， *，

(1.浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，浙江杭州 310013；2.杭州唐天科技有限公司)

亞太地區(qū)，飼料原料和配合飼料中以黃曲霉毒素、赭曲霉素、橘霉素、T-2毒素、嘔吐毒素(DON)、串珠鐮孢菌毒素和玉米赤霉烯酮等的危害最為嚴(yán)重。Sway等(2005)分析了配合飼料樣品中的黃曲霉毒素、煙曲霉毒素、赭曲霉毒素、T-2毒素、DON和玉米赤霉烯酮，超過(guò)90%的樣品中都含有以上6種霉菌毒素[1]。

長(zhǎng)期飼用含有霉菌及霉菌毒素的飼料可導(dǎo)致畜禽生長(zhǎng)受阻，生產(chǎn)性能下降,畜禽處于亞健康或弱體質(zhì)狀態(tài)，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重危害和經(jīng)濟(jì)損失，尤以黃曲霉毒素B1(AFB1)的毒性最強(qiáng)，長(zhǎng)期采食含有此類毒素的飼料可使動(dòng)物發(fā)生肝癌等病變，是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)致癌物[2]。本試驗(yàn)的目的是探究AFB1導(dǎo)致肉雞肝損傷模型，并確定其劑量與作用時(shí)間，為生產(chǎn)實(shí)踐提供理論支持和今后研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

試驗(yàn)動(dòng)物：1日齡羅斯308肉雞96羽，由浙大正大種禽公司提供。

黃曲霉毒素B1(AFB1)：購(gòu)自FERMENTEK公司，純度≥98%。批號(hào)：AF022a。

二甲基亞砜(DMSO)：購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。批號(hào)：20100528。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì) 建立肝臟損傷模型，試驗(yàn)分3組，每組32羽。詳見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及分組

試驗(yàn)在浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院抗生素替代物實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)基地進(jìn)行，木屑?jí)|料平地飼養(yǎng)，自由采食，充足飲水。

對(duì)照及試驗(yàn)Ⅰ～Ⅱ組肉雞從8日齡開(kāi)始連續(xù)6 d分別嗉囊注射DMSO 0.1 mg/kg體重，AFB10.1 mg/kg體重和AFB10.2 mg/kg體重。

飼養(yǎng)期14 d。育雛期間按常規(guī)方法飼養(yǎng)管理。日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分，詳見(jiàn)表2。

1.3樣品采集 在注射DMSO及AFB1后第3 d和第6 d空腹稱重、抽血，每組剖殺6羽，采集肝臟、十二指腸組織，福爾馬林保存用于HE染色制作切片。

1.4觀察指標(biāo) 測(cè)定短期內(nèi)注射AFB1對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響及肉眼觀察臨床癥狀與肝臟組織、十二指腸組織病理變化情況。

表2 日糧組成及主要營(yíng)養(yǎng)成分

2 結(jié)果與分析

2.1短期內(nèi)注射AFB1對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響 詳見(jiàn)圖1。

圖1 短期內(nèi)連續(xù)注射AFB1對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

由圖1可見(jiàn)，短期內(nèi)注射AFB1(0.1 mg/kg體重和0.2 mg/kg體重)與對(duì)照組(注射DMSO 0.1 mg/kg體重)，對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能無(wú)明顯影響。在試驗(yàn)期內(nèi)各組肉雞均無(wú)死亡。

2.2短期內(nèi)注射AFB1臨床癥狀和肉眼觀察 試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，注射AFB1組肉雞飲水采食情況正常，但精神略顯萎靡，表現(xiàn)略見(jiàn)虛弱。注射第5 d后，試驗(yàn)雞出現(xiàn)腿軟，很少站立；皮膚發(fā)紫，體軀有多處出血部位。且注射AFB10.2 mg/kg體重比AFB10.1 mg/kg體重組，情況更為嚴(yán)重。

2.3注射AFB1后對(duì)肉雞肝臟組織損傷的病理切片比較 詳見(jiàn)表3、圖2。

表3 注射AFB1后對(duì)肉雞肝臟損傷程度的肉眼觀察

由圖2可見(jiàn)，注射AFB1后肉雞肝臟出現(xiàn)明顯的顆粒變性、水泡變性和脂肪變性。

2.4注射AFB1后肉雞十二指腸組織損傷的病理切片比較 詳見(jiàn)圖3。

由圖3可見(jiàn)，注射AFB1后肉雞十二指腸黏膜上皮細(xì)胞絨毛有明顯的斷裂和逐漸脫落現(xiàn)象。

3 討論與結(jié)論

3.1本試驗(yàn)采用嗉囊注射AFB1的肉雞，人工誘發(fā)肉雞肝臟損傷模型。注射5 d后，試驗(yàn)雞出現(xiàn)腿軟，很少站立；皮膚發(fā)紫，體軀有多處出血部位，這與丁伯良(1991)[3]報(bào)道基本一致。

