉菌毒素的污染程度遠遠超出國外。動物中豬對ZEA最敏感，歐盟規(guī)定仔豬日糧中ZEA的最高限量為0.1mg/kg，我國規(guī)定仔豬日糧中ZEA的最高限量為0.5mg/kg。ZEA可誘發(fā)豬的雌激素過多癥，典型的臨床癥狀為陰戶濕腫、陰道和直腸脫垂以及乳腺增大，引起母豬的不孕、流產(chǎn)和假發(fā)情等繁殖障礙。然而，目前ZEA對豬的危害研究主要集中在成年繁殖母豬，對商品豬、特別是非繁殖期仔豬的作用機理尚不清楚。迄今為止，尚無有關低劑量ZEA(1.1~3.2mg/kg)對斷奶母豬陰戶劑量效應關系的系統(tǒng)報道。本試驗以斷奶雌性仔豬為研究對象，研究低劑量ZEA(1.1~3.2mg/kg)對斷奶母豬陰戶的影響，以期對實際養(yǎng)豬生產(chǎn)提供參數(shù)。

1 材料與方法

1.1 材料

玉米赤霉烯酮(ZEA)：由美國Amlan International公司訂購自以色列FERMENTEK公司，為色譜純度，純度保證值為98%。

1.2 試驗動物與管理

選擇35±1日齡、平均體重為10.36±1.21kg健康的三元(斯格×長×大)雜交斷奶雌性仔豬20頭，按照體重隨機分為4個處理，每個處理5個重復，各處理間初始體重差異不顯著(P>0.05)。仔豬21日齡斷奶，在產(chǎn)床上飼養(yǎng)7d，然后轉入試驗籠(0.48m2)。單體籠使用塑料漏縫地板，安裝有乳頭飲水器和料槽，仔豬自由采食和飲水。試驗開始前對豬舍進行全面清掃、消毒，試驗期間每周進行1次豬舍消毒。舍內(nèi)安裝紅外保溫燈維持豬舍溫度，相對濕度為65%。預試期7d，正試期18d。仔豬管理和免疫按常規(guī)進行。試驗在沂南縣孫祖鎮(zhèn)金珠園豬場進行。

1.3 基礎日糧與試驗設計

試驗基礎日糧營養(yǎng)水平參考NRC(1998)推薦標準配制，基礎日糧組成和營養(yǎng)水平見表1。對照組仔豬飼喂基礎日糧，3個試驗組分別在基礎日糧的基礎上添加1、2和3mg/kg的ZEA，試驗設計見表2。試驗所需日糧需于試驗正式開始前1周1次性配合完成，在試驗前和試驗結束后分別取樣，用以分析日糧中的養(yǎng)分含量以及毒素水平。

1.4 試驗方法

1.4.1 日糧養(yǎng)分和毒素水平 日糧常規(guī)養(yǎng)分含量按照張麗英(2003)的方法進行。日糧中ZEA、嘔吐毒素、黃曲霉毒素和煙曲霉毒素測定委托臺灣亞洲谷物檢測中心測定。嘔吐毒素的測定采用高效液相色譜法，ZEA、黃曲霉毒素和煙曲霉毒素采用酶聯(lián)免疫吸附和熒光測定法。黃曲霉毒素、ZEA、嘔吐毒素和煙曲霉毒素的最低檢測限為分別為1μg/kg、0.1mg/kg、0.1mg/kg和0.25mg/kg。

表1 基礎日糧組成和營養(yǎng)水平

注：每千克日糧提供：VA3300IU、VD3330IU、VE24IU、VK30.75mg、VB11.50mg、VB25.25mg、VB62.25mg、VB120.026mg、泛酸15.00mg、尼克酸22.5mg、生物素0.075mg、葉酸0.45mg、錳6.00mg、鐵150mg、鋅150mg、銅9.00mg、碘0.21mg、硒0.45mg。

表2 試驗設計方案 (頭、mg/kg)

1.4.2 陰戶測量與計算 從正式試驗期開始，每天觀察豬只陰戶，記錄發(fā)紅和腫脹的時間。所有豬只每4d用游標卡尺測量陰戶長度和寬度。仔豬陰戶俯視近似一菱形，本研究將仔豬陰戶視為菱形(圖1)，按菱形計算面積，公式為長×寬/2，比較各組仔豬陰戶的增大效果。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

試驗數(shù)據(jù)使用SAS(SAS9.1, 2003)軟件進行統(tǒng)計。采用正交多項式比較法對不同ZEA梯度的處理效應進行線性回歸分析；用Duncan’s多組極差檢驗法進行多重比較。分析仔豬陰戶大小隨時間的變化規(guī)律，并根據(jù)t-檢驗確定線性回歸的顯著性，顯著性水平P=0.05。

圖1 陰戶大小的測量與計算

圖2 日糧添加不同水平玉米赤霉烯酮對斷奶母豬不同時間陰戶長的影響

2 結果與分析

2.1 日糧添加不同水平玉米赤霉烯酮對斷奶母豬不同時間陰戶長的影響

日糧添加不同水平玉米赤霉烯酮對斷奶母豬不同時間陰戶長的影響見圖2和表3。所有ZEA處理仔豬的陰戶長度均隨試驗時間線性增加(P＜0.05)，對照組陰戶長度隨試驗時間雖然也增加，但是增加不顯著(P>0.05)。隨ZEA水平的升高，直線回歸呈增加的趨勢。對不同處理的線性回歸進行t-檢驗，1.1mg/kg ZEA處理組的回歸系數(shù)與對照組相比差異不顯著(P>0.05)，而2.0mg/kg和3.2mg/kg ZEA處理組的直線回歸系數(shù)顯著高于對照組(P＜0.05)。

