張秀珍，龔永福，楊滿華，任震眠，肖祎云，溫家根，肖少香，陳玉祥，，*

（1.中南大學(xué)藥學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙 410008；2.萬(wàn)福生科（湖南）農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司，湖南桃源 410128；3.湖南科技職業(yè)學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙 410004）

氣相色譜法檢測(cè)藥用葡萄糖原料碎米的有機(jī)氯殘留

張秀珍1，龔永福2，楊滿華2，任震眠2，肖祎云1，溫家根1，肖少香3，陳玉祥1，2，*

（1.中南大學(xué)藥學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙 410008；2.萬(wàn)福生科（湖南）農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司，湖南桃源 410128；3.湖南科技職業(yè)學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙 410004）

考察湖南部分地區(qū)碎米的有機(jī)氯農(nóng)藥殘留情況，為以碎米為原料生產(chǎn)藥用葡萄糖提供安全保障，同時(shí)為合理使用有機(jī)氯農(nóng)藥提供參考。在《中國(guó)藥典》方法基礎(chǔ)上改良，提取樣品，濃硫酸凈化后，采用氣相色譜法測(cè)定有機(jī)氯含量。色譜柱為SE-54彈性石英毛細(xì)管色譜柱（30m×0.25mm×0.32mm），經(jīng)程序升溫技術(shù)分離，然后用電子捕獲檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果表明，樣品中有不同程度的有機(jī)氯農(nóng)藥殘留，該方法快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，適用于碎米中有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。

有機(jī)氯農(nóng)藥殘留，大米，氣相色譜法

在大米的精加工過(guò)程中，不可避免的會(huì)產(chǎn)生10% ~15%的碎米，碎米所含營(yíng)養(yǎng)成分與大米相近，其淀粉含量將近70%~80%，但是其價(jià)格僅為整米的三分之一到二分之一，因此以碎米代替整米為原料，采用雙酶法生產(chǎn)藥用葡萄糖，不僅可以充分利用資源、節(jié)約成本，還可以增加大米的附加值。但是稻米在生長(zhǎng)的過(guò)程中施用了大量的農(nóng)藥，因此收獲的稻米中均有不同程度的農(nóng)藥殘留。盡管我國(guó)早在1983年就停止生產(chǎn)和禁止使用一些有機(jī)氯類農(nóng)藥（六六六和滴滴涕）[1]，但由于其高效的殺蟲能力，低廉的市場(chǎng)價(jià)格再加上廣泛的適用性，使其仍不絕于市場(chǎng)；另外由于結(jié)構(gòu)穩(wěn)定和難于降解的特點(diǎn)，有機(jī)氯農(nóng)藥在土壤、動(dòng)物、植物中均有不同程度的殘留，給生物體本身及后代造成了很大的危害[2]。農(nóng)藥對(duì)人體的危害主要表現(xiàn)為三種形式：急性中毒、慢性危害和“三致”（致癌、致畸、致突變）危害[3]。六六六、滴滴涕等有機(jī)氯農(nóng)藥，隨食物途徑進(jìn)入人體后，主要蓄積于脂肪中，其次為肝、腎、脾、腦中，通過(guò)人乳傳給胎兒引發(fā)下一代病變[4]。因此，為了保證糧食的安全性和保護(hù)人體的健康，檢測(cè)碎米中有機(jī)氯農(nóng)藥的殘留就顯得至關(guān)重要。本文參考2010版藥典以及相關(guān)文獻(xiàn)，采用氣相色譜-電子捕獲檢測(cè)（GC-ECD）法對(duì)湖南省部分地區(qū)的碎米中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)，旨在了解湖南各地水稻的有機(jī)氯殘留情況，為農(nóng)藥的合理使用和生產(chǎn)合格的藥用葡萄糖提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