試驗(yàn)表明，肝臟病理組織學(xué)變化為嚴(yán)重的顆粒變性，水泡變性和脂肪變性[4]。AFB1在腸道吸收，經(jīng)門靜脈入肝，由于肝組織具有細(xì)胞膜通透性高、內(nèi)皮細(xì)胞不完整等特點(diǎn)，因而可使血液中大部分毒物，包括分子和離子狀態(tài)甚至與蛋白結(jié)合的毒物進(jìn)入肝組織，與肝組織結(jié)合的速度非常迅速；且肝細(xì)胞內(nèi)還含有特殊的結(jié)合蛋白，與毒物的親和力較強(qiáng)。

圖2 注射AFB1后對(duì)肉雞肝臟組織損傷的病理切片比較

另外，由于肝細(xì)胞的膜孔較一般細(xì)胞的大，是毒物在體內(nèi)進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化和排泄的主要器官，AFB1在肝組織中通過(guò)羥化和去甲基生成的物質(zhì)也有毒性，所以AFB1侵入肝組織的量大于侵入其他器官的量，受AFB1的毒害也最嚴(yán)重。

圖3 注射AFB1后肉雞十二指腸組織損傷的病理切片比較

3.2試驗(yàn)可見(jiàn)十二指腸黏膜上皮細(xì)胞絨毛有斷裂和逐漸脫落現(xiàn)象。隨著注射AFB1時(shí)間持續(xù)，十二指腸黏膜受到的破壞逐漸加重，表現(xiàn)為線粒體腫脹，部分線粒體充滿球形致密物質(zhì)，是蛋白性酶的復(fù)合物，或嵴內(nèi)腔某些變性產(chǎn)物的貯集，是細(xì)胞不可逆病變的標(biāo)志[5]。

試驗(yàn)證明，線粒體是與細(xì)胞合成和分泌等功能密切相關(guān)的細(xì)胞器，其結(jié)構(gòu)的破壞可使細(xì)胞的分裂、分泌功能受到破壞，加劇畜禽的發(fā)病和死亡。

3.3AFB1系劇毒物質(zhì)，實(shí)際生產(chǎn)中畜禽多為長(zhǎng)期攝入導(dǎo)致慢性中毒，尤其是幼齡畜禽比成年畜禽對(duì)黃曲霉毒素的易感性更強(qiáng)，造成的危害也更嚴(yán)重[6]。癥狀主要表現(xiàn)為：影響動(dòng)物的生長(zhǎng)、繁殖，抑制動(dòng)物的生長(zhǎng)速度，降低飼料轉(zhuǎn)化效率，降低產(chǎn)仔數(shù)，影響禽類的產(chǎn)蛋率和孵化率等[7-8]。

侯然然等(2008)[9]報(bào)道，采食含AFB1日糧后肉雞羽毛蓬亂、精神萎靡、食欲不振，體重、平均日增重、平均日采食量顯著下降，料重比升高。據(jù)王勇(2010)[10]報(bào)道，AFB10.1 mg/kg體重可使肉仔雞平均日增重顯著降低，料重比顯著升高，平均日采食量下降。以上報(bào)道與本試驗(yàn)結(jié)果短期內(nèi)注射AFB1對(duì)肉雞飲水采食情況正常，體重?zé)o明顯變化的情況基本不符，表明AFB1對(duì)肉雞肝臟和十二指腸的受損影響是個(gè)漸進(jìn)過(guò)程。其具體受損機(jī)理及影響程度有待進(jìn)一步研究探討。

[1]H.V.L.N.Sway. 亞太地區(qū)霉菌毒素：普遍性、負(fù)面影響、經(jīng)濟(jì)后果及其控制策略(上)[J].飼料廣角,2005(9):46-48.

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[9]侯然然,鄭姍姍,張敏紅,等．葡甘露聚糖對(duì)飼喂黃曲霉毒素B1日糧肉仔雞生長(zhǎng)性能、血清指標(biāo)及器官指數(shù)的影響[J]．動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2008a,20(2):146-151．

[10]王勇.黃曲霉毒素降解酶對(duì)飼喂含AFB1日糧肉仔雞生長(zhǎng)性能及健康的影響[D].保定:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2010.