柴江平，劉仁平，葛海生，王曉飛△，侯 琦

(1.中國中醫(yī)科學(xué)院 廣安門醫(yī)院，北京 100053;2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所＆北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，北京 100050;3.中國人民武裝警察部隊藥品儀器檢驗所，北京 102613)

變應(yīng)性鼻炎是特應(yīng)性個體接觸致敏原后由IgE介導(dǎo)的介質(zhì)(主要是組胺)釋放，并有多種免疫活性細(xì)胞和細(xì)胞因子等參與的鼻黏膜慢性炎癥反應(yīng)性疾?。?］，臨床上以鼻癢、噴嚏、鼻分泌亢進(jìn)、鼻黏膜腫脹為主要特征。本研究以卵白蛋白(OVA)激發(fā)建立大鼠變應(yīng)性鼻炎(AR)模型，造模成功后，通過ELISA法檢測給藥前后主要炎癥因子IgE和IL-5水平的變化，研究并探討柴新鼻敏康對AR的潛在治療作用。

1.1 動物

雌性SD大鼠50只，體重180g～200g，由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供(許可證編號SCXK-(軍)2007-004)。

1.2 藥物

柴辛鼻敏康是由柴胡、細(xì)辛、川芎等多味中藥加工而成的中藥制劑，給藥劑量為10 g/kg;磷酸鈉地塞米松注射劑 (Dexamethasone， DEX)購自天津藥業(yè)焦作有限公司(批號090325)，給藥劑量為1 mg/kg;千柏鼻炎片(廣州奇星藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號國藥準(zhǔn)Z44020750)，給藥劑量為10 g/kg;卵白蛋白、戊巴比妥鈉為美國Sigma公司產(chǎn)品。

1.3 試劑與儀器

主要試劑:Rat IgE ELISA試劑盒(BD Biosciences);Rat IL-5 ELISA試劑盒(BD Biosciences)。主要儀器:酶標(biāo)儀(美國，Bio-tek ELx800酶標(biāo)儀)

1.4 動物分組、模型制作及給藥

健康雌性SD大鼠50只，隨機分為正常對照組10只和造模組40只。造模組大鼠采用 OVA誘導(dǎo)致變應(yīng)性鼻炎模型，具體如下:OVA 1 mg，氫氧化鋁(Al(OH)3)10 mg與生理鹽水1 ml混合后，腹腔注射1ml/只/次進(jìn)行初次免疫，正常對照組的大鼠腹腔注射Al(OH)310mg與生理鹽水1ml混合液。第10天重復(fù)上述步驟1次以加強免疫;致敏2周后，再將造模組大鼠隨機分為模型組、地塞米松(DEX)組、千柏鼻炎片組和柴辛鼻敏康組4組，每組10只。隨后造模組大鼠均給予5%OVA滴鼻100 μL(鼻雙側(cè)/d)，連續(xù)7d，滴鼻誘發(fā)變應(yīng)性鼻炎。7d后，地塞米松(Dex)組、千柏鼻炎片組以及柴辛鼻敏康組的大鼠分別灌胃給予地塞米松、千柏鼻炎片混懸液、柴辛鼻敏康混懸液，連續(xù)給藥10d，正常對照組大鼠灌胃等體積蒸餾水。

1.5 指標(biāo)檢測

1.5.1 行為學(xué)指標(biāo)檢測 于末次滴鼻發(fā)敏后即刻(0h)、1h、2h進(jìn)行動物模型行為學(xué)觀察，搔鼻動物、噴嚏、鼻溢液和覓食行為各項指標(biāo)均采用疊加量化記分法。記分標(biāo)準(zhǔn):鼻癢:輕搔鼻1～2次為1分，劇烈搔抓鼻4周2分;噴嚏:1～4個為1分，4～10個2分，＞10個3分;鼻涕:流至鼻孔為 1分，超出前鼻孔為2分，涕流滿面3分。