α－BHC（批號(hào)：GBW（E）080725）、β－BHC（批號(hào)：GBW（E）080727）、γ－BHC（批號(hào)：GBW（E）0807229）、δ－BHC（批號(hào)：GBW（E）080731）、PP’－DDE（批號(hào)：GBW（E）080735）、OP’－DDT（批號(hào)：GBW（E）080739）、PP’－DDD（批號(hào)：GBW（E）080733）、PP’－DDT（批號(hào)：GBW（E）080737）和五氯硝基苯（PCNB）粉末（批號(hào)：GBW（E）060617）等 標(biāo)準(zhǔn)品，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心。

島津GC－2010氣相色譜儀 配SE－54彈性石英毛細(xì)管色譜柱（30m×0.25mm×0.32mm）、63Ni電子捕獲檢測(cè)器（ECD）；AE163電子分析天平 Mettler；FW 80微型高速萬(wàn)能試樣粉碎機(jī) 天津泰斯特儀器有限公司；KQ－250B超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；RE－5250真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 深圳三利化學(xué)品有限公司；飛鴿牌TDC－40B離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；N－EVAPTM 112氮吹儀 USA。

1.2 樣品的采集

采用隨機(jī)抽樣的方法從湖南六個(gè)市區(qū)（常德、長(zhǎng)沙、岳陽(yáng)、株洲、郴州、益陽(yáng)）分別抽取碎米樣本各九份。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備 精密稱取六六六（BHC）（α－BHC，β－BHC，γ－BHC，δ－BHC）、滴滴涕（DDT）（PP’－DDE，PP’－DDD，OP’－DDT，PP’－DDT）及五氯硝基苯（PCNB）農(nóng)藥對(duì)照品適量，用石油醚（60～90℃）分別制成每1m L約含4～5μg的溶液；精密量取上述各對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5m L置于10m L容量瓶中，用石油醚（60～90℃）稀釋至刻度，搖勻；精密量取上述混合儲(chǔ)備液對(duì)照品，用石油醚（60～90℃）制成每1L分別含有0、1、5、10、50、100、250μg的溶液，即得。

1.3.2 樣品溶液的制備 取適量碎米碎成細(xì)粉，取約2g，精密稱定，置于100m L具塞錐形瓶中，加水20m L，超聲處理30m in，精密加丙酮40m L，稱定重量，超聲處理30m in，冷卻，再稱定重量，用丙酮補(bǔ)足減失的重量，再加氯化鈉約6g，精密加二氯甲烷30m L，稱定重量，超聲處理15min，再稱定重量，用二氯甲烷補(bǔ)足減失重量，靜置分層，將有機(jī)相迅速移入裝有適量無(wú)水硫酸鈉的100m L具塞錐形瓶，放置4h。精密量取35m L，于40℃水浴上旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至近干，加少量石油醚（60～90℃），如前反復(fù)操作至少三次，至二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚（60～90℃）溶解并轉(zhuǎn)移至10m L具塞刻度離心管中，加石油醚（60～90℃）精密稀釋至5m L，小心加入硫酸1m L，振搖1min，離心（3000r/min）10m in，精密量取上清液2m L，置于具刻度的試管中，用氮吹儀將溶液濃縮至適量，精密稀釋至1m L，即得。

1.3.3 色譜條件 色譜柱：SE－54（30m×0.25mm× 0.32mm）彈性石英毛細(xì)管色譜柱，進(jìn)樣口溫度260℃，檢測(cè)器溫度300℃，色譜柱程序升溫：初始120℃，保持6m in，5℃/m in升至220℃，保持10m in，8℃/m in升至250℃，保持15m in，檢測(cè)總時(shí)間為54.75m in。載氣為高純氮（質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞99.999%），氣流量為30m L/m in，1μL不分流進(jìn)樣，外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 系統(tǒng)適應(yīng)性

在確定好的色譜條件下，取按照1.3.1項(xiàng)下制備的混合標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩色譜峰分離度大于1.5[5]，理論塔板數(shù)按α－BHC對(duì)照品峰計(jì)算高于1×106，并確定9種有機(jī)氯農(nóng)藥的保留時(shí)間（圖1）。