2.2 日糧添加不同水平玉米赤霉烯酮對斷奶母豬不同時間陰戶寬的影響

日糧添加不同水平玉米赤霉烯酮對斷奶母豬不同時間陰戶寬的影響見圖3和表3。所有處理仔豬的陰戶寬均隨試驗時間線性增加(P＜0.05)。隨ZEA水平的升高，直線斜率呈線性增加的趨勢。對不同處理的線性回歸進行t-檢驗，所有ZEA處理組的線性回歸系數(shù)均顯著大于對照組(P＜0.05)。

表3 日糧添加不同水平玉米赤霉烯酮對斷奶母豬不同時間陰戶長、寬和面積的線性回歸方程 (mm、mm2)

圖3 日糧添加不同水平玉米赤霉烯酮對斷奶母豬不同時間陰戶寬的影響

圖4 日糧添加不同水平玉米赤霉烯酮對斷奶母豬不同時間點陰戶面積的影響

2.3 日糧添加不同水平玉米赤霉烯酮對斷奶母豬不同時間點陰戶面積的影響

日糧添加不同水平玉米赤霉烯酮對斷奶母豬不同時間陰戶面積的影響見圖4和表3。所有處理仔豬的陰戶面積均隨試驗時間呈線性增加(P＜0.05)。隨ZEA水平的升高，直線回歸呈增加趨勢。對不同處理的直線回歸進行t-檢驗，所有ZEA處理組的直線回歸均顯著大于對照組(P<0.05)。

3 討論

玉米赤霉烯酮(ZEA)雌激素效應的很多研究集中在外周生殖器官，可誘發(fā)豬的雌激素過多癥，典型的臨床癥狀為陰戶濕腫、陰道和直腸脫垂以及乳腺增大。母豬以膠囊形式口服ZEA含量為3.5、7.5或11.5mg/kg體重的日糧后，所有母豬均出現(xiàn)陰道炎及生殖道腫大(Farnworth and Trenholm, 1981)。飼喂ZEA(1.5mg/kg或2mg/kg)7d便出現(xiàn)陰戶紅腫(Rainey et al., 1990)。研究表明，ZEA有很強的雌激素效果，對新生鼠和發(fā)育未成熟鼠的子宮重量均具有刺激作用，并均符合劑量-反應曲線模型(Jefferson et al., 2002)。給切除卵巢的雌性鼠皮下連續(xù)注射ZEA (≥2mg/kg·d)，與對照相比顯著增加了子宮重(Takemura et al., 2007)，表明ZEA具有很強的雌激素效應。本試驗進行7d后，3.2mg/kg ZEA處理中的母豬即出現(xiàn)陰戶濕腫，而在24d時，3.2mg/kg ZEA處理組仔豬的陰戶長度、寬度、高度和面積分別比對照組增大了25.9%、36.2%、26.9%和76.3%。與對照組相比，仔豬日糧添加1.1mg/kg 或更高水平的ZEA顯著增加仔豬生殖器官指數(shù)，且仔豬生殖器官指數(shù)隨ZEA水平的增加呈線性增加，進一步證實ZEA的雌激素效應(Jiang et al., 2011)。本研究中根據(jù)陰戶大小和日糧ZEA的劑量關系，首次采用線性回歸的方式定量比較不同水平ZEA對陰戶大小的影響，方法簡單，易于在生產(chǎn)中推廣，為養(yǎng)豬生產(chǎn)中ZEA的污染狀況提供理論依據(jù)。

4 結論

日糧添加1.1~3.2mg/kg ZEA顯著增加斷奶母豬的陰戶長、寬和陰戶面積(P＜0.05)。隨ZEA水平的升高，母豬的陰戶長、寬和陰戶面積呈線性增加的趨勢(P＜0.05)。

[1] 張麗英. 飼料分析與飼料質(zhì)量檢測技術[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)大學出版社, 2003.

[2] Farnworth, E. R. and Trenholm H. L.. The effect of acute administration of the mycotoxin zearalenone to female pigs., 1981. 16: 239-252.

[3] Jefferson, W. N., Padilla-Banks E., Clark G., Newbold R. R.. Assessing estrogenic activity of phytochemicals using transcriptional activation and immature mouse uterotrophic responses. J. Chromatogr., 2002. 25: 179-189.

[4] Jiang, S. Z., Yang Z. B., Yang W. R., Wang S.J., Liu F.X., Johnston S. L., Chi F. Wang Y., 2011. Effect of purified zearalenone with or without modified montmorillonite on nutrient availability, genital organs and serum hormones in post-weaning piglets. Livest. Sci., DOI: 10.1016/j.livsci.2011.11.004.

[5] NRC, National Research Council. Nutrient Requirements of Swine. 10th Ed. National Academy Press, Washington, DC. 1998.

[6] Rainey, M. R., Tubbs R. C., Bennett L. W., Cox N. M.. Prepubertal exposure to dietary zearalenone alters hypothalamo-hypophysial function but does not impair postpubertal reproductive function of gilts. J. Anim. Sci., 1990. 68: 2015-2022.

[7] Takemura, H., Shim J., Sayama K., Tsubura A., Zhu B. T., Shimoi K.. Characterization of the estrogenic activities of zearalenone and zeranol in vivo and in vitro. J. Steroid Biochem., 2007. 103: 170-177.

（2011–12–29）

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術體系生豬產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團隊

通訊作者

S828.1

A

1007-1733(2012)01-0004-03