1.5.2 大鼠血清中IgE、IL-5含量的檢測 給藥結(jié)束后，將大鼠以45mg/kg劑量的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，腹主動脈取血。血液靜置20 min后，以2000r/min轉(zhuǎn)速離心取上清液，－80℃保存?zhèn)溆?。根?jù)試劑盒說明書，采用ELISA法檢測血清中IgE、IL-5的含量。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 柴新鼻敏康對變應(yīng)性鼻炎大鼠行為學(xué)特征的影響

表1顯示，動物行為觀察結(jié)果可見，與正常對照組相比，卵白蛋白(OVA)刺激后，模型組大鼠表現(xiàn)出鼻癢、打噴嚏等較明顯的變應(yīng)性鼻炎特征。相對模型組大鼠，地塞米松組和柴新鼻敏康組大鼠鼻癢、打噴嚏等行為有所緩解。行為學(xué)特征疊加量化記分統(tǒng)計結(jié)果顯示，柴新鼻敏康和地塞米松具有一定的抑制鼻炎效果，且具有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 行為學(xué)特征疊加量化記分統(tǒng)計結(jié)果(±s)

表1 行為學(xué)特征疊加量化記分統(tǒng)計結(jié)果(±s)

注:與正常對照組比較:＊＊P＜0.01;與模型組比較:△P＞0.05，△△P＜0.01

組別 0h 1h 2h正 常 對 照 組 0.40±0.74 0.00±0.00 0.00±0.00模 型 組 2.20 ±0.78＊＊ 1.30 ±1.15＊＊ 1.40 ±0.96＊＊地 塞 米 松 組 0.70±1.03△△ 0.00±1.03△△ 0.80±0.00千 柏 片 組 1.40±1.13 0.40±0.78 1.10±1.06柴新鼻敏康組 1.00±1.09△ 0.2±0.40△△ 0.00±0.00△△

2.2 柴新鼻敏康對變應(yīng)性鼻炎大鼠血清IgE水平的影響

與正常對照組比較，模型組大鼠血清IgE水平增高;與模型組比較，地塞米松能夠抑制大鼠血清中IgE的表達(dá)(抑制率6.5%)。與之相似，受試藥物鼻敏康也能抑制血清中IgE的表達(dá)(抑制率9.4%)，且具有統(tǒng)計學(xué)意義(與對照組比較P＜0.01)。

圖1 酶聯(lián)免疫法檢測大鼠血清中IgE蛋白濃度

2.3 柴新鼻敏康對變應(yīng)性鼻炎大鼠血清IL-5水平的影響

與正常對照組比較，模型組大鼠血清IL-5水平增高。與模型組比較，柴新鼻敏康能明顯抑制血清中IL-5的表達(dá)(抑制率10.3%)，且具有統(tǒng)計學(xué)意義(與對照組比較P＜0.05)。

圖2 酶聯(lián)免疫法檢測大鼠血清中白介素5濃度

3 討論

變應(yīng)性鼻炎屬于Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，其發(fā)生迅速，在接觸變應(yīng)原后數(shù)秒鐘至數(shù)小時發(fā)生癥狀，其發(fā)病機制由IgE介導(dǎo)。在變態(tài)反應(yīng)中，肥大細(xì)胞(MCs)是變應(yīng)性反應(yīng)的靶細(xì)胞，MCs受到抗原攻擊脫顆粒，MCs通過釋放組胺、白三烯、緩激肽、嗜酸性細(xì)胞趨化因子IgE與MCs表面IgE的Fc受體結(jié)合，使機體對該抗原處于“致敏”狀態(tài)，當(dāng)機體再次接觸相同抗原時，該抗原可與已結(jié)合在MCs表面的 IgE結(jié)合，使MCs細(xì)胞膜上的 FcεRI發(fā)生交聯(lián)，產(chǎn)生橋聯(lián)反應(yīng)，觸發(fā)一系列生化反應(yīng)，使細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高，導(dǎo)致MCs脫顆粒，釋放炎性介質(zhì)并合成新的炎性介質(zhì)。這些物質(zhì)作用于鼻黏膜的血管，引起血管擴張、血漿滲出增加、鼻黏膜水腫;作用于膽堿能神經(jīng)，使腺體分泌旺盛;作用于感覺神經(jīng)使黏膜敏感性增高，噴嚏發(fā)作，從而產(chǎn)生變應(yīng)性鼻炎的臨床癥狀。

