高光平，張艷英，高桂生，張東林，史秋梅

(河北科技師范學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，河北省預(yù)防獸醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北秦皇島，066600)

仔豬腹瀉是一種典型的多因素性疾病，常會(huì)導(dǎo)致飼料報(bào)酬率低［1］，仔豬成活率下降，生長(zhǎng)緩慢，生長(zhǎng)發(fā)育停滯(僵豬)，甚至死亡，1～3月齡仔豬多發(fā)，有的規(guī)?；i場(chǎng)仔豬腹瀉發(fā)病率高達(dá)50%以上，死亡率15%～20%，是引起仔豬生長(zhǎng)受阻和高死亡率的重要原因，每年給養(yǎng)豬業(yè)帶來的直接經(jīng)濟(jì)損失上億元。

長(zhǎng)期使用抗生素易產(chǎn)生耐藥性細(xì)菌及藥物在畜禽產(chǎn)品中殘留，并通過食物鏈影響人類健康，對(duì)人類生存造成威脅［2，3］，因此許多國(guó)家禁止或限制一些抗生素在動(dòng)物養(yǎng)殖中的應(yīng)用。很多中藥兼有營(yíng)養(yǎng)與藥用兩種屬性，不但可以促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)，改善產(chǎn)品品質(zhì)，還能抑制病原菌，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，提高抗病力，從而達(dá)到促進(jìn)生長(zhǎng)，防病治病的目的。安全性試驗(yàn)是開發(fā)研制新藥不可缺少的環(huán)節(jié)，為了檢驗(yàn)中草藥制劑的安全性，做亞急性毒性試驗(yàn)是必要的［4～8］。

1 材料與方法

1．1 實(shí)驗(yàn)材料

1．1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 56只昆明系小白鼠，雌雄各半，體質(zhì)量(20±2)g。

1．1．2 藥物與試劑 自擬防治豬腹瀉、促進(jìn)增長(zhǎng)的純中藥制劑(暫定名:固腸促長(zhǎng)散)，由黃芩、白術(shù)、甘草等藥物組成;谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、黃嘌呤氧化酶、總膽紅素測(cè)定試劑盒均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1．1．3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備 TU-1901系列紫外/可見分光光度計(jì)，BCC-1000D半自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀，BX51顯微鏡等。

1．2 實(shí)驗(yàn)方法

固腸促長(zhǎng)散開水沖泡20 min，過濾，低溫濃縮成10 g/L的中藥液。56只小白鼠隨機(jī)分成4組，每組14只。1，2，3 組分別為中藥液的高、中、低劑量組，分別以 0．3，0．2，0．1 mL/只劑量灌胃，每組灌胃體積均為0．3 mL，第4組為對(duì)照組，灌生理鹽水0．3 mL。各組連續(xù)灌胃14 d，每天1次，停藥后再持續(xù)觀察14 d。

1．3 觀察指標(biāo)

1．3．1 臨床觀察 每天觀察小白鼠的一般狀況，每周測(cè)定體質(zhì)量變化情況。

1．3．2 血常規(guī)檢查 于停藥后第l天和第14天，各組隨機(jī)抽取7只，剪斷眼球采血，質(zhì)量濃度為38 g/L的檸檬酸鈉抗凝(V抗凝劑∶V血=1∶4)，立即測(cè)定血液生理指標(biāo)。

1．3．3 血清生化指標(biāo)測(cè)定 于停藥后第l天和第14天，每組隨機(jī)取7只，剪斷眼球采血，分離血清，分別測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、黃嘌呤氧化酶、總膽紅素含量。

1．3．4 小白鼠剖檢 于停藥后第l天每組隨機(jī)抽取7只，停藥后第14天對(duì)剩余所有小白鼠剖檢，眼觀臟器組織病變情況，并摘取肺臟、脾臟、腎臟、胸腺、肝臟，浸泡于體積分?jǐn)?shù)為0．1的甲醛溶液中固定，HE染色，40倍鏡組織學(xué)觀察。

1．4 數(shù)據(jù)處理

各項(xiàng)測(cè)定結(jié)果數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，各種數(shù)據(jù)間差異顯著性比較采用DPS V3．01專業(yè)版軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)和方差分析。