圖1 250μg/L有機(jī)氯標(biāo)準(zhǔn)混合液色譜圖Fig.1 GC chromatogram of standard solutions of organochlorine pesticides（250μg/L）

從左到右依次是：α－BHC（15.56m in）、β－BHC（16.75min）、γ－BHC（17.02min）、PCNB（17.24m in）、δ－BHC（18.07m in）、PP’－DDE（25.77m in）、PP’－DDD（27.72min）、OP’－DDT（27.91min）、PP’－DDT（29.91min）。

2.2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密稱量常德碎米樣本9份，按照1.3.2項(xiàng)下制備樣品，依法測(cè)定，將峰面積帶入回歸方程計(jì)算得，PCNB的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1147mg/kg，RSD為1.02%（最佳是小于1%[6]，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果約等于1%），方法的重復(fù)性好。

2.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取岳陽(yáng)碎米樣品溶液1μL，分別在0、2、4、6h依法連續(xù)測(cè)定3次，以質(zhì)量濃度計(jì)算α－BHC、β－BHC、γ－BHC、δ－BHC、PP’－DDE、PP’－DDD的RSD分別為0.8%、0.5%、1.1%、0.3%、0.6%、0.8%。均小于5%，說(shuō)明樣品在制備6h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4 檢出限測(cè)定

配制質(zhì)量濃度為0.1μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣，以3倍的噪聲作為儀器的最低檢出限，分別測(cè)得九種有機(jī)氯的檢出限（表1），本實(shí)驗(yàn)所檢測(cè)的9種有機(jī)氯農(nóng)藥的檢測(cè)限均低于1μg/L，因此實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明檢測(cè)器靈敏度良好。

表1 9種有機(jī)氯的儀器檢測(cè)限和方法檢測(cè)限Table 1 The device determination limitand method determination limit of 9 organochlorine pesticides

2.5 線性關(guān)系考察

分別精密吸取1.3.1項(xiàng)下混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各1μL進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（μg/L），計(jì)算回歸方程見表2。結(jié)果表明，各被測(cè)組分在0~ 250μg/L范圍內(nèi)峰面積和質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系。

表2 9種有機(jī)氯農(nóng)藥回歸曲線Table 2 Regression equation of 9 organochlorine pesticides

2.6 回收率實(shí)驗(yàn)

取常德碎米6份，每份取2g，精密稱定。分別準(zhǔn)確加入質(zhì)量濃度為250μg/L的混合對(duì)照品溶液0.1、0.5、0.9m L，混合后揮干溶劑。按1.3.2項(xiàng)下方法制備回收率供試品樣品溶液，每份依法測(cè)定3次，計(jì)算回收率見表3。

表3 回收率測(cè)定結(jié)果（RSD，%）Table3 Recovery resultsof9 organochlorine pesticides（RSD，%）

通過(guò)表3可知，不同農(nóng)藥量條件下，9種不同有機(jī)氯農(nóng)藥的回收率和RSD滿足農(nóng)藥殘留檢測(cè)的精密度的要求。當(dāng)檢測(cè)農(nóng)藥的含量在25～225ng或檢測(cè)濃度在5~250μg/L時(shí)，回收率處于86.83%～118.33%間，RSD在0.30%～2.32%之間，符合實(shí)際檢測(cè)的要求。

2.7 樣品的測(cè)定

準(zhǔn)確稱取各地區(qū)大米樣品，按照1.3.2項(xiàng)下制備樣品溶液，依法進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量見表4。

根據(jù)中國(guó)農(nóng)藥殘留量國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：糧食農(nóng)產(chǎn)品中滴滴涕、六六六、五氯硝基苯的農(nóng)藥殘留最高限量分別是0.2、0.3、0.1mg/kg[7]。從表4可知，只有常德的農(nóng)殘超標(biāo)，其PCNB含量為0.1147mg/kg，微大于0.1mg/kg。圖2為常德地區(qū)碎米中有機(jī)氯農(nóng)藥檢測(cè)的色譜圖。

