袁 丁,張學(xué)敏,施 紅

(福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院,福建 福州 350108)

既往研究[1～3]表明,由丹參、石斛等數(shù)味中藥組成的石斛合劑預(yù)先給藥能在一定程度上減輕高脂高糖加鏈脲佐菌素(STZ)造成的高血糖及對(duì)胰島的損傷,其治療給藥能顯著降低實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的高血糖,調(diào)節(jié)胰島素分泌、升高胰島素 /C肽比值 ,降低總膽固醇 (TC)、甘油三酯 (TG)、游離脂肪酸(FFA)、TN F-α水平,臨床觀察顯示該方降糖療效穩(wěn)定,病情不易反復(fù)。為觀察石斛合劑中的主方丹參片對(duì)糖尿病超氧化物岐化酶藥——丹參的作用,探討石斛合劑防治糖尿病的理論依據(jù),我們進(jìn)行了以下相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康清潔級(jí)昆明小鼠 190只(2月齡,體重18～23g),由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供。

1.2 藥物

丹參:生藥含量1.5g/mL(相當(dāng)于臨床用量);石斛合劑:生藥含量2.4g/mL(各單味藥用量均相當(dāng)于1/3臨床用量)。

1.3 試劑

四氧嘧啶(ALX),由 Sigma公司提供;空腹血糖(FBG)、糖化血清蛋白(GSP)、甘油三酯(TG)、總膽固醇 (TC)測(cè)試盒均由南京建成生物有限公司提供。

1.4 分組及給藥方法

小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周,(去除體重 ＜20g或＞25g,共計(jì)184只),按體重隨機(jī)分為正常組、模型組、丹參組和石斛合劑組,除正常組10只外,其余各組均58只。正常組:腹腔注射生理鹽水1次后,生理鹽水灌胃 5周;模型組:腹腔注射 ALX(200mg/kg)后,生理鹽水灌胃5周。丹參組和石斛合劑組 ,經(jīng)相應(yīng)中藥灌胃預(yù)防給藥 3d后,腹腔注射 ALX(200mg/kg)。第4天測(cè)各組空腹血糖,以 FPG≥11.1mmol/L[4,5]為成模鼠。(中藥從預(yù)防給藥起持續(xù)給藥5周,包括預(yù)防給藥 3d,造模期間4d以及成模后的治療給藥4周)。5周后摘眼球采血,并取胰腺組織,檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。(上述腹腔注射量為0.1mL/10g,灌胃量為0.2mL/10g)。

1.5 觀察指標(biāo)及方法

1.5.1 一般情況觀察:包括小鼠的進(jìn)食量、進(jìn)水量、精神及活動(dòng)狀態(tài)、大便性狀、尿量及每天體重變化。

1.5.2 FBG、GSP、TG、TC分別采用葡萄糖氧化酶法 ,果糖胺法、TG酶法、CHO酶法。

1.5.3 常規(guī)病理切片 取 Lille液固定胰腺,常規(guī)石蠟包埋切片,HE染色。結(jié)果觀察:每例選1個(gè)切片,40倍鏡下計(jì)數(shù) 5個(gè)視野的胰島數(shù)目,并在400倍鏡下隨機(jī)選5個(gè)胰島,量取長(zhǎng)度、寬度,計(jì)算胰島面積。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)數(shù)資料的比較采用兩個(gè)樣本率的比較(u檢驗(yàn)),計(jì)量資料的比較采用 t或 t’檢驗(yàn) ,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,均采用 SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件。

2 結(jié)果

2.1 一般情況觀察

正常組小鼠飲食飲水及二便正常,活動(dòng)正常,體毛濃密有澤,體重增長(zhǎng)明顯。預(yù)防治療組小鼠注射 ALX后第4天,出現(xiàn)多尿,多飲,活動(dòng)減少,體毛松散,精神不振,丹參組死亡 2只,未成模44只;石斛合劑組死亡 0只,未成模32只。模型組小鼠多尿、多飲,活動(dòng)減少,體毛松散無(wú)澤等癥狀比預(yù)防治療組較為嚴(yán)重,體重明顯降低 ,精神萎靡,死亡 6只 ,未成模 26只。經(jīng)治療后,各治療組小鼠三多癥狀均有一定程度改善,活動(dòng)較模型組活躍。

