沈 萍，史秋梅，高光平，董淑珍，尹海力，楊 超

(河北科技師范學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，河北 秦皇島，066600)

雞熱應(yīng)激嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展，尤其是現(xiàn)代化生產(chǎn)增大了雞群的密度，提高了雞群內(nèi)溫度，妨礙了雞的散熱，過高的溫度會(huì)導(dǎo)致雞熱應(yīng)激，影響雞的生長發(fā)育及生產(chǎn)性能，甚至可造成疾病流行。因此，如何提高蛋雞對(duì)熱應(yīng)激的抵抗力是現(xiàn)在人們關(guān)注的熱點(diǎn)之一。

中草藥抗熱應(yīng)激的研究日益受到人們的關(guān)注，中草藥中含有多種營養(yǎng)成分和天然化學(xué)成分，如維生素、微量元素等，其作用是多靶點(diǎn)的，在防病治病的同時(shí)，還能促進(jìn)生長、增強(qiáng)動(dòng)物的免疫機(jī)能、提高機(jī)體整體抗病能力。本試驗(yàn)通過蛋雞飲用不同濃度中草藥，在熱應(yīng)激條件下觀察其小腸黏膜上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞變化來闡述中草藥對(duì)熱應(yīng)激的抵抗效果。

1 材料與方法

1．1 試驗(yàn)材料

1．1．1 試驗(yàn)動(dòng)物 88日齡健康雛雞育成雞120只，品種為伊莎褐蛋雞。由河北科技師范學(xué)院牧場提供。

1．1．2 主要儀器與試劑 石蠟切片機(jī)、自動(dòng)磨刀機(jī)、電熱恒溫水浴鍋、DMB5-5數(shù)碼生物顯微鏡，光學(xué)顯微鏡等;甲醛溶液、Bouin固定液、不同濃度酒精、二甲苯、蘇木素-伊紅染色液、蛋白甘油、鹽酸酒精、冰醋酸、石蠟、中性樹膠等。由河北科技師范學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室提供。

1．1．3 中草藥 主要由藿香、薄荷、知母、紅景天等7味中草藥組成的方劑。由河北省預(yù)防獸醫(yī)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。

1．2 試驗(yàn)方法

120只88日齡伊莎褐蛋雞隨機(jī)平均分為6個(gè)組，其中3個(gè)組為試驗(yàn)組，分別飼喂高、中、低濃度中草藥，另3個(gè)組為對(duì)照組，一組中添加維生素C，一組置于高溫環(huán)境中，不添加任何藥物，最后一組于常溫環(huán)境中喂養(yǎng)。常溫環(huán)境約20℃，其余5組處于模擬高溫(27．6～33．7℃)環(huán)境中。具體設(shè)計(jì)如表1所示。

1．3 采樣及切片制備

1．3．1 采樣 試驗(yàn)各組分別于試驗(yàn)第1天、第4天、第8天和第10天隨機(jī)選取5只試驗(yàn)雞，空腹稱取質(zhì)量后頸動(dòng)脈放血處死，在小腸中段取約2 cm的腸段。

1．3．2 切片制備 將所取不同試驗(yàn)組的小腸段及時(shí)置于Bouin液中固定→不同濃度酒精脫水→二甲苯透明→浸蠟→石蠟包埋→切片(5 μm)→HE染色。

1．3．3 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及統(tǒng)計(jì) 在顯微鏡下(400×)觀察，每只雞觀察5張切片，每張切片觀察5個(gè)絨毛，每個(gè)絨毛選取100個(gè)小腸上皮細(xì)胞，計(jì)算其中的淋巴細(xì)胞數(shù)量，記錄數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)經(jīng)整理后，用SPSS17．0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各組間的差異采用單因子方差分析，試驗(yàn)結(jié)果用x±SD(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)表示。

表1 各試驗(yàn)組的藥物分配方法

2 結(jié)果與分析

在試驗(yàn)第1天雞的小腸黏膜上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量之間除高濃度中草藥組與高溫對(duì)照組差異顯著外其余各組間差異不大(表2);試驗(yàn)第4天時(shí)，除室溫對(duì)照組的淋巴細(xì)胞變化不大外，其余各組均有所增加，其中高濃度組增加最多，與室溫對(duì)照組間有極顯著的差異;而高溫對(duì)照組淋巴細(xì)胞也有所增加，可能是由于機(jī)體免疫機(jī)制啟動(dòng)，以對(duì)抗外界高溫的刺激，導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)淋巴細(xì)胞增多;試驗(yàn)第8天時(shí)，室溫對(duì)照組淋巴細(xì)胞數(shù)仍無太大變化，高溫對(duì)照組，由于雞體自身的抵抗力不足以對(duì)抗外界的高溫環(huán)境，導(dǎo)致機(jī)體衰弱，淋巴細(xì)胞生成減少。其余4組淋巴細(xì)胞數(shù)均有所增加，以顯示出機(jī)體對(duì)外界的抵抗力增加，能有效抵抗外界的高溫刺激;試驗(yàn)第10天時(shí)，室溫對(duì)照組中淋巴細(xì)胞數(shù)仍無太大變化，高溫對(duì)照組(圖1(a))中淋巴細(xì)胞數(shù)仍在減少，其余4組中淋巴細(xì)胞數(shù)仍在增加，3個(gè)中草藥組(圖1(b)，圖1(c)，圖1(d))中淋巴細(xì)胞數(shù)與Vc對(duì)照組(圖1(e))中的淋巴細(xì)胞數(shù)大體相等，且都遠(yuǎn)大于高溫對(duì)照組和室溫對(duì)照組，差異極顯著，其中高濃度組的淋巴細(xì)胞數(shù)最多，而室溫對(duì)照組(圖1(f))的淋巴細(xì)胞數(shù)也高于高溫對(duì)照組，差異極顯著。試驗(yàn)表明中草藥組和Vc組淋巴細(xì)胞數(shù)仍呈上升趨勢，且高濃度組淋巴細(xì)胞數(shù)最多，中草藥能有效抵抗高溫對(duì)雞體的不良刺激。