圖2 常德碎米有機(jī)氯農(nóng)藥檢測(cè)色譜圖Fig.2 Gas chromatogram of organochlorine pesticides in rice from Changde

3 結(jié)論與討論

從方法學(xué)上可以看出：首先我們采用的提取方法是根據(jù)藥典改良的。與藥典方法相比，我們的方法更簡(jiǎn)單快捷、節(jié)省時(shí)間、節(jié)省試劑。與近年來(lái)發(fā)展的樣品前處理技術(shù)相比，該方法操作簡(jiǎn)單、成本較低[8-11]。其次，我們建立的方法中，九種有機(jī)氯的保留時(shí)間較短，比文獻(xiàn)中的保留時(shí)間縮短了近一半[12]，這不僅可以節(jié)省大量的操作時(shí)間，同時(shí)還可以減少儀器的損耗；最后，我們建立的方法回收率高、重現(xiàn)性好、檢測(cè)靈敏度高、可用于大批量的樣品檢測(cè)，為有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的檢測(cè)提供了一個(gè)可靠的方法。

從檢測(cè)結(jié)果來(lái)看：岳陽(yáng)和益陽(yáng)碎米中的有機(jī)氯農(nóng)藥殘留種類較多，主要是六六六和滴滴涕兩類，但是殘留量并沒(méi)有超標(biāo)，因此可以得知，兩地農(nóng)民對(duì)這兩種農(nóng)藥的使用較多，今后應(yīng)該在量上嚴(yán)格控制，否則就要超出安全范圍；常德碎米樣品只有PCNB一種殘留，但其殘留量超過(guò)了安全范圍，因此我們可以得知該地的農(nóng)民用藥比較單一，但是用量卻比較大，可能存在濫用的現(xiàn)象；株洲、郴州和長(zhǎng)沙檢測(cè)結(jié)果較好，僅有一種農(nóng)藥的微量殘留；益陽(yáng)的碎米農(nóng)藥殘留種類較多，含量較少。從以上結(jié)果可以看出，各地用藥情況參差不齊，但總的來(lái)講六六六和滴滴涕兩大類農(nóng)藥仍是使用較多的，因此，以后有關(guān)部門應(yīng)該加強(qiáng)對(duì)這種農(nóng)藥的限制使用，以確保糧食安全。

表4 大米樣品中有機(jī)氯檢測(cè)結(jié)果（mg/kg）Table 4 Organochlorine determination results in the rice samples（mg/kg）

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Determ ination of organochlorine pesticides residues in broken rice for pharmaceuticalglucose by gas chromatography

ZHANG Xiu-zhen1，GONG Yong-fu2，YANG Man-hua2，REN Zhen-m ian2，XIAO Yi-yun1，WEN Jia-gen1，XIAO Shao-xiang3，CHEN Yu-xiang1，2，*
（1.School of Pharmacy，Central South University，Changsha 410008，China；2.Wanfu Biotechnology（Hunan）Agriculture Development Co.，Ltd.，Taoyuan 410218，China；3.Hunan Vocational College of Technology，Changsha 410004，China）

Organochlorine pesticides residues in rice in several Hunan d istrict was exam ined so as to p rovide security for p roduc tion of pharmaceuticalg lucose which wasmade w ith b roken rice and a reasonab le reference for the app lication of organic pesticides.The mod ified method of Chinese pharmacopoeia was used to extract and p repare the samp les which were analyzed by gas chromatography w ith SE-54 fused silica cap illary column（3.0m×0.25mm×0.32mm）and the contents ofnine organic chlorine pesticide were separated by column tem perature p rogram and detected by electronic cap ture detector，calculated by external standard.The results showed that organic chlorine pesticides in rice were determ ined and found in all sam p les.This method was fast，sim p le and accurate that it could be used to determ ine organic chlorine pesticide in rice.

organic chlorine pesticide residues；rice；gas chromatog raphy

TS210.1

A

1002-0306（2012）14-0093-04

2011－11－25 *通訊聯(lián)系人

張秀珍（1987-），女，碩士研究生，研究方向：新藥新制劑。