2.2 中藥對(duì)小鼠成模率、死亡率和痊愈率的影響

小鼠的成模率和死亡率如表1所示,由于死亡的小鼠前一天的血糖儀檢測(cè)均顯示血糖為 H即＞30mmol/L,且組織病理學(xué)切片觀察顯示,小鼠胰腺組織很難找到胰島細(xì)胞。因此亦納入到 FPG達(dá)到 DM率中統(tǒng)計(jì)。

表1 中藥對(duì)小鼠成模率、死亡率的比較(n=58)

表2 中藥對(duì)小鼠痊愈率的比較(%)

表1、表2顯示:丹參和石斛合劑均具有顯著降低小鼠成模率,提高 DM小鼠治愈率和防治率 (P均 ＜0.01,其中治愈標(biāo)準(zhǔn)為血糖 ＜正常血糖的+ 3S,即血糖 ＜5.9mmol/L;糖化血清蛋白 ＜+2S,即 GSP＜2.44mmol/L)。與模型組比較,丹參防治率 u=5.16,石斛合劑防治率 u=4.26,二者均＞2.58,即均具有非常顯著預(yù)防和治療糖尿病作用。另外,與模型組比較,丹參具有明顯的預(yù)防作用 (P＜0.01),而石斛合劑則具有降低死亡率作用 (P＜0.05)。

2.3 中藥對(duì) DM小鼠血糖、糖化血清蛋白(GSP)和血脂的影響

表3 中藥對(duì)小鼠血糖、 GSP、TG、TC的比較 (±s,mmol/L)

表3 中藥對(duì)小鼠血糖、 GSP、TG、TC的比較 (±s,mmol/L)

注:與正常組比較,*P＜0.05,**P＜0.01。

組別 n 血糖 GSP TG TC正常組 10 4.72±0.40 2.36±0.04 1.25±0.13 2.38±0.10丹參組 12 8.74±2.67△△** 2.51±0.06△△** 1.66±0.18△△** 3.40±0.48**石斛組 26 10.51±4.35△△** 2.44±0.07△△* 1.69±0.30△** 2.89±0.48△**模型組 26 15.50±5.33** 2.69±0.8** 1.91±0.24** 3.27±0.51**

表3顯示:丹參與石斛合劑均可顯著降低 DM小鼠血糖,改善糖化血清蛋白,降低甘油三酯,而石斛合劑還能改善DM小鼠總膽固醇。

3 討論

中藥丹參性味苦,微寒,歸心、心包、肝經(jīng),具活血祛瘀,涼血消癰,除煩安神功效。現(xiàn)代研究表明[6～9]:丹參具有很強(qiáng)的抗脂質(zhì)過(guò)氧化和清除自由基,抗動(dòng)脈粥樣硬化、控制或延緩血管病變,降低 C反應(yīng)蛋白水平,抑制 T2DM炎癥反應(yīng)的發(fā)生,藥理作用十分廣泛。然而,單味丹參對(duì)糖尿病的直接作用以及對(duì)動(dòng)物成模率、防治率的影響未見(jiàn)報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)預(yù)先灌胃相當(dāng)于臨床劑量丹參的模型小鼠成模率非常明顯降低,說(shuō)明單味丹參預(yù)先給藥可明顯減輕ALX對(duì)胰島的損傷以及 ALX造成的高血糖;而預(yù)先灌服相當(dāng)于1/3臨床劑量石斛合劑則明顯降低了小鼠的死亡率(無(wú)一例死亡),且與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;提示低劑量的石斛合劑能有效抵御 ALX對(duì)胰腺的刺激與損傷。且將死亡小鼠 (血糖過(guò)高,＞ 32mmol/L)計(jì)算在內(nèi),則模型組的成模率為55.17%,臨床劑量丹參組的成模率為 24.13%,而1/3臨床劑量石斛合劑組為44.83%。說(shuō)明丹參已具有良好的預(yù)防糖尿病作用。經(jīng)過(guò)4周治療,1/3臨床劑量的石斛合劑與臨床劑量的丹參均能顯著改善 DM小鼠血糖,糖化血清蛋白水平,提示二者均具有降低機(jī)體血糖水平的作用;其中丹參組禁食血糖水平低于石斛合劑組,而對(duì)糖化血清蛋白的作用(反映 2周的平均血糖水平)不及石斛合劑組;提示臨床用量的丹參降低禁食血糖主要通過(guò)抑制肝糖輸出而實(shí)現(xiàn);而1/3臨床用量的石斛合劑平穩(wěn)機(jī)體血糖水平的能力主要通過(guò)降低餐后血糖水平而得以實(shí)現(xiàn)(此在臨床上已反復(fù)證實(shí) )。且在調(diào)節(jié)血脂代謝方面 ,臨床用量的丹參可降低 DM小鼠的 TG,而對(duì) TC尚未見(jiàn)顯著療效;而1/3臨床用量的石斛合劑對(duì) DM小鼠的TG和 TC均有顯效。