IL-5是由活化的Th2輔助細(xì)胞分泌，被認(rèn)為是嗜酸粒細(xì)胞(EOS)重要的活化因子。嗜酸粒細(xì)胞可浸潤鼻黏膜局部，釋放具有很強的細(xì)胞毒性和神經(jīng)毒性的強堿性顆粒蛋白，如嗜酸粒細(xì)胞陽離子蛋白(ECP)以及主要堿性蛋白(MCP)，導(dǎo)致鼻黏膜上皮損傷、通透性增高、腺體分泌增加等，產(chǎn)生臨床癥狀。因此，鼻腔黏膜的IL-5是變應(yīng)性鼻炎發(fā)病機制中必不可少的細(xì)胞因子。IL-5對嗜酸性粒細(xì)胞的生物學(xué)活性有廣泛作用，包括誘導(dǎo)嗜酸性粒細(xì)胞前體細(xì)胞增殖和分化，延長嗜酸性粒細(xì)胞存活時間，以及選擇性趨化和激活成熟嗜酸性粒細(xì)胞等［2，3］。IL-5在活化嗜酸粒細(xì)胞的同時，嗜酸粒細(xì)胞本身也能夠產(chǎn)生細(xì)胞因子IL-5，反饋性刺激更多的嗜酸粒細(xì)胞增殖、分化，從而造成AR病情的遷延難愈。由于IL-5和鼻黏膜組織 Eos、肥大細(xì)胞等呈正相關(guān)，因此，IL-5的水平能夠反映變應(yīng)性鼻炎的嚴(yán)重程度。張宗芬［4］等的研究證實了這一點。其研究發(fā)現(xiàn)，AR患者鼻部變應(yīng)原激發(fā)試驗后，鼻腔灌洗液中IL-5的水平與AR患者的癥狀呈正相關(guān)，IL-5與嗜酸性細(xì)胞陽離子蛋白呈顯著相關(guān)。本實驗研究結(jié)果表明，柴新鼻敏康對變應(yīng)性鼻炎大鼠搔抓、噴嚏、清涕等癥狀改善明顯，且與模型組大鼠相比，柴辛鼻敏康組大鼠血清中IgE和IL-5水平均明顯降低，說明柴辛鼻敏康對AR大鼠外周血血清中IgE和IL-5的產(chǎn)生有明顯的抑制作用。這也提示柴新鼻敏康治療變應(yīng)性鼻炎的機理，可能是通過降低IgE和IL-5的水平抑制變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生，從而改善鼻塞、流清涕、打噴嚏等變應(yīng)性鼻炎的癥狀。需要指出的是，變應(yīng)性鼻炎是一種機制復(fù)雜的慢性炎癥反應(yīng)性疾病，本研究只是初步探討了柴新鼻敏康對其的治療作用及可能的作用機理，柴新鼻敏康對于該病的作用機制還需要進(jìn)一步的深入探索。

［1］中華耳鼻喉科頭頸外科雜志編輯委員會，中華醫(yī)學(xué)會耳鼻喉科分會.變應(yīng)性鼻炎的治療原則和推薦方案［J］.中華耳鼻喉科頭頸外科雜志，2005，40(3):166-167

［2］張羅，韓德民，張波.IL-5在鼻息肉發(fā)病機制中的作用［J］.國外醫(yī)學(xué)·耳鼻咽喉科學(xué)分冊，2000，24(4):223-226.

［3］張羅，韓德民.細(xì)胞因子與鼻息肉中嗜酸性粒細(xì)胞浸潤增多的關(guān)系［J］.臨床耳鼻咽喉科雜志，2001，15(2):93-95.

［4］張宗芬，袁潤英，李氫元，等.變應(yīng)性鼻炎患者鼻腔灌洗液中白細(xì)胞介素5、嗜酸細(xì)胞陽離子蛋白水平的動態(tài)觀察［J］.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，2000，20(5):418.