表2 各試驗(yàn)組雞小腸上皮細(xì)胞內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量變化

3 討 論

腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞是粘膜免疫系統(tǒng)中與腸腔內(nèi)抗原發(fā)生最直接接觸的免疫細(xì)胞，并與腸上皮細(xì)胞之間存在相互的免疫生理調(diào)節(jié)，在粘膜免疫中發(fā)揮著獨(dú)特的作用［1～3］。研究表明，腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞，具有中和外源細(xì)胞毒作用及分泌淋巴因子等多種功能，在受到相應(yīng)刺激時(shí)可被激活，從而在腸道免疫中發(fā)揮著重要的作用，是腸道免疫的主要組成部分。同時(shí)也具有抗原呈遞功能，可將抗原呈遞給T細(xì)胞，產(chǎn)生食物免疫耐受，對(duì)機(jī)體有重要的免疫作用［3，4］。本試驗(yàn)表明高溫應(yīng)激嚴(yán)重破壞蛋雞體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，導(dǎo)致機(jī)體熱衰竭、產(chǎn)蛋性能下降，而且對(duì)其免疫系統(tǒng)有抑制作用，腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯減少，表明腸道免疫功能下降，抵抗力減弱。通過觀察組織切片得知，熱應(yīng)激可以造成小腸的病理損傷性變化，病變主要涉及粘膜層。隨著試驗(yàn)進(jìn)行，小腸粘膜上皮細(xì)胞脫落加劇，從而抑制蛋白質(zhì)合成，降低了上皮細(xì)胞的更新率，使腸粘膜的上皮細(xì)胞再生能力下降，屏障機(jī)能減弱，以試驗(yàn)第10天時(shí)最為嚴(yán)重。而3個(gè)中草藥組和Vc對(duì)照組淋巴細(xì)胞數(shù)持續(xù)增加，說明了該中草藥和Vc可有效抵抗高溫對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的抑制作用。因此，腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量的變化能從一個(gè)方面反映了腸道黏膜免疫的狀態(tài)。

中草藥中的多糖成分具有免疫促進(jìn)作用，是中草藥中重要的活性成分。試驗(yàn)用的藿香中的多糖具有顯著的免疫促進(jìn)作用，可不同程度地提高試驗(yàn)動(dòng)物淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率，可使試驗(yàn)動(dòng)物機(jī)體內(nèi)的淋巴細(xì)胞數(shù)增加，尤其是T淋巴細(xì)胞［5］。試驗(yàn)表明，中草藥組能增加小腸上皮淋巴細(xì)胞的數(shù)量，保持小腸上皮的完整性。藿香揮發(fā)油能促進(jìn)胃液分泌，提高消化能力，對(duì)胃腸道有解痙作用。胃腸功能加強(qiáng)，食物被有效消化吸收，小腸上皮細(xì)胞因此生長旺盛，腸上皮細(xì)胞不斷地更新，以增強(qiáng)上皮的功能和耐受性，從而增強(qiáng)屏障作用。薄荷為傳統(tǒng)的辛涼解表藥，為疏散風(fēng)熱的要藥，昧辛、性涼，具有辟穢、疏肝、解毒的功效。在高溫條件下，薄荷的疏散風(fēng)熱作用可有效緩解高溫的刺激。薄荷及其有效成分均有解痙作用，能抑止胃腸平滑肌收縮，在胃腸受到不利刺激時(shí)能夠緩解不利刺激對(duì)其造成的傷害［6］。知母具有退熱、鎮(zhèn)靜、抗炎、利尿等作用。紅景天產(chǎn)于青藏高原，無污染，天然純凈，為青藏特有名貴藥材。能提升機(jī)體對(duì)有害刺激的非特異性抵抗力，加強(qiáng)機(jī)體的適應(yīng)性，具有抗腦缺氧、抗疲勞、活血止血、清肺止咳、化淤消腫、解熱退燒、滋補(bǔ)元?dú)獾茸饔茫?-9］。Vc可促進(jìn)淋巴母細(xì)胞的生成，從而提高機(jī)體的免疫力，還可提高機(jī)體的應(yīng)激能力［10］。

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