2 結(jié)果與分析

2．1 各組小白鼠臨床表現(xiàn)

各組小白鼠在灌胃給藥后，臨床觀察無異常表現(xiàn)。各試驗(yàn)組在給藥第7天、第14天和停藥后第7天、第14天時(shí)的體質(zhì)量增加幅度與對(duì)照組相比無顯著差異(p＞0．05)(表1)。

表1 各組小白鼠灌藥前后的平均體質(zhì)量 g

2．2 各組小白鼠血常規(guī)變化

試驗(yàn)組小白鼠的紅細(xì)胞總數(shù)、白細(xì)胞總數(shù)、血紅蛋白含量、血小板數(shù)在停藥后第l天及停藥后第14天與對(duì)照組相比無顯著差異(p＞0．05)(表2)。

表2 各組小白鼠血常規(guī)的變化

2．3 各組小白鼠血清生化值變化

3個(gè)試驗(yàn)組小白鼠的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、黃嘌呤氧化酶、總膽紅素含量在停藥后第l天及停藥后第14天與對(duì)照組相比無顯著差異(p＞0．05)(表3)。

2．4 各組小白鼠病理學(xué)變化

在停藥后第l天和第14天，剖檢各組小白鼠，其心、肝、脾、肺、腎、胃和腸的形態(tài)、顏色、質(zhì)地均正常;HE染色，40倍鏡組織學(xué)觀察，各個(gè)組織、器官均未見異常。

3 結(jié) 論

3．1 固腸促長(zhǎng)散對(duì)小白鼠體質(zhì)量的影響

在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)，固腸促長(zhǎng)散不同劑量組和對(duì)照組小白鼠的體質(zhì)量增加差異不顯著。

3．2 固腸促長(zhǎng)散對(duì)小白鼠血常規(guī)、血清生化指標(biāo)的影響

固腸促長(zhǎng)散的高、中、低等3個(gè)灌胃劑量均高于推薦的臨床給藥劑量(1 mL/kg)，給藥時(shí)間14 d，也大大長(zhǎng)于臨床推薦的給藥時(shí)間(3～5 d)，連續(xù)給藥14 d后和停藥后14 d，各劑量組小白鼠的血常規(guī)、血清生化值與對(duì)照組相比均未發(fā)生顯著性變化。

3．3 固腸促長(zhǎng)散對(duì)小白鼠內(nèi)臟器官的影響

剖檢觀察各組小白鼠胸腺、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胃臟和腸道均正常，組織學(xué)檢查也未見異常。

以上結(jié)果表明，固腸促長(zhǎng)散按照推薦的給藥劑量和給藥療程無亞急性毒性，固腸促長(zhǎng)散對(duì)小白鼠的生長(zhǎng)和各項(xiàng)生理指標(biāo)無顯著影響，臨床應(yīng)用安全。

表3 各組血清生化值的變化

［1］宣長(zhǎng)和．豬病學(xué)［M］．北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2003．

［2］計(jì)成，郭巨恩，楊瑛，等．在畜牧生產(chǎn)中使用抗生素添加劑引發(fā)的問題［J］．中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào)，2001，3(1):55-58．

［3］侯雁，那小平．綠色飼料天然無殘留動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑的生產(chǎn)技術(shù)研究［J］．畜禽業(yè)，2001(6):45．

［4］尹章漢，許四元，樊柏林，等．消食口服液食用安全性研究［J］．湖北預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2000，11(4):23-24．

［5］金宏，許建平，孫志良，等．獸用地錦草注射液的安全性試驗(yàn)研究［J］．湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，1999(5):48．

［6］關(guān)建紅，薛征，任晉斌．薟草水煎劑小鼠急性毒性及亞急性毒性的試驗(yàn)研究［J］．中國(guó)試驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2007，13(11):50．

［7］農(nóng)業(yè)部獸藥審評(píng)委員會(huì)辦公室．獸藥試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范匯編［M］．北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社，2001．

［8］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司．全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程［M］．北京:人民衛(wèi)生出版社，2006．