本實(shí)驗(yàn)說(shuō)明,臨床用量的丹參即可起到良好的預(yù)防和防治 DM作用,而1/3臨床用量的石斛合劑的預(yù)防作用以及降低 FBG功效略遜于單味丹參,但綜合石斛合劑對(duì)死亡率、糖化血清蛋白、血脂三者的作用,以及依據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)規(guī)律并結(jié)合我們既往多次實(shí)驗(yàn):臨床劑量的石斛合劑的整體療效優(yōu)于臨床劑量的單味丹參(隨之的驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)亦證實(shí)了這一點(diǎn))。說(shuō)明:單味丹參已具有顯著減輕 ALX對(duì)胰島的損傷,一定程度改善 ALX造成的高血糖、脂代謝紊亂,起到對(duì)糖尿病的良好防治作用,而石斛合劑的防治療效更為全面。

綜合而言,臨床用量的丹參預(yù)防 DM,降低 DM小鼠禁食血糖的作用優(yōu)于1/3臨床用量的石斛合劑。說(shuō)明:單味丹參已具有減輕 ALX造成的高血糖及對(duì)胰島的損傷,然而 ,石斛合劑中丹參的生藥含量?jī)H為單味丹參的1/3,只有當(dāng)藥量達(dá)到一定程度,血藥濃度達(dá)到一定水平時(shí)丹參才發(fā)揮其功效,故1/3臨床用量的石斛合劑的預(yù)防作用以及降血糖功效雖略遜于單味丹參,但綜合了死亡率、糖化血清蛋白、血脂水平三者,1/3臨床用量的石斛合劑綜合療效優(yōu)于臨床用量的丹參,其原因說(shuō)明由石斛、丹參、黃芪、五味子等中藥組成的精簡(jiǎn)方——石斛合劑,為針對(duì) DM陰虛為本、燥熱為標(biāo)的病機(jī)特點(diǎn)所立之方,具有滋陰、益氣、活血功效,可更有效抵御 ALX對(duì)胰腺巨大的刺激與損傷,并能協(xié)調(diào)機(jī)體各系統(tǒng)。

[1]施紅,楊奇紅,余文珍,等.石斛合劑預(yù)先給藥對(duì)糖尿病大鼠的防治作用 [J].福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2004,2(14):1

[2]施紅,陳玲.石斛合劑對(duì)高血糖動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究 [J].福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2000,10(2):23

[3]施紅,楊奇紅,張捷平,等.石斛合劑對(duì)高脂高糖加 STZ造模大鼠的作用及機(jī)制探討[J].中藥藥理與臨床,2002,18(3):22-23

[4]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,1993,215

[5]張均田.現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)方法 [M].北京:北京醫(yī)科大學(xué)、中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1998,981-982

[6]李芳平,寧艷輝.2型糖尿病下肢血管病變炎癥因子及丹參的干預(yù)作用 [J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2007,5(12):1177-1178

[7]陳鵬,賀翔鴿.丹參對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變患者視覺(jué)功能的改善與治療前后自由基水平變化 [J].中國(guó)臨床康復(fù),2005,9(25):157-158

[8]王蘭,李新榮,鄧湘蕾,等.丹參酮Ⅱ A對(duì)糖尿病大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激的作用 [J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2007,6(7):8-10

[9]宋懷方,林金華.復(fù)方丹參片對(duì)糖尿病超氧化物岐化酶及血液流變學(xué)的影響[J].藥學(xué)進(jìn)展,2004,24(